检索结果-南通市图书馆

293T细胞中sqstm1/p62-GFp的表达及其与LC3在诱导自噬状态下的定位分布

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基因组学与应用生物学 2021年第1期40卷 400-405页

作者：游金杨光铭徐丽明罗达卢春花广西大学生命科学与技术学院南宁530004 广西大学医学院南宁530004

为探究sqstm1/p62蛋白在细胞发生自噬时的定位,以人肺腺癌A549细胞的cDNA为模板,pCR扩增sqstm1基因(编码p62蛋白)并将其插入pEGFp-N1真核表达质粒。将重组质粒转染进入人胚肾293T细胞中表达p62绿色荧光融合蛋白(GFp-p62),利用Earle’s... 详细信息

为探究sqstm1/p62蛋白在细胞发生自噬时的定位,以人肺腺癌A549细胞的cDNA为模板,pCR扩增sqstm1基因(编码p62蛋白)并将其插入pEGFp-N1真核表达质粒。将重组质粒转染进入人胚肾293T细胞中表达p62绿色荧光融合蛋白(GFp-p62),利用Earle’s盐平衡溶液饥饿诱导细胞自噬,Western blotting和激光共聚焦显微镜检测GFp-p62的表达及其与自噬相关蛋白LC3在自噬细胞中的定位。结果发现,重组载体pEGFp-N1-p62转染293T细胞后,293T细胞能高效表达GFp-p62融合蛋白,内源性p62所占细胞内总p62比例很低。饥饿诱导后细胞自噬体形成,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例明显增高,p62蛋白表达下调。同时还发现,GFp-p62在自噬细胞中仅定位于大多数自噬体且与LC3共定位,小部分自噬体及自噬体以外区域没有明显GFp-p62分布。本研究建立了一种通过p62-GFp与LC3的共定位检测人胚肾293T细胞自噬时p62蛋白和LC3聚集体的有效方法,提示了使用内源性p62低表达细胞作为研究p62和细胞自噬的优势,也将有助于开展关于p62在细胞中定位与其生物学功能关系的研究工作。

关键词： p62/sqstm1 LC3 293T 细胞自噬

肠道病毒EV71裂解sqstm1/p62以影响宿主Ⅰ型干扰素产生的分子机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

肠道病毒EV71裂解SQSTM1/p62以影响宿主Ⅰ型干扰素产生的分子机制...

The role of sequestosome 1/p62 protein in amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia pathogenesis

第九届全国免疫学学术大会

作者：裴彬赵振东中国医学科学院病原生物学研究所

背景:肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的重要病原体。自2008年安徽阜阳爆发手足口病疫情后,其年发病率稳居我国丙类传染病之首。EV71引起的手足口病具有病情重、致死率高的特点,且目前尚无特异性抗EV71药物。EV71致病和免疫保护机制... 详细信息

背景:肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的重要病原体。自2008年安徽阜阳爆发手足口病疫情后,其年发病率稳居我国丙类传染病之首。EV71引起的手足口病具有病情重、致死率高的特点,且目前尚无特异性抗EV71药物。EV71致病和免疫保护机制不清限制了EV71抗病毒药物的研发。目的:本课题拟对EV71拮抗天然免疫的新机制进行研究,为研制EV71抗病毒药物提供理论基础。方法和结果:前期研究发现手足口病的另一病原体柯萨奇病毒B3(CVB3)可以导致自噬受体p62的裂解。通过Western blot检测EV71感染细胞后细胞内源和外源转染p62的表达水平和裂解片段,我们发现EV71同CVB3类似也可产生约30 kD的裂解片段。利用胞外酶解法和外源转染EV71 2A,确定为EV7 1的2A裂解p62且裂解位点位于241位甘氨酸。通过对裂解位点所在结构域的分析,该位点位于TRAF6与p62的互作位点,提示p62的裂解可能影响TRAF6的活化从而限制Ⅰ型IFN的激活。利用外源转染RIG-I N端或感染仙台病毒激活细胞Ⅰ型IFN产生,通过检测细胞内IFN-β报告质粒的激活情况和非变性电泳检测IRF3二聚体的形成情况,发现干扰内源p62的表达后,敲减p62的细胞较正常细胞胞内IFN-β的表达下调,IRF3的二聚化减弱,说明干扰p62的表达影响了Ⅰ型IFN的活化,提示了EV71裂解p62是EV71拮抗宿主天然免疫的潜在新机制。结论:***71 2A导致自噬受体p62的裂解,且裂解位点位于241甘氨酸;2.干扰p62的表达会限制Ⅰ型IFN的活化;***71裂解p62是病毒拮抗细胞天然免疫应答的潜在新机制。

关键词： p62/sqstm1 EV71 2Apro IFN-β

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

Neural Regeneration Research 2020年第12期15卷 2186-2194页

作者： Adriana Delice Foster Sarah Lyn Rea Harry perkins Institute of Medical Research University of Western Australia perron Institute for Neurological and Translational Science Centre for Neuromuscular and Neurological DisordersThe University of Western AustraliaNedlandsWestern AustraliaAustralia Centre for Molecular Medicine and Innovative Therapeutics Murdoch University Murdoch Western Australia Australia

Amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal lobar degeneration are multifaceted diseases with genotypic,pathological and clinical *** such overlap is the presence of sqstm1/p62 *** traditionally mutations manifesting in the ubiquitin-associated domain of p62 were associated with paget’s disease of bone,mutations affecting all functional domains of p62 have now been identified in amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal lobar degeneration patients.p62 is a multifunctional protein that facilitates protein degradation through autophagy and the ubiquitin-proteasome system,and also regulates cell survival via the Nrf2 antioxidant response pathway,the nuclear factor-kappa B signaling pathway and *** in these signaling and protein degradation pathways have been observed in amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal lobar degeneration,and mutations that affect the role of p62 in these pathways may contribute to disease *** this review we discuss the role of p62 in these pathways,the effects of p62 mutations and the effect of mutations in the p62 modulator TANK-binding kinase 1,in relation to amyotrophic lateral sclerosis-frontotemporal lobar degeneration pathogenesis.

关键词： aggregate/inclusion body formation amyotrophic lateral sclerosis-frontotemporal lobar degeneration autophagy cell signaling mitophagy p62/sqstm1 protein degradation

HDAC6 regulates lipid droplet turnover in response to nutrient deprivation via p62-mediated selective autophagy

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Genetics and Genomics 2019年第4期46卷 221-229页

作者： Yan Yan Hao Wang Chuanxian Wei Yuanhang Xiang Xuehong Liang Chung-Weng phang Renjie Jiao Sino-French Hoffmann Institute School of Basic Medical SciencesGuangzhou Medical University The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University State Key Laboratory of Brain and Cognitive Science Institute of BiophysicsThe Chinese Academy of Sciences Department of Chemistry and Biology National University of Defense Technology

Autophagy has been evolved as one of the adaptive cellular processes in response to stresses such as nutrient deprivation. Various cellular cargos such as damaged organelles and protein aggregates can be selectively degraded through autophagy. Recently, the lipid storage organelle, lipid droplet(LD), has been reported to be the cargo of starvation-induced autophagy. However, it remains largely unknown how the autophagy machinery recognizes the LDs and whether it can selectively degrade LDs. In this study, we show that Drosophila histone deacetylase 6(dHDAC6), a key regulator of selective autophagy, is required for the LD turnover in the hepatocyte-like oenocytes in response to starvation. HDAC6 regulates LD turnover via p62/sqstm1(sequestosome 1)-mediated aggresome formation, suggesting that the selective autophagy machinery is required for LD recognition and degradation. Furthermore, our results show that the loss of dHDAC6 causes steatosis in response to starvation. Our findings suggest that there is a potential link between selective autophagy and susceptible predisposition to lipid metabolism associated diseases in stress conditions.

关键词： HDAC6 Lipid droplets Metabolic adaption Drosophila p62/sqstm1 Selective autophagy

内皮-单核细胞激活多肽对人U118胶质瘤细胞自噬的影响及机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药理学通报 2013年第7期29卷 922-926页

作者：刘丽波孟繁杰薛一雪刘云会中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院神经外科辽宁沈阳110004

目的研究内皮-单核细胞激活多肽(EMAp-Ⅱ)对人U118脑胶质瘤细胞自噬的影响及可能机制。方法 EMAp-Ⅱ处理人U118胶质瘤细胞后,采用MTT检测细胞活力;用免疫荧光法检测自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)在U118细胞的分布;Western blot方... 详细信息

目的研究内皮-单核细胞激活多肽(EMAp-Ⅱ)对人U118脑胶质瘤细胞自噬的影响及可能机制。方法 EMAp-Ⅱ处理人U118胶质瘤细胞后,采用MTT检测细胞活力;用免疫荧光法检测自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)在U118细胞的分布;Western blot方法检测LC3-Ⅱ、自噬降解底物p62/sqstm1和自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平。结果与EMAp-Ⅱ0 h组相比,0.05 nmol.L-1剂量以上的EMAp-Ⅱ可明显抑制人U118胶质瘤细胞的活力,降低线粒体膜电位(MMp),在EMAp-Ⅱ作用0.5 h时效果最明显;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)能够阻断EMAp-Ⅱ的作用,使细胞活力和线粒体膜电位基本恢复;EMAp-Ⅱ作用0.5 h后自噬标记物LC3在胞质内呈点状分布,荧光表达明显增强,并且LC3-Ⅱ的蛋白表达水平明显上调;同时伴有自噬降解底物p62/sqstm1的表达下降;此外,自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平明显上调。结论 EMAp-Ⅱ能明显抑制人U118胶质瘤细胞活力,诱导U118细胞发生自噬,其机制可能与自噬相关蛋白Beclin1上调有关。

关键词：内皮-单核细胞激活多肽人U118胶质瘤细胞自噬 LC3 p62/sqstm1 Beclin1

毒死蜱对SD大鼠海马神经元自噬相关蛋白表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华劳动卫生职业病杂志 2021年第9期39卷 648-652页

作者：陈青松羡晓辉高恒波苑霖姚冬奇孙艺青马文杰田英平河北医科大学第二医院急诊科石家庄050000 河北医科大学病理生理学教研室神经科学研究中心石家庄050017

目的分析毒死蜱对大鼠海马神经元自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在急性毒死蜱中毒中枢神经损伤中的作用。方法于2018年10月,将35只雄性清洁级SD大鼠根据观察时间点随机分成7组,即0.5 d、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d组和对照组,每组5只。... 详细信息

目的分析毒死蜱对大鼠海马神经元自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在急性毒死蜱中毒中枢神经损伤中的作用。方法于2018年10月,将35只雄性清洁级SD大鼠根据观察时间点随机分成7组,即0.5 d、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d组和对照组,每组5只。各观察组采用81.5 mg/kg毒死蜱一次性灌胃处理,对照组给予橄榄油灌胃。连续观察大鼠一般情况和中毒症状,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测海马组织中自噬相关蛋白Beclin1、p62/sqstm1、LC3的表达,免疫组织化学染色观察脑组织细胞形态和LC3表达。结果Western blot结果显示,与对照组比较,1 d、2 d、3 d组大鼠海马神经元Beclin1蛋白表达升高,0.5 d、1 d、2 d组p62/sqstm1蛋白表达降低,2 d组大鼠海马神经元LC3蛋白表达升高,差异均有统计学意义(p<0.05)。免疫组织化学结果显示,5 d组大鼠海马神经元排列紊乱,部分细胞核轮廓消失,7 d组尤其明显,LC3蛋白呈胞质表达,表达量逐渐增高,第2天达高峰。结论急性毒死蜱中毒大鼠自噬的早期激活可能参与了毒死蜱诱导的海马神经元损伤。

关键词：毒死蜱自噬海马神经元 Beclin1 p62/sqstm1 LC3 大鼠

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

发育期大鼠癫痫脑损伤中自噬相关基因的变化

中华实用儿科临床杂志 2018年第12期33卷 909-912页

作者：李沁芮韩颖杜军保金红芳张静牛曼曼秦炯北京大学第一医院儿科 100034 北京大学人民医院儿科 100044

目的探讨Beclin－1、p62/sqstm1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）和unc－51样自噬活化激酶1（ULK－1）等自噬相关分子mRNA水平在发育期大鼠癫痫脑损伤前后的变化。方法21日龄雄性Sprague Dawley（SD）大鼠72只，按随机数字表法随机分为对照... 详细信息

目的探讨Beclin－1、p62/sqstm1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）和unc－51样自噬活化激酶1（ULK－1）等自噬相关分子mRNA水平在发育期大鼠癫痫脑损伤前后的变化。方法21日龄雄性Sprague Dawley（SD）大鼠72只，按随机数字表法随机分为对照组和癫痫组。每组按时间点不同（3 h、6 h、12 h和48 h）随机分4个亚组，每个亚组9只大鼠。癫痫组采用腹腔注射卡因酸（12 mg/kg）诱导癫痫发作建立癫痫动物模型，对照组予等量9 g/L盐水腹腔注射。2组大鼠分别于注射卡因酸3 h、6 h、12 h和48 h后，予水合氯醛麻醉，处死并取出脑组织。Nissl染色法检测大鼠大脑皮层神经元损伤情况；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测癫痫大鼠大脑神经元凋亡情况；实时荧光定量聚合酶链反应（qpCR）检测Beclin－1、p62/sqstm1、LC3、ULK－1 mRNA水平。结果Nissl染色显示：随时间推移，癫痫组大鼠大脑皮层神经元尼氏体颜色变浅，结构紊乱；癫痫48 h组Nissl染色阳性细胞数[（82±8）个]明显少于对照组[（122±8）个]，差异有统计学意义（F＝3.768，p＝0.01）。TUNEL方法显示癫痫48 h组大鼠大脑皮层凋亡神经元[（13±7）个]明显高于对照组[（2±1）个]，差异有统计学意义（t＝－3.821，p＝0.003）。qpCR显示Beclin－1、p62/sqstm1、LC3、ULK－1 mRNA水平在癫痫组12 h组（1.70±0.75、1.75±0.77、1.52±0.43、7.48±6.12）和癫痫48 h组（1.63±0.43、1.48±0.74、1.74±0.55、7.69±5.65）均明显高于对照组（1.00、1.00、1.00、1.00），差异均有统计学意义（F＝2.820、3.452、5.811、5.002，均p〈0.05）。结论自噬的活化先于凋亡发生，自噬相关分子可能参与发育期大鼠癫痫所致脑损伤的发病过程。

关键词：癫痫凋亡自噬 Beclin-1 p62/sqstm1 微管相关蛋白1轻链3 unc-51样自噬活化激酶1

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

DUB-X在细胞自噬中的生物学功能研究

DUB-X在细胞自噬中的生物学功能研究

作者：侯晓楠厦门大学

学位级别：硕士

自噬是细胞在营养匮乏条件下,降解细胞内成分以维持细胞必要活动与生命的一种重要生命进程。自噬对维持生物体正常的生命活动具有重要意义。线粒体自噬是一种选择性的细胞自噬,可以将功能紊乱的线粒体通过自噬途径降解。线粒体自噬代表... 详细信息

自噬是细胞在营养匮乏条件下,降解细胞内成分以维持细胞必要活动与生命的一种重要生命进程。自噬对维持生物体正常的生命活动具有重要意义。线粒体自噬是一种选择性的细胞自噬,可以将功能紊乱的线粒体通过自噬途径降解。线粒体自噬代表了线粒体质量控制的一种方式,对维持最佳的线粒体生物能学水平起到重要作用。p62是由sqstm1基因编码的一种蛋白,在细胞的选择性自噬过程中发挥重要的作用。去泛素化酶DUB是细胞内一种重要的具有催化活性的酶,它可以将被泛素化修饰的蛋白去除泛素链,影响蛋白在细胞内的降解及定位等生物学功能,从而对细胞的正常生命活动起到非常重要的作用。DUB对细胞自噬有重要的调控作用,可通过调节ULK1等自噬相关核心因子的泛素化水平来调控自噬水平。近期研究表明,p62存在泛素化修饰,但DUB是否可以通过去泛素化作用调控p62的泛素化水平,进而影响自噬的进程目前还不得而知。我们的研究表明:去泛素化酶DUB-X与p62存在很强的相互作用;在多种细胞系中敲低DUB-X后p62的蛋白水平有明显升高。进一步研究表明DUB-X促进p62蛋白降解。通过共聚焦及透射电镜实验我们确定了 DUB-X通过影响p62蛋白水平调控自噬。我们的研究为进一步了解DUB对自噬的调控提供了一个新的视角。

关键词：自噬 p62/sqstm1 去泛素化酶

自噬在幼年特发性关节炎全身型患儿发病机制中的研究及维生素D的影响

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

自噬在幼年特发性关节炎全身型患儿发病机制中的研究及维生素D的...

作者：李雪河北医科大学

学位级别：硕士

目的:通过Western bloting检测sJIA患儿外周血淋巴细胞自噬蛋白的表达,酶联免疫法检测sJIA患儿外周血血清25(OH)D水平,并结合sJIA患儿临床实验室检查结果,探讨自噬与25(OH)D水平在sJIA发病机制中的作用,为临床sJIA的精准治疗进一步提供... 详细信息

目的:通过Western bloting检测sJIA患儿外周血淋巴细胞自噬蛋白的表达,酶联免疫法检测sJIA患儿外周血血清25(OH)D水平,并结合sJIA患儿临床实验室检查结果,探讨自噬与25(OH)D水平在sJIA发病机制中的作用,为临床sJIA的精准治疗进一步提供理论依据。方法:收集于2017年1月-2018年12月就诊于河北医科大学第二医院儿科门诊及住院确诊初治sJIA患儿,共计15例。同期就诊我院生长发育门诊健康的患儿作为对照组,共计20例。采用酶联免疫法检测血清25(OH)D水平(ng/ml),Western bloting检测淋巴细胞LC3、p62表达水平,并详细记录患儿相关的实验室指标。分析sJIA患儿经维生素D治疗前后体内血清25(OH)D水平及自噬蛋白表达情况,探讨自噬在幼年特发性关节炎全身型患儿发病机制中的作用及维生素D的影响:***患儿治疗前后相关实验室指标的变化情况sJIA治疗组患儿的WBC、NEUT%、pLT、CRp、ESR、SF、IgG均较治疗前明显下降,HGB较治疗前明显升高,差异均具有统计学意义(ppp62蛋白表达下降,具有统计学意义(t=-10.681,ppp62蛋白表达下降,具有统计学意义(t=-4.613,ppp62蛋白表达下降,具有统计学意义(t=-6.087,pp62呈负相关性,具有统计学意义(pearson相关系数-0.864,pppp=0.05)[(8.795±2.799)ng/ml vs(13.091±5.030)ng/ml]。结论:***患儿自噬水平较健康儿童增强,推测自噬过度表达可能参与sJIA的发病。***患儿存在维生素D水平缺乏或不足,低水平维生素D与sJIA的发生有一定关系,推测补充维生素D可能有助于疾病的恢复。***患儿补充维生素D后自噬水平有所下降,推测维生素D可能在自噬过程中起到一定的调节作用。

关键词： 25羟基维生素D 全身型幼年特发性关节炎自噬微管相关蛋白轻链3 p62/sqstm1 外周血淋巴细胞