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p70s6k在食管癌细胞株EC109紫杉醇耐药中的作用探讨

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p70S6K在食管癌细胞株EC109紫杉醇耐药中的作用探讨

作者：江雨琴川北医学院

学位级别：硕士

研究背景:食管癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤。治疗方法包括化疗、手术治疗、放疗。药物治疗是除手术之外主要治疗手段,但长期药物治疗会导致肿瘤患者产生耐药性。紫杉醇(paclitaxel,pTX)作为化疗一线用药,使得多种肿瘤治疗的有效率... 详细信息

研究背景:食管癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤。治疗方法包括化疗、手术治疗、放疗。药物治疗是除手术之外主要治疗手段,但长期药物治疗会导致肿瘤患者产生耐药性。紫杉醇(paclitaxel,pTX)作为化疗一线用药,使得多种肿瘤治疗的有效率得到了大幅度的提升,给众多肿瘤患者带来了希望,但其耐药性限制了它在临床上的广泛使用。研究报道,Akt/m TOR/p70s6k信号传导通路在肿瘤的发生和发展过程中存在异常激活。核糖体蛋白p70s6激酶(p70s6 kinase,p70s6k)的过度激活不仅可导致肿瘤的发生,且与多种恶性肿瘤的化疗耐药性有关。p70s6k磷酸化水平在一些肿瘤化疗抗性细胞系中存在异常表达。然而,截止目前为止,p70s6k磷酸化水平与食管癌紫杉醇耐药之间的关系尚不明确。本研究以构建的食道癌紫杉醇耐药细胞株EC109/pTX作为研究对象,分析紫杉醇耐药后对食管癌细株EC109的生物学行为影响。其次,探讨磷酸化的p70s6k(p-p70s6k)在食管癌紫杉醇耐药细胞株EC109/pTX中的表达,并以p70s6k作为靶点逆转紫杉醇耐药研究,为未来研究食管癌耐药治疗的靶标开拓新的视野。研究目的:1.探讨p70s6k磷酸化水平在食管癌紫杉醇耐药细胞中的表达情况,并分析其变化与紫杉醇耐药的相关性。2.探讨p70s6k功能抑制逆转pTX耐药,为临床上食管癌紫杉醇耐药研究开发新的治疗策略提供理论依据。研究方法:1.采用紫杉醇浓度梯度递增法持续诱导并建立食管癌紫杉醇耐药细胞EC109/pTX,显微镜下观察细胞的形态学变化,并使用CCk-8法检测pTX对细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)并计算耐药指数(resistance index,RI)。2.通过CCk-8实验及Transwell实验检测pTX耐药对EC109细胞增殖迁移能力的影响。3.通过Westernblot实验检测p70s6k磷酸化水平在紫杉醇食管癌耐药细胞中的表达情况。4.通过RNAi技术敲减p70s6k在EC109/pTX细胞中的表达,并应用CCk-8实验及Transwell实验检测pTX对p70s6k敲减的EC109/pTX细胞增殖迁移能力的影响。5.用p70s6k的特异性抑制剂pF-4708671与pTX联合处理EC109/pTX细胞,并用CCk-8法检测pTX对耐药细胞增殖能力的影响。研究结果:1.经过药物浓度梯度递增法持续诱导,获得了食道癌紫杉醇耐药细胞EC109/pTX,紫杉醇药物浓度为0.64μM。CCk-8法检测结果显示,食管癌细胞株EC109的IC50为0.057μM,耐药细胞EC109/pTX的IC50为1.826μM,并计算出EC109/pTX的RI为32。***-8实验及Transwell实验结果显示,与EC109细胞相比,EC109/pTX细胞增殖能力降低,迁移能力增强。*** blot实验结果显示,与亲本株相比,耐药株中p-p70s6k表达增加,差异具有统计学意义(pswell实验结果显示,EC109/pTX细胞敲减p70s6k后,与未敲减的细胞株相比,其增殖迁移能力降低。***-8实验结果显示,pTX联合pF-4708671处理耐药细胞株,其增殖能力显著降低。研究结论:1.采用紫杉醇浓度梯度递增法成功建立了食管癌紫杉醇耐药细胞株EC109/pTX。2.p70s6k(Thr389)磷酸化水平在食管癌紫杉醇耐药细胞株EC109/pTX中高表达。3.抑制p70s6k的表达和功能,可逆转EC109/pTX对紫杉醇耐药性。4.p70s6k磷酸化水平的增加可能与食道癌细胞株EC109对紫杉醇的耐药有关,p70s6k有望成为食管癌紫杉醇耐药治疗的靶点。

关键词：食管癌 p70s6k 紫杉醇耐药机制

p70s6k在IL-6诱导的头颈部肿瘤转移中的作用和机制

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p70S6K在IL-6诱导的头颈部肿瘤转移中的作用和机制

作者：吴丹丹南京医科大学

学位级别：硕士

头颈部肿瘤是常见恶性肿瘤,其中95%以上为鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNsCC）。多数患者确诊时已为晚期并伴随转移,淋巴结转移是影响HNsCC预后的一个主要因素。因此需要研究在HNsCC转移中起关键作用的信号分子... 详细信息

头颈部肿瘤是常见恶性肿瘤,其中95%以上为鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNsCC）。多数患者确诊时已为晚期并伴随转移,淋巴结转移是影响HNsCC预后的一个主要因素。因此需要研究在HNsCC转移中起关键作用的信号分子及其作用机制,为诊断和治疗提供有效的依据。白介素6（Interleukin-6,IL-6）在改变各种肿瘤行为中扮演着重要角色,包括肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤血管形成。在大多数恶性肿瘤中,血清IL-6水平升高是已知的作为预后不良的指标。已知多种刺激诱导IL-6基因的转录,例如RNA或DNA病毒的感染、细菌内毒素、脂多糖、炎症性细胞因子、肿瘤细胞坏死因子（TNF）、IL-1、血小板活化生长因子和干扰素（IFNs）等。近年来,以IL-6为代表的细胞因子在肿瘤方面的研究和应用已受到广泛关注,IL-6通过调节多条信号通路促进肿瘤的发生和发展,但是IL-6通过哪些途径促进HNsCC的转移仍待进一步研究。我们在不同转移潜能的HNsCC细胞株中,检测了IL-6的mRNA表达水平和EMT相关标记物的蛋白表达水平,发现高转移特性的HNsCC细胞株中IL-6mRNA水平明显高于低转移特性HNsCC细胞株,并且发生了EMT,同时伴有p70s6k和s6磷酸化蛋白和总蛋白水平的增高。接着,我们发现在低转移特性的HNsCC细胞株上给予IL-6处理,可诱导EMT,促进细胞的迁移,而且IL-6短时刺激可显著上调p70s6k、s6蛋白的磷酸化水平。结果提示IL-6诱导HNsCC发生EMT和促进细胞迁移,其作用机制可能与激活p70s6k及其下游信号分子有关。同时我们在IL-6短时刺激的蛋白样品上检测到AkT、ERk1/2和sTAT3的磷酸化水平也明显升高,这与已有报道IL-6激活pI3k/AkT、JAk/sTAT3、Ras/MApks信号通路一致。下面我们进一步研究了p70s6k在IL-6诱导的HNsCC转移中的作用。我们在低转移特性的细胞株上发现,转染编码p70s6k蛋白的质粒,上调p70s6k的表达,可诱导EMT和促进细胞迁移,作用与给予IL-6处理相似。接着,我们利用RNA干扰技术下调p70s6k表达,再给予IL-6处理,检测了EMT相关标记物E-cadherin等蛋白表达水平和细胞迁移能力的变化,结果显示阻抑p70s6k的表达可抑制EMT和细胞迁移,并且能抑制IL-6诱导的EMT和细胞迁移。我们又进一步研究了IL-6是通过什么途径激活p70s6k的。在低转移特性的HNsCC细胞株上,我们检测到在给予IL-6短时刺激后,pI3k/AkT/mTOR、sTAT3、MApk/ERk信号通路被激活,当给予pI3k抑制剂、mTORC1抑制剂、sTAT3抑制剂、MEk1/2抑制剂预处理,均可抑制IL-6诱导的p-p70s6k和p-s6的增高,提示p70s6k处于IL-6激活的这几条信号通路的下游。IL-6最主要的下游信号分子是sTAT3,我们发现高转移特性的686LN-M4e与686LN相比,sTAT3的磷酸化蛋白水平和总蛋白水平都明显增加。既往有研究报道sTAT3位于mTORC1的下游,p70s6k又是已知的mTORC1下游信号分子,它们在头颈部肿瘤中的关系尚不明确,为了明确sTAT3与p70s6k的调控关系,我们用siRNA下调sTAT3的表达,发现p-p70s6k水平降低,但是IL-6仍能上调p-sTAT3和p-p70s6k。用sTAT3的选择性抑制剂可下调p-p70s6k的水平,并抑制IL-6诱导的p-p70s6k的升高。此外,用siRNA下调p70s6k的表达,均可见p-sTAT3表达降低,但是对IL-6诱导的p-sTAT3的增高均未见明显的抑制作用。结果提示sTAT3和p70s6k存在相互调节,但IL-6诱导的p70s6k的激活位于sTAT3的下游。综合以上结果,我们的研究说明了IL-6可通过pI3k/AkT/mTOR、sTAT3、MApk/ERk信号转导通路激活p70s6k,诱导EMT和促进细胞迁移,可能参与了HNsCC的转移。本研究明确了IL-6促进HNsCC细胞发生EMT和促进细胞迁移的作用,并探索了它通过激活p70s6k的分子作用机制,研究结果可为进一步阐明HNsCC的转移提供新思路,为临床诊断提供新指标,为治疗提供新靶点。

关键词： p70s6k 白介素6 头颈部鳞状细胞癌上皮-间叶转化迁移

pI3k、p70s6k在胰岛素抵抗大鼠脂肪中的表达及其意义

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中国老年学杂志 2008年第6期28卷 559-561页

作者：王艳军尤雪娜赵丹姜苒华刘国良中国医科大学附属盛京医院内分泌科辽宁沈阳110004 辽阳糖尿病医院中国医科大学第一临床学院内分泌科

目的测定不同饮食喂养大鼠产生胰岛素抵抗(IR)的情况,观察大鼠脂肪中pI3k、p70s6k的表达及大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)和超敏C反应蛋白(hs-CRp)的变化。方法4周龄Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组,分别以普通、高糖、高脂、高糖高脂饲料... 详细信息

目的测定不同饮食喂养大鼠产生胰岛素抵抗(IR)的情况,观察大鼠脂肪中pI3k、p70s6k的表达及大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)和超敏C反应蛋白(hs-CRp)的变化。方法4周龄Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组,分别以普通、高糖、高脂、高糖高脂饲料喂养大鼠8w后,行高胰岛素-正常血糖钳实验,对大鼠IR程度进行评估,应用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中FFA及hs-CRp,分别用原位杂交、Western印迹方法检测大鼠脂肪中的pI3k、p70s6k。结果高脂、高糖高脂饲料组大鼠产生IR,普通、高糖饲料组未出现IR,IR组大鼠FFA及hs-CRp明显高于非IR大鼠(ppI3k表达在IR组大鼠明显低于非IR组大鼠、p70s6k的表达在IR组大鼠明显高于非IR组大鼠(ppI3k在IR组表达降低,p70s6k升高。

关键词：胰岛素抵抗(IR) 游离脂肪酸(FFA) 超敏C反应蛋白(hs-CRp) pI3k p70s6k

p70s6k通过诱导EMT促迸非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼耐药性的研究

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p70S6K通过诱导EMT促迸非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼耐药性的研究

作者：李敏南京医科大学

学位级别：硕士

肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。随着人们对肺癌发病机制认识的不断深入,以非小细胞肺癌(NsCLC)中的细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的“靶向治疗”取得了十分明显的疗效。近年来,以厄洛替尼为代表的EGFR-TkIs药物的研究和... 详细信息

肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。随着人们对肺癌发病机制认识的不断深入,以非小细胞肺癌(NsCLC)中的细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的“靶向治疗”取得了十分明显的疗效。近年来,以厄洛替尼为代表的EGFR-TkIs药物的研究和应用也已受到了广泛关注。然而,EGFR-TkIs在肺癌的治疗过程中出现的获得性耐药是目前临床亟待解决的问题。因此,阐明EGFR-TkIs获得性耐药的机制和发现新的靶点从而克服其耐药性是至关重要的。我们在厄洛替尼敏感的HCC827细胞株上,以及经体外长期给予厄洛替尼培养的HCC827耐药细胞株上,研究发现厄洛替尼耐药细胞株发生了上皮-间叶样转化(EMT),并伴有p70s6k信号通路上调。用小干扰RNA瞬时(siRNA)或稳定(慢病毒携带的shRNA)的下调p70s6k的表达,可以逆转EMT并增强其对厄洛替尼的敏感性。而且,我们在厄洛替尼敏感细胞株上外源性过表达p70s6k,诱导其发生了EMT,并促进了其对厄洛替尼的耐药。以上结果提示了p70s6k诱导的EMT促进了厄洛替尼的耐药性。进一步研究发现,p70s6k在厄洛替尼耐药细胞中高表达与Gsk3β下调p70s6k蛋白降解减少有关。我们进一步在裸鼠异体移植瘤模型上研究发现,下调p70s6k的表达可明显抑制HCC827耐药细胞肿瘤的生长。因此,我们的研究说明了在NsCLC细胞,p70s6k诱导的EMT促进了厄洛替尼获得性耐药性。我们的研究成果为增强厄洛替尼的靶向治疗效果,克服其耐药性提供了新的靶点和新思路。

关键词： p70s6k 耐药性 EMT NsCLC-Gsk3β

p70s6k在食管鳞癌中的表达及其在细胞增殖中作用的研究

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p70S6K在食管鳞癌中的表达及其在细胞增殖中作用的研究

作者：张艳郑州大学

学位级别：硕士

肿瘤是危害人体健康的重大疾病之一,而食管鳞癌是世界常见的六大癌症之一,其恶性程度高,五年存活率低于5%,在发展中国家极为常见,尤其是在我国河南省林县,其发病率和死亡率均很高,但是其确切的发病机制仍不清楚,不过许多实验研究证明哺... 详细信息

肿瘤是危害人体健康的重大疾病之一,而食管鳞癌是世界常见的六大癌症之一,其恶性程度高,五年存活率低于5%,在发展中国家极为常见,尤其是在我国河南省林县,其发病率和死亡率均很高,但是其确切的发病机制仍不清楚,不过许多实验研究证明哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin, mTOR）是肿瘤治疗中的重要靶点之一,并且在前期对食管鳞癌的研究中已证实,mTOR/p70s6k （70kDa ribosomal protein s6kinase）信号通路是处于异常激活状态的。由于mTOR的分子比较大,与其作用的蛋白也相对较多,因此本课题在前期的实验研究基础上,选择mTOR/p70s6k下游通路的一个重要靶点p70s6k作为研究对象,利用免疫组化、Western blotting、RT-pCR、MTT等方法,探讨磷酸化的p70s6k （p-p70s6k）在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌进程的相关性;并用shRNA干扰p70s6k的表达,检测干扰前后食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素敏感性的变化,为进一步寻找治疗食管鳞癌新的分子靶点打下基础。方法 1免疫组织化学收集临床食管鳞癌患者的组织标本,免疫组织化学法检测35例食管鳞癌患者的正常食管组织,癌旁组织和癌组织中mTOR和p-p70s6k的表达,并根据临床资料进行统计分析食管鳞癌中mTOR和p-p70s6k的蛋白表达与临床病理特征间的关系与意义。 2Western blotting Western blotting法检测食管鳞癌低分化细胞株EC1、EC9706和高分化细胞株Eca109中p70s6k及其磷酸化蛋白的表达情况,并观察在不同时间点雷帕霉素对二者表达的影响。 3RT-pCR和MTT p70s6k-shRNA转染食管鳞癌EC9706细胞,用适当浓度的嘌呤霉素筛选出稳定表达株,RT-pCR法检测干扰效果;MTT法测定干扰前后雷帕霉素对细胞增殖的影响。 4图像处理及统计学分析免疫组织化学的结果分析采用χ2检验,检验水准α=0.05;Western blotting和RT-pCR结果用Ipp6.0进行灰度分析,实验重复三次,应用spss13.0软件采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,p＜0.05具有统计学意义。结果 1食管鳞癌组织中mTOR及p-p70s6k的蛋白表达与临床生物学关系在食管鳞癌渐变过程中,mTOR蛋白在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为20%（3/15）、46.7%（7/15）、62.9%（22/35）,组间比较有明显差异（χ2=7.767,p＜0.05）,食管鳞癌组织中mTOR蛋白表达与肿瘤TNM分期密切相关（x2=9.121,p＜0.01）;p-p70s6k在正常黏膜组织.癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为33.3%（5/15）、73.3%（11/15）、74.3%（26/35）,其蛋白表达与肿瘤的淋巴结转移及TNM分期均密切相关（χ2=5.846及4.523;均p＜0.05）,组间比较有明显差异（x2=8.350,p＜0.05）,mTOR及p-p70s6k的表达呈正相关关系（γp=0.359,p=0.034）。 2食管鳞癌细胞中p70s6k的表达及雷帕霉素对其的影响 Westem blotting检测结果显示：p70s6k及p-p70s6k蛋白在三株食管鳞癌细胞中均有表达,p-p70s6k蛋白在低分化ECl和EC9706细胞中的表达明显高于高分化Eca109细胞的,雷帕霉素能够降低p-p70s6k的表达,并且具有时间依赖性。 3干扰p70s6k后EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性变化 RT-pCR法测定结果显示转染后EC9706细胞中mRNA的水平降低,差别具有统计学意义（p＜0.05）;MTT法测定结果显示p70s6k-shRNA干扰食管鳞癌EC9706细胞后细胞的增殖受到抑制,雷帕霉素处理后抑制作用增强,并且具有浓度依赖性。结论 1mTOR及p-p70s6k在食管鳞癌组织中的表达远高于其在相对应的癌旁组织及正常食管组织,且二者与食管鳞癌的生物学行为关系密切。提示mTOR及p-p70s6k高表达的食管鳞癌具有更强的侵袭能力,检测食管鳞癌中两者蛋白的表达有利于我们进一步地了解食管鳞癌的生物学行为,为食管鳞癌的早期诊断和治疗提供一个新的分子靶点;2p70s6k磷酸化水平与细胞的分化程度有关,高分化的细胞中p70s6k磷酸化水平低,低分化的细胞中p70s6k磷酸化水平高;雷帕霉素能够抑制p-p70s6k的表达,并且具有时间依赖性;3下调p70s6k

关键词：食管鳞癌 p70s6k 雷帕霉素 p70s6k-shRNA

抑制p70s6k对HsC-T6增殖活化的作用研究

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1062-1067页

作者：占书箱黄成马陶陶陈培杰李俊安徽医科大学药学院合肥230032 安徽医科大学肝病研究所合肥230032

目的研究抑制核糖体40s小亚基s6蛋白激酶(p70s6k)的表达对大鼠肝星状细胞株(HsC-T6)增殖活化的影响。方法建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,观察磷酸化p70s6k在纤维化肝组织中的表达变化;利用雷帕霉素抑制p70s6k蛋白表达,及靶向p70s6k基因... 详细信息

目的研究抑制核糖体40s小亚基s6蛋白激酶(p70s6k)的表达对大鼠肝星状细胞株(HsC-T6)增殖活化的影响。方法建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,观察磷酸化p70s6k在纤维化肝组织中的表达变化;利用雷帕霉素抑制p70s6k蛋白表达,及靶向p70s6k基因的siRNA预处理HsC-T6,再添加重组小鼠血小板衍生生长因子(pDGFBB)诱导,观察HsC-T6的增殖活化情况;利用Western blot、RT-pCR检测p70s6k、p-p70s6k、α-sMA、Collagen I的蛋白和基因表达水平。结果 CCl4诱导大鼠肝纤维化模型组磷酸化p70s6k蛋白明显升高;雷帕霉素预处理HsC-T6,明显降低了p70s6k的磷酸化水平,并抑制了pDGF-BB诱导的细胞增殖及α-sMA、Collagen I的表达;siRNA转染HsC-T6,在基因和蛋白水平抑制了p70s6k的表达,同时减少了pDGF-BB诱导的α-sMA、Collagen I、p-p70s6k的表达。结论用siRNA和雷帕霉素阻断p70s6k的表达,在一定程度上可以抑制HsC-T6的增殖和活化,为肝纤维化的防治研究提供新的思路和靶点。

关键词：肝星状细胞株 p70s6k siRNA 雷帕霉素肝纤维化

4EBp1和p70s6k在不同宫颈病变组织中的表达及其意义

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中国妇幼保健 2013年第12期28卷 1959-1962页

作者：朱旭明王鲁文董延华张秀娟马双玲郑州大学第三附属医院妇产科河南郑州450052

目的:研究真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(4EBp1)及核糖体40s小亚基s6蛋白激酶(p70s6k)在不同宫颈病变组织中的表达水平及其在宫颈癌发生、发展中的作用。方法:采用免疫组化sp法及pT-pCR法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈... 详细信息

目的:研究真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(4EBp1)及核糖体40s小亚基s6蛋白激酶(p70s6k)在不同宫颈病变组织中的表达水平及其在宫颈癌发生、发展中的作用。方法:采用免疫组化sp法及pT-pCR法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈组织中的4EBp1和p70s6k表达水平。结果:在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中,4EBp1和p70s6k蛋白及mRNA水平表达依次增高,且3组比较差异有统计学意义(pp1和p70s6k在宫颈癌中的表达水平呈正相关(r=0.354,pp1和p70s6k在宫颈癌发生、发展中起促进作用,二者可作为宫颈癌诊断及靶向治疗的重要生物学标记物。

关键词：宫颈癌 4EBp1 p70s6k RT—pCR 免疫组织化学

4E-Bp1、p70s6k在RAD001抑制胃癌MkN-28、N-87细胞生长中作用的实验研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2009年第4期29卷 504-507页

作者：刘莹朱祖安崔涛徐州医学院病理教研室江苏徐州221002 徐州医学院附属医院消化内科江苏南京221002

目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-Bp1)、核糖体40s小亚基s6k蛋白激酶p70s6k在RAD001抑制胃癌MkN-28、N-87细胞生长中的作用。方法:体外培养人胃癌MkN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blo... 详细信息

目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-Bp1)、核糖体40s小亚基s6k蛋白激酶p70s6k在RAD001抑制胃癌MkN-28、N-87细胞生长中的作用。方法:体外培养人胃癌MkN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70s6k、4E-Bp1蛋白表达及磷酸化情况。结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MkN-28,N-8724h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72h,抑制作用逐渐增强。流式细胞术结果显示RAD001作用24h后MkN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0～G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感。Western-blot结果显示RAD001作用24h后MkN-28、N-87的4E-Bp1和p70s6k表达下降,同时去磷酸化。结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-Bp1及p70s6k的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用。

关键词： mTOR MkN-28 N-87 p70s6k p-p70s6k 4E—-Bp1 p-4EBp1

胰岛素抵抗大鼠肌肉中IRs-1、p70s6k的表达

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中国现代医学杂志 2009年第11期19卷 1617-1619,1624页

作者：王艳军孙巍巍张丽霏姜苒华刘国良中国医科大学附属盛京医院内分泌科辽宁沈阳110004 辽阳糖尿病医院辽宁辽阳111000 中国医科大学第一临床学院内分泌科辽宁沈阳110001

目的应用不同饮食喂养大鼠,测定大鼠产生胰岛素抵抗(IR)的情况,观察大鼠骨骼肌IRs-1、p70s6k的表达及大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)和超敏C反应蛋白(hsCRp)的变化。方法4周龄Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组,分别以普通饲料、高糖饲料、高... 详细信息

目的应用不同饮食喂养大鼠,测定大鼠产生胰岛素抵抗(IR)的情况,观察大鼠骨骼肌IRs-1、p70s6k的表达及大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)和超敏C反应蛋白(hsCRp)的变化。方法4周龄Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组,分别以普通饲料、高糖饲料、高脂饲料、高糖高脂饲料喂养大鼠8周后,行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验,对大鼠胰岛素抵抗程度进行评估,应用酶联免疫吸附方法检测大鼠血清中游离脂肪酸及超敏C反应蛋白,分别用Western-Blot、Rt-pCR检测大鼠骨骼肌中的IRs-1、p70s6k。结果高脂饲料、高糖高脂饲料组大鼠产生胰岛素抵抗,普通饲料、高糖饲料组未出现胰岛素抵抗,胰岛素抵抗组大鼠游离脂肪酸及超敏C反应蛋白明显高于非胰岛素抵抗大鼠(ps-1在胰岛素抵抗组大鼠明显低于非胰岛素抵抗组大鼠、p70s6k在胰岛素抵抗组大鼠明显高于非胰岛素抵抗组大鼠体重。结论高脂饲料、高糖高脂饲料喂养大鼠8周可成功的诱导大鼠产生胰岛素抵抗,胰岛素抵抗的产生可能与肥胖、高游离脂肪酸及炎症反应有关。IRs-1在胰岛素抵抗大鼠中的表达降低,p70s6k升高。

关键词：胰岛素抵抗 FFA hsCRp IRs-1 p70s6k