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mTOR信号通路蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

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中国肿瘤生物治疗杂志 2011年第1期18卷 75-79页

作者：李学元贾爱华任玉波李鑫马翔宇张连群张学广李新钢聊城市人民医院神经外科山东聊城252000 山东大学齐鲁医院神经外科山东济南250012 聊城市人民医院病理科山东聊城252000

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义。方法:选取山东大学齐鲁医院和聊城市人民医院神经外科2007年7月至2010年5月间手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤... 详细信息

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义。方法:选取山东大学齐鲁医院和聊城市人民医院神经外科2007年7月至2010年5月间手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤石蜡标本87例(Ⅰ～Ⅱ级27例、Ⅲ级24例、Ⅳ级36例),应用免疫组织化学法检测胶质瘤组织中mTOR信号通路关键蛋白pAkT、pmTOR和p-p70s6k的表达,分析它们与胶质瘤患者临床病理特征的关系。结果:pAkT、pmTOR和p-p70s6k在各级胶质瘤中的阳性率分别为:Ⅰ～Ⅱ级70.4%(19/27)、Ⅲ级70.8%(17/24)、Ⅳ级75.0%(27/36),Ⅰ～Ⅱ级77.8%(21/27)、Ⅲ级75.0%(18/24)、Ⅳ级72.2%(26/36),Ⅰ～Ⅱ级63.0%(17/27)、Ⅲ级70.8%(17/24)、Ⅳ级80.6%(29/36);各阳性表达率间无明显差异(p>0.05),但它们的表达水平均随着胶质瘤病理级别的增高而升高(p=0.0001,0.0063,0.0001),而与患者的性别、年龄、肿瘤大小和术前kps评分等参数无关。pAkT、pmTOR和p-p70s6k三者共表达于42例胶质瘤组织中,在其余45例中仅有一种或两种表达。结论:mTOR信号通路蛋白在胶质瘤的发生、发展中起着重要的作用,可能是胶质瘤治疗的潜在靶点。

关键词：胶质瘤 mTOR AkT p70s6k 信号转导通路

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在不同发育阶段sD大鼠睾丸中的表达及作用

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中国细胞生物学学报 2012年第3期34卷 218-225页

作者：许皓陈雪梅丁裕斌何俊琳王应雄杨德辉刘学庆重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室重庆400016

精子发生是男性生殖中的主要过程,精原细胞的不断分裂增殖又保证了精子发生的顺利进行。随着年龄的不断增长,男性精子的数量、质量出现下降趋势。mTOR信号转导通路在细胞增殖分化中发挥着中心调控作用,因此,mTOR信号通路可能在精子发生... 详细信息

精子发生是男性生殖中的主要过程,精原细胞的不断分裂增殖又保证了精子发生的顺利进行。随着年龄的不断增长,男性精子的数量、质量出现下降趋势。mTOR信号转导通路在细胞增殖分化中发挥着中心调控作用,因此,mTOR信号通路可能在精子发生过程中有着重要的地位。为了探明mTOR信号通路与精子发生的关系,首先,通过sD大鼠睾丸组织切片的免疫组化,发现mTOR是在生精小管的精原细胞胞浆中表达;其次,采用FQ-pCR检测mTOR mRNA在sD大鼠睾丸中的表达。结果显示,80周龄组mTOR的转录与8周龄组相比差异显著。最后利用Western blot检测出mTOR蛋白的表达及其对下游靶蛋白p70s6k的磷酸化效率均随年龄的增长逐渐下降。同时,在用雷帕霉素处理8周龄sD大鼠中,发现精子数量减少,p70s6k磷酸化效率降低并伴随生精小管萎缩和空泡化。通过这些结果,可以看出mTOR信号转导通路可能在精子发生中发挥着重要作用。

关键词：睾丸精子发生 mTOR 雷帕霉素 p70s6k

p70 s6激酶在Hela细胞的不同细胞周期中表达的研究

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中国血液流变学杂志 2007年第2期17卷 188-189页

作者：刘奕李宁王雪张文君郭亚峰于秉治中国医科大学口腔医学院辽宁沈阳110002 中国医科大学基础医学院辽宁沈阳110002

目的研究p70 s6激酶信号通路在Hela细胞的不同细胞周期中的表达。方法用Western印迹方法对同步化的Hela细胞不同细胞周期的p70 s6激酶(p70 s6k)的α1、α2、β1、β2不同亚型的表达进行了研究。结果免疫印迹的结果显示M期p70 s6k的α1、... 详细信息

目的研究p70 s6激酶信号通路在Hela细胞的不同细胞周期中的表达。方法用Western印迹方法对同步化的Hela细胞不同细胞周期的p70 s6激酶(p70 s6k)的α1、α2、β1、β2不同亚型的表达进行了研究。结果免疫印迹的结果显示M期p70 s6k的α1、α2、β1、β2均有增加。结论p70 s6很可能在Hela细胞的生长中起重要的调节作用。

关键词： Hela细胞 p70s6k 细胞周期

西罗莫司酯化物对肾癌细胞系786-0的抑制作用及其机制初探

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西南大学学报（自然科学版） 2014年第2期36卷 1-6页

作者：胡昌华李彦杰刘海洋袁雪邹祥西南大学药学院现代生物医药研究所重庆400715 重庆药物过程与质量控制工程技术中心重庆400715

目的:研究西罗莫司酯化物(Temsirolimus)对肾癌细胞786-0增殖与凋亡的影响,并探讨分子作用机制.方法:采用显微镜形态学观察和MTT法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪分析用药48h后肾癌细胞周期变化和细胞凋亡率;Western免疫印迹法检测p70s6k,... 详细信息

目的:研究西罗莫司酯化物(Temsirolimus)对肾癌细胞786-0增殖与凋亡的影响,并探讨分子作用机制.方法:采用显微镜形态学观察和MTT法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪分析用药48h后肾癌细胞周期变化和细胞凋亡率;Western免疫印迹法检测p70s6k,4EBp-1蛋白水平表达变化.结果:西罗莫司酯化物作用786-0细胞的IC50=3.31μmol/L;给药48h后,细胞明显阻滞于G0/G1期,G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡率增加;肾癌786-0细胞中p70s6k和4EBp-1蛋白的磷酸化水平明显下降.结论:西罗莫司酯化物能显著抑制肾癌细胞786-0的细胞增殖作用,阻滞细胞周期于G0/G1期且诱导细胞凋亡,其机制可能与p70s6k和4EBp-1磷酸化相关.

关键词：西罗莫司酯化物肾癌细胞增殖抑制细胞凋亡细胞周期 p70s6k 4EBp 1

盐度梯度介导mTOR信号通路对尼罗罗非鱼生长的影响

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上海海洋大学学报 2014年第6期23卷 820-825页

作者：王飞庄青青梁从飞颜标赵金良上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306

mTOR信号通路是动物生长发育的重要调控通路之一。以尼罗罗非鱼为实验材料,研究了不同盐度梯度对尼罗罗非鱼生长的影响,以及mTOR通路下游调节因子p70s6k和4ebp1的mRNA与蛋白表达水平变化。30 d养殖结果显示,盐度增加对尼罗罗非鱼生长具... 详细信息

mTOR信号通路是动物生长发育的重要调控通路之一。以尼罗罗非鱼为实验材料,研究了不同盐度梯度对尼罗罗非鱼生长的影响,以及mTOR通路下游调节因子p70s6k和4ebp1的mRNA与蛋白表达水平变化。30 d养殖结果显示,盐度增加对尼罗罗非鱼生长具有明显抑制作用,0、15、20、25盐度下,尼罗罗非鱼日均增重率分别为(0.48±0.13)g/d、(0.31±0.09)g/d、(0.14±0.08)g/d、(0.09±0.03)g/d。荧光定量pCR显示,p70s6k mRNA相对表达量随着盐度梯度升高而下降,0盐度组中表达量最高,显著高于其他盐度组(pp1 mRNA相对表达量随着盐度梯度升高而升高,0盐度组中表达量最低,25盐度组最高,0盐度组与25盐度组间差异显著(pstern blot结果显示,0盐度组中p70s6k蛋白含量显著大于其他高盐度组,而25盐度组中4ebp1蛋白含量显著大于其余低盐度组(p<0.05)。结果表明,盐度可能通过介导mT OR信号通路参与尼罗罗非鱼的生长调节。

关键词：尼罗罗非鱼盐度生长 p70s6k 4ebp1

罗格列酮对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用

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中华肾脏病杂志 2010年第6期26卷 442-447页

作者：刘春艳梅长林袁莉张懿付莉莉蔡厚安第二军医大学上海长征医院肾内科解放车肾脏病研究所上海200003

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ppARγ）激动剂罗格列酮对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADpkD）囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 MTT法检测罗格列酮对ADpkD囊肿衬里上皮细胞系（WT9-12）细胞增殖的作用;流式细... 详细信息

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ppARγ）激动剂罗格列酮对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADpkD）囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 MTT法检测罗格列酮对ADpkD囊肿衬里上皮细胞系（WT9-12）细胞增殖的作用;流式细胞术检测罗格列酮对WT9-12细胞周期及凋亡的影响;Western印迹法检测罗格列酮对哺乳类动物的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70核糖体s6激酶（p70s6k）信号通路的影响.给予ppARγ特异性抑制剂GW9662及ppARγsiRNA瞬时转染WT9-12细胞,检测罗格列酮对细胞增殖及对mTOR信号通路的作用是否为ppARy依赖性的.结果罗格列酮抑制WT9-12细胞增殖,此作用在0～200 μmol/L范围内呈剂量依赖性及时间依赖性,作用72 h的50%抑制率浓度为100μmol/L.细胞周期分析显示,罗格列酮（50、100 μmol/L）作用后,G0/G1期细胞较对照组显著增多（65.43%、64.02%比49.65%,p＜0.05）.50、100 μmol/L罗格列酮对细胞凋亡影响不大,高浓度（200 μmol/L）罗格列酮可使凋亡细胞达6%（正常对照组为4%）.罗格列酮可呈时间及剂量依赖性下调WT9-12细胞p70s6k磷酸化表达,而对mTOR及其另一个下游4E结合蛋白1（4E-Bp1）磷酸化水平无明显影响.加入GW9662及转染ppARγsiRNA阻断ppARγ表达后,可部分阻断罗格列酮对p70s6k磷酸化的影响（p＜0.01）.结论罗格列酮可抑制ADpkD囊肿衬里上皮细胞增殖和阻滞细胞周期,可不依赖于mTOR途径直接下调p70s6k磷酸化表达.罗格列酮对ADpkD囊肿衬里上皮细胞p70s6k磷酸化的影响是ppARγ依赖性的.

关键词：多囊肾,常染色体显性细胞周期细胞凋亡罗格列酮哺乳类动物的雷帕霉素靶蛋白 p70s6k

mTOR信号转导通路与三氧化二砷反应关联的研究

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中国实验血液学杂志 2010年第1期18卷 54-56页

作者：姜飞刘卓刚中国医科大学附属盛京医院血液科辽宁沈阳110001

本研究探讨三氧化二砷(ATO)作用与mTOR信号通路的联系。应用Western blot方法检测k562/DNR细胞经ATO处理不同时间后细胞中pmTOR、pAkT及pp70s6k的表达;应用流式细胞术检测k562/DNR细胞经ATO联合LY294002或雷帕霉素处理120小时后细胞的... 详细信息

本研究探讨三氧化二砷(ATO)作用与mTOR信号通路的联系。应用Western blot方法检测k562/DNR细胞经ATO处理不同时间后细胞中pmTOR、pAkT及pp70s6k的表达;应用流式细胞术检测k562/DNR细胞经ATO联合LY294002或雷帕霉素处理120小时后细胞的凋亡率。结果表明:k562/DNR细胞经ATO处理60分钟及120分钟时pmTOR表达高于对照组(p60分钟时pAkT表达高于对照组(p60分钟时pp70s6k表达高于对照组(pk562/DNR细胞经ATO联合LY294002或雷帕霉素处理后细胞凋亡率高于对照组(pk562/DNR细胞经一定浓度的ATO处理后细胞中mTOR信号通路被激活;mTOR信号通路抑制剂可增强ATO触发k562/DNR细胞凋亡的作用。

关键词：信号转导通路 mTOR AkT p70s6k 三氧化二砷

高压氧对大鼠脑出血后脑水肿的影响及机制研究

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高压氧对大鼠脑出血后脑水肿的影响及机制研究

作者：施振华复旦大学

学位级别：硕士

第一部分高压氧治疗对大鼠急性脑出血后脑水肿的影响目的：研究高压氧治疗对大鼠急性脑出血后脑水肿的影响及高压氧治疗对铁离子和凝血酶所致脑水肿的影响。方法：本实验采用雄性sD大鼠,共60只,体重300～350g,由复旦大学实验动物科学部... 详细信息

第一部分高压氧治疗对大鼠急性脑出血后脑水肿的影响目的：研究高压氧治疗对大鼠急性脑出血后脑水肿的影响及高压氧治疗对铁离子和凝血酶所致脑水肿的影响。方法：本实验采用雄性sD大鼠,共60只,体重300～350g,由复旦大学实验动物科学部提供。实验中高压氧治疗(HBO治疗)方案采用3.0标准大气压维持1h(加压时间为15 min,减压时间为25～30 min)。对照组假治疗方案采用1.0标准大气压的空气中维持1 h。实验分为三个部分：1.12只大鼠基底节内立体定向注射100μl自体股动脉血制成脑出血模型,模型制作1 h后大鼠接受HBO治疗一次(HBO组,n=6)或者假治疗一次(对照组,n=6),脑出血模型制作24 h后大鼠断头取脑,采用干湿重法测定脑组织水含量,另取12只大鼠基底节内立体定向注射100μl自体股动脉血制成脑出血模型,于脑出血模型制作后1 h后给予HBO治疗,24 h和48 h后分别再给予一次HBO治疗(HBO组,n=6),对照组大鼠(n=6)分别在对应时间点给予假治疗,两组大鼠均于脑出血模型制作72 h后断头取脑,采用干湿重法测定脑组织水含量。2.12只大鼠基底节内立体定向注射鼠凝血酶(5U／50μl生理盐水)1 h后接受HBO治疗一次(HBO组,n=6)或者假治疗一次(对照组,n=6),24 h后大鼠断头取脑,采用干湿重法测定脑组织水含量值。另12只大鼠基底节内立体定向注射FeCl2(1 mM,50ul)1 h后接受HBO治疗一次(HBO组,n=6)或者假治疗一次(对照组,n=6),24 h后断头取脑,采用干湿重法测定脑组织水含量。3.6只大鼠基底节内立体定向注射100μl自体股动脉全血制成脑出血模型1h后接受HBO治疗一次(HBO组,n=3)或者假治疗一次(对照组,n=3),脑出血模型制作24 h后处死大鼠,取血肿周围组织匀浆后采用Westernblot法检测HO-1蛋白的表达情况。另6只大鼠基底节内立体定向注射100ul自体股动脉全血制成脑出血模型1 h后接受HBO治疗一次(HBO组,n=3)或者假治疗一次(对照组,n=3),脑出血模型制作24 h后处死大鼠,取脑组织切片后行HO-1的免疫组织化学染色。实验数据的统计学分析采用stata7.0统计软件进行,脑组织水含量数据和Western blot检测所得蛋白条带灰度像素值采用均数±标准差(x±s)表示,以pp6±0.8%,两组间无显著性差异(p>0.05)。3.基底节内注射凝血酶(5U／50μl生理盐水)1 h后给予单次HBO治疗组大鼠和对照组大鼠右侧(注射凝血酶侧)基底节组织水含量分别为84.5±1.0%和84.6±1.4%,两组间无显著性差异(p>0.05)。4.基底节内注射铁离子(Fecl2 1 mM,50μl)24 h后,后给予单次HBO治疗组大鼠右侧(注射铁离子侧)基底节组织与皮层组织水含量分别为84.9±0.9%和82.8±1.0%,均显著高于对照组大鼠右侧(注射铁离子侧)基底节组织与皮层组织水含量(分别为82.1±1.9%和81.2±0.7%,pp<0.05),免疫组化染色显示HBO组大鼠基底节组织内HO-1免疫活性细胞明显少于对照组。结论：1.脑出血后1 h给予单次HBO治疗显著减轻大鼠脑出血24 h后脑水肿。单次HBO治疗不能显著减轻凝血酶所致脑水肿且显著加重铁离子所致脑水肿。提示单次HBO治疗减轻脑出血后24 h后脑水肿并非通过减轻凝血酶和铁离子所致脑水肿起作用的。脑出血后单次HBO治疗减轻脑出血后血肿周围组织内HO-1蛋白水平,这可能与脑出血后单次HBO治疗减轻脑出血24 h后脑水肿相关。2.脑出血后每天一次连续三天HBO治疗既未能显著减轻也未能显著加重脑出血后72 h脑水肿,表明脑出血后急性期给予HBO治疗对脑出血后脑水肿无显著影响,可能与出血后二至三天内血肿释放铁离子等血红蛋白降解产物,而HBO治疗显著加重了铁离子所致脑水肿有关,本

关键词：脑出血脑水肿高压氧预处理 p44/42 MApk p70s6k 血红素加氧酶-1 炎症反应细胞凋亡

miR-181b通过自噬调节机制影响ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成

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miR-181b通过自噬调节机制影响ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成

作者：董轶青岛大学

学位级别：硕士

目的:微小RNA181b(miR-181b)在动脉粥样硬化发生中发挥重要调节作用,自噬调节途径参与动脉粥样硬化形成,本研究探讨miR-181b是否通过调节自噬相关靶蛋白参与动脉粥样硬化发展。方法:(1)40只6周龄的spF级雄性ApoE小鼠,先给予普通饲料喂养... 详细信息

目的:微小RNA181b(miR-181b)在动脉粥样硬化发生中发挥重要调节作用,自噬调节途径参与动脉粥样硬化形成,本研究探讨miR-181b是否通过调节自噬相关靶蛋白参与动脉粥样硬化发展。方法:(1)40只6周龄的spF级雄性ApoE小鼠,先给予普通饲料喂养2周,2周后采用右侧颈总动脉套置硅胶管环方法诱导ApoE小鼠中颈动脉粥样硬化斑块形成,并换用高脂饲料(HFD;0.25%胆固醇+15%脂肪)喂食8周。(2)通过尾静脉注射miR-181b慢病毒载体构建其过表达(miR-181bOE)及低表达(miR-181bkD)模型。在高脂饲料喂食的8周过程中,小鼠每周3次尾静脉注射生理盐水(对照)或miR-181b慢病毒载体。小鼠在8周龄分为4组,每组10只小鼠,分别是对照组(ApoE+高脂饮食+假手术组+10μl生理盐水)、模型组(ApoE+高脂饮食+手术+10μl生理盐水)、miR-181b过表达组(OE组)(ApoE+高脂饮食+手术+10μl miR181b-LV,滴定至2×10TU/每只鼠)和miR-181b敲低组(ApoE+高脂饮食+手术+10μl miR181b-RNAi-LV,滴定至2×10TU/每只鼠)。(3)分离并剪断ApoE小鼠的股动脉进行取血,检测每只ApoE小鼠血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的含量。(4)ApoE小鼠取血后处死,分离取出套管侧颈总动脉,固定后做石蜡切片,HE染色,应用光学显微镜观察每组血管壁结构的变化。(5)离体的套管侧颈总动脉经固定后,做超薄切片并染色,应用透射电镜观察每组小鼠颈总动脉组织巨噬细胞的超微结构。(6)提取各组ApoE小鼠套管侧颈总动脉组织中的总蛋白,应用Western blot检测每组小鼠颈总动脉组织中自噬相关蛋白的表达。结果:(1)各组ApoE小鼠血浆中总胆固醇,三酰甘油,低密度脂蛋白胆固醇水平无显著差异。(2)组织病理学观察显示,与模型组相比,miR-181bkD组中斑块最大狭窄部位面积(0.43±0.08μmvs.0.71±0.13μm,图1;ps.0.85±0.11μm;图1;ps.0.71±0.13μm,图1;ps.0.85±0.11μm;图1;pkD动脉粥样硬化斑块中自噬体显著高于模型组,而且可见大量自噬溶酶体。(4)Western blot结果显示,MiR-181bOE下调LC3-II的表达,上调p70s6k表达,抑制自噬体形成。相反,miR-181bkD上调LC3-II的表达,下调p70s6k表达,促进自噬体形成。结论:miR-181b可以通过正性调节mTOR信号通路的下游分子p70s6k的表达,负性调节自噬,进而促进了动脉粥样硬化斑块的形成。

关键词：动脉粥样硬化自噬 miR-181b p70s6k