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CacyBp/SIp nuclear translocation regulates p27kip1 stability in gastric cancer cells

World Journal of Gastroenterology 2016年第15期22卷 3992-4001页

作者： Ying-Lin Niu Ya-Jun Li Jing-Bo Wang Yuan-Yuan Lu Zhen-Xiong Liu Shan-Shan Feng Jian-Guo Hu Hui-Hong Zhai Department of Gastroenterology Beijing Friendship Hospital Affiliated to Capital Medical University Department of Digestive Diseases General Hospital of Ningxia Medical University State Key Laboratory of Cancer Biology Institute of Digestive Diseases Xijing Hospital Fourth Military Medical University

AIM: To investigate the mechanism of calcyclin binding protein/Siah-1 interacting protein(Cacy Bp/SIp) nuclear translocation in promoting the proliferation of gastric cancer(GC) cells. METHODS: The effect of Cacy Bp/SIp nuclear translocation on cell cycle was investigated by cell cycle analysis. Western blot analysis was used to assess the change in expression of cell cycle regulatory proteins and proteasome-mediated degradation of p27kip1. Coimmunoprecipitation(co-Ip) analysis was performed to examine the binding of Cacy Bp/SIp with Skp1. A Cacy Bp/SIp truncation mutant which lacked the Skp1 binding site was constructed and fused to a fluorescent protein. Subsequently, the effect on Skp1 binding with the fusion protein was examined by co-Ip, while localization of fluorescent fusion protein observed by confocal laser microscopy, and change in p27kip1protein expression assessed by Western blot ***: Cacy Bp/SIp nuclear translocation induced by gastrin promoted progression of GC cells from G1 phase. However, while Cacy Bp/SIp nuclear translocation was inhibited using si RNA to suppress Cacy Bp/SIp expression, cell cycle was clearly inhibited. Cacy Bp/SIp nuclear translocation significantly decreased the level of cell cycle inhibitor p27kip1, increased Cyclin E protein expression whereas the levels of Skp1, Skp2, and CDK2 were not affected. Upon inhibition of Cacy Bp/SIp nuclear translocation, there were no changes in protein levels of p27kip1 and Cyclin E, while p27kip1 decrease could be prevented by the proteasome inhibitor MG132. Moreover, Cacy Bp/SIp was found to bind to Skp1 by immunoprecipitation, an event that was abolished by mutant Cacy Bp/SIp, which also failed to stimulate p27kip1 degradation, even though the mutant could still translocate into the ***: Cacy Bp/SIp nuclear translocation contributes to the proliferation of GC cells, and Cacy Bp/SIp exerts this effect, at least in part, by stimulating ubiquitin-mediated degradation o

关键词： Calcyclin binding protein/Siah-1 interacting protein Gastric cancer Cell cycle p27kip1 Ubiquitin

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Expression and significance of cyclin D1, p27kip1 protein in bronchioloalveolar carcinoma

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Journal of Zhejiang University Science 2004年第2期5卷 235-241页

作者：袁键群许敬尧张静何启才祝佳盛彩霞 SirRunRunShawHospital SchoolofMedicineZhejiangUniversityHangzhou310016China

purpose: To investigate the relationship between expression of cell cycle-related protein cyclin D1, p27kip1 and the pathogenesis of bronchioloalveolar carcinoma (BAC) and the value of prediction of prognosis. Methods: Cyclin D1 and p27kip1 protein were detected by immunohistochemical En Vision method in 43 BACs. Results: The positivity of cyclin D1 in BAC was 65.1% (28/43), which was significantly higher than that in normal pulmonary tissue (0/13), p1. No statis-tically significant association was found between cyclin D1 expression data and sex, age, tobacco-use history, histologic subtype (mucinous vs nonmucinous), stromal fibrosis, lymph node metastasis, clinical stage or postoperative survival period (p>0.05), while cyclin D1 expression was found to be negatively correlated with tumor size (ppositivity of p27kip1 in BACs was 51.2% (22/43), significantly lower than that in normal pulmonary tissue (12/13), p1. p27kip1 expression level was not associated with sex, age, tobacco-use history, tumor size or histologic subtype (p>0.05), but was negatively correlated with stromal fibrosis, lymph node metastasis and clinical stage (ppositively associated with postoperative survival period (p1). The survival rate of p27kip1 positive group was significantly higher than that of p27kip1 negative group (p1). No statistically significant correlation was found between cyclin D1 and p27kip1 expres-sion. Conclusions: Increased cyclin D1 expression and decreased p27kip1 expression are related to the pathogenesis of BAC; decreased p27kip1 expression is associated with metastasis progression; immunodetection of p27kip1 is useful for assessment of prognosis.

关键词： Adenocarcinoma Bronchioloalveolar Lung neoplasms Cyclin D1 p27kip1 Immunohistochemistryction

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p27kip1和Ki-67在原发性中枢神经系统生殖细胞肿瘤中表达的临床病理学意义

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第12期34卷 1767-1770页

作者：高玉平江基尧刘强上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心上海市辅助生殖与优生重点实验室上海200127 上海交通大学医学院附属仁济医院神经外科上海200127 上海交通大学医学院附属仁济医院病理科上海200127

目的探讨抑癌基因p27kip1和细胞周期蛋白Ki-67在原发性中枢神经系统生殖细胞肿瘤(CNSGCTs)中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法检测28例原发性CNSGCTs组织中p27kip1和Ki-67的表达,计算Ki-67增殖指数(Ki-67 LI)。结果... 详细信息

目的探讨抑癌基因p27kip1和细胞周期蛋白Ki-67在原发性中枢神经系统生殖细胞肿瘤(CNSGCTs)中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法检测28例原发性CNSGCTs组织中p27kip1和Ki-67的表达,计算Ki-67增殖指数(Ki-67 LI)。结果 28例原发性CNSGCTs中,17例(60.7%)p27kip1高表达,其中成熟性畸胎瘤5例,生殖细胞瘤10例,胚胎性癌和混合性生殖细胞瘤各1例;11例(39.3%)p27kip1低表达,其中生殖细胞瘤8例,未成熟性畸胎瘤、混合性生殖细胞瘤、绒毛膜癌各1例。13例(46.4%)Ki-67 LI>50%,9例(32.1%)Ki-67 LI为25%~50%,6例(21.4%)Ki-67 LIp27kip1表达和Ki-67 LI与肿瘤的组织学类型有关,p27kip1表达水平与患者性别、年龄,肿瘤大小、部位,预后和复发以及Ki-67 LI均无相关性(p>0.05)。结论 p27kip1在恶性程度较高的原发性CNSGCTs中呈现低表达,提示其可能通过下调细胞周期G1→S的调控点而参与生殖细胞肿瘤的发生和发展。

关键词：原发性中枢神经系统生殖细胞肿瘤生殖细胞瘤畸胎瘤 p27kip1 Ki-67

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p27kip1及相关分子Jab1在大鼠损伤脊髓中的表达变化及意义

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中国脊柱脊髓杂志 2014年第7期24卷 630-637页

作者：黄克伦滕红林黄卡特戴宇森陈毕黄智慧陈必成温州医科大学附属第一医院浙江省温州市325000 基础医学院浙江省温州市325000

目的:观察大鼠脊髓损伤过程中p27kip1及相关分子Jab1在脊髓中的表达及细胞定位情况,探讨其在脊髓损伤后胶质细胞增生及胶质瘢痕生成中的作用。方法:取56只雄性SD大鼠,随机分为实验组与对照组,其中实验组按脊髓损伤时间分为6h、12h、1d... 详细信息

目的:观察大鼠脊髓损伤过程中p27kip1及相关分子Jab1在脊髓中的表达及细胞定位情况,探讨其在脊髓损伤后胶质细胞增生及胶质瘢痕生成中的作用。方法:取56只雄性SD大鼠,随机分为实验组与对照组,其中实验组按脊髓损伤时间分为6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组,实验组按照Allen′s法制作SD大鼠脊髓损伤模型,对照组则仅打开椎板,不损伤脊髓。首先利用Western Blot观察p27kip1及相关分子Jab1在脊髓损伤后的表达水平变化,然后利用免疫组化观察脊髓损伤后3d时的p27kip1及5d时Jab1的阳性细胞表达变化,最后利用免疫荧光双标观察脊髓损伤后5d时Jab1的细胞定位变化。结果:Western Blot结果显示p27kip1在脊髓损伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组的相对灰度值分别是1.00±0.10、0.82±0.05、0.27±0.03、0.34±0.03、0.25±0.02、0.28±0.03、0.57±0.05,其中1d、3d、5d、7d、14d组与对照组(0.98±0.08)相比均明显降低(p1的6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组的相对灰度值分别是0.58±0.08、0.53±0.04、0.89±0.11、1.06±0.24、1.22±0.26、0.85±0.16、0.25±0.03,其中6h、12h、1d、3d、5d、7d组与对照组(0.19±0.04)相比明显升高(pp27kip1于脊髓损伤后表达下降,Jab1在脊髓损伤后表达上升。3d时实验组p27kip1免疫组化阳性细胞数为130.8±29.8个,与对照组(406.8±56.6个)相比减少(p1免疫组化阳性细胞数为383.5±68.8个,与对照组(123.5±42.6个)相比增多(p1与GFAp双阳性细胞数量为383.3±39.1个,较对照组(114.3±35.6个)明显增多(p1与p27kip1存在相互作用,Jab1参与脊髓损伤后p27kip1的降解,这可能与脊髓损伤后星形胶质细胞的过度增殖及胶质瘢痕的生成相关。

关键词：脊髓损伤 p27kip1 Jab1 胶质瘢痕

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Effect of p27kip1 Inhibition on proliferation of Bovine Corneal Endothelial Cells by RNA Interference

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2008年第2期28卷 211-215页

作者：黄渝侃张明昌王勇范可顺张光红周莉 Department of Ophthalmology Union hospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology Wuhan 430022China Wuhan Aier Eye Hospital Wuhan 430030 China

Three plasmids （pGenesil-p1, pGenesil-p2, pGenesil-p3） with different p27kip1-shRNA sequences were designed and synthesized. Their effects on the proliferation of bovine corneal endothelial cells （bCEC） were investigated. plasmid expressing irrelevant shRNA with a random combination was used as negative control （pGenesil-HK）. The recombination of four plamids was confirmed by restrictive enzyme digestion and sequence analysis. The expression of mRNA and protein of p27kip1 was detected by RT-pCR and Western blotting after stable transfection. The expressions of p27kip1 mRNA and p27kip1 protein of pGenesil-p1 group, pGenesil-p2 group and pGenesil-p3 group were all lower than those in the pGenesil-HK group and the blank group （non-transfected group）, pGenesil-p3 had the strongest inhibitory effect and was selected for the next steps. The proliferation rates of the pGenesil-p3 group, the pGenesil-HK group and the blank group were assessed by MTT. The influence of shRNA-p27kip1 on bCEC cell cycle was detected by flow cytometry （FCM）. Compared with the control groups, the proliferation rate of the pGenesil-p3 group was increased significantly, and the ratio of S-phase also increased. It is concluded that shRNA-p27kip1 could down-regulate the expression of p27kip1 effectively and increase the proliferation of bCEC. RNA interference （RNAi） may be an effective means to promote the proliferation of CEC.

关键词： RNA interference p27kip1 plasmid corneal endothelial cells

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p27kip1基因shRNA表达质粒的构建鉴定及功能研究

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第三军医大学学报 2007年第22期29卷 2148-2151页

作者：黄渝侃张明昌王勇张进祥范可顺张光红华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022 武汉爱尔眼科医院武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院急诊科武汉430022

目的构建细胞周期性激酶抑制剂p27kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响。方法设计有发夹状结构的3条p27kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照。转入带... 详细信息

目的构建细胞周期性激酶抑制剂p27kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响。方法设计有发夹状结构的3条p27kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照。转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFp)和启动子U6的pGenSil-1质粒,构建重组质粒pGenSil-1/p27kip1-1、pGenSil-1/p27kip1-2、pGenSil-1/p27kip1-3、pGenSil-1/HK。转化DH5α菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。以脂质体法将4个重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞。转染后48h以Western blot法检测p27kip1蛋白水平及MTT法检测各实验组和对照组细胞增殖情况。结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功。3个实验组p27kip1蛋白水平分别下降了66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可显著促进牛角膜内皮细胞增殖。结论成功构建了针对p27kip1的RNA干扰表达载体。

关键词： RNA干扰 p27kip1 质粒

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p27kip1与白血病

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中国实用内科杂志 2004年第9期24卷 574-576页

作者：刘晶岳辉沈光大连医科大学 116027 沈阳军区总医院 110016 辽宁省血液中心沈阳110044

真核生物的细胞周期进程是由一系列调控因子有序的激活和灭活来调节控制的,其正常与否和细胞以及个体的生长、分化、衰老和癌变密切相关.参与细胞周期调控的主要分子有:细胞周期素(cyclin),细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinas... 详细信息

真核生物的细胞周期进程是由一系列调控因子有序的激活和灭活来调节控制的,其正常与否和细胞以及个体的生长、分化、衰老和癌变密切相关.参与细胞周期调控的主要分子有:细胞周期素(cyclin),细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)和CDK抑制蛋白(cyclin-dependent kinase inhibitor,CDKI).其中CDKI通过与细胞周期素、CDK或细胞周期素-CDK复合物的结合,抑制CDK的活性,导致细胞周期停止,阻断细胞的增殖过程.目前根据结构及功能将CDKI分成两大类:一类为Ink4家族(Inhibitor of cdk4),包括p16/INK4(p16),p15/INK4(p15),p18/INK4(p18)和p19/INK(p19).另一类为Cip/kip家族(CDK-interacting protein/kinase inhibition protein),包括p 21/WAF/Cip1(p21),p27kip1(p27)和p57/kip2(p57).近年来发现的p27kip1基因及其产物主要对细胞周期进程起负调控作用,被认为是一种抑癌基因.

关键词： p27kip1 白血病基因结构基因表这细胞周期

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p27kip1与肿瘤

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中华病理学杂志 1999年第2期28卷 140-142页

作者：王华王靖华华西医科大学附属第一医院病理科

真核生物的细胞周期进程是由一系列调控因子有序的聚合和激活来调节控制的，其正常与否和细胞以及个体的生长、分化、衰老和癌变密切相关。参与细胞周期调控的主要分子有：细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ），细胞周期蛋白依赖性激酶（ｃｙ... 详细信息

真核生物的细胞周期进程是由一系列调控因子有序的聚合和激活来调节控制的，其正常与否和细胞以及个体的生长、分化、衰老和癌变密切相关。参与细胞周期调控的主要分子有：细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ），细胞周期蛋白依赖性激酶（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａ...

关键词： p27kip1 肿瘤真核生物细胞周期

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Expression of p27kip1, A Cell Cycle Repressor protein with Dual Roles for Both Cancer prevention and promotion, Is Regulated primarily at the Level of Unusual p27kip1 mRNA—A Short Concept proposal

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American Journal of Molecular Biology 2018年第3期8卷 186-193页

作者： Isao Eto Department of Nutrition Sciences University of Alabama at Birmingham Birmingham AL USA Webb Nutrition Sciences Building University Boulevard Birmingham AL USA

The p27kip1 is a cell cycle repressor protein that regulates primarily the cell cycle transition from G1 to S phase and hence the DNA replication is in the S phase and cell division in the M phase. Expression of p27kip1 protein has dual roles for both cancer prevention and promotion. For example, numerous nutritional and chemopreventive anti-cancer agents specifically increase the expression of p27kip1 protein without directly affecting the expression of any other cell cycle regulatory proteins. On the other hand, pro-cancer agents (like glucose, insulin and other growth factors frequently seen in obesity and/or diabetes) specifically decrease the expression of p27kip1 protein without directly affecting the expression of any other cell cycle regulatory proteins. Unlike expression of any other cell cycle regulatory proteins, expression of p27kip1 protein is very unusual. The mRNA of p27kip1 has a very long and unusual 5’-untranslated region (from -575 to -1 in human). It appears that the 5’-untranslated region of p27kip1 mRNA forms two alternative secondary structures. One increases the expression of p27kip1 protein when anti-cancer agents are added and another decrease the expression of p27K1p1 when pro-cancer agents are added. For this short concept proposal, Dr. Albert Einstein’s “visualized thought experiments (German: Gedanken experiment)” were used as a fundamental tool for understanding how either anti- or pro-cancer agents bring the primary structure of the 5’-untranslated region of p27kip1 mRNA into two alternative secondary structures, thereby either increasing or decreasing, respectively, the translation initiation of p27kip1 protein.

关键词： p27kip1 Cell Cycle Repressor protein Cancer prevention Anti-Cancer Agents Cancer promotion pro-Cancer Agents p27kip1 mRNA 5-prime-Untranslated Region Translation Initiation 5-prime Cap Upstream Open Reading Frame Internal Ribosome Entry Site

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p27kip1基因转移抑制大鼠胶质瘤生长的实验研究

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现代预防医学 2007年第23期34卷 4410-4412页

作者：赵斌杰戢翰升湖北十堰市人民医院十堰442000 湖北十堰市人民医院

[目的]探讨重组腺病毒介导的人突变型p27kip1基因(Ad-p27kip1)表达对大鼠神经胶质瘤移植瘤生长的抑制作用。[方法]建立大鼠胶质瘤移植瘤模型,随机分成3组:Ad-p27组、Ad-LacZ组、pBS组。Ad-p27组给予腺病毒介导的人p27 kip1基因(Ad-p27ki... 详细信息

[目的]探讨重组腺病毒介导的人突变型p27kip1基因(Ad-p27kip1)表达对大鼠神经胶质瘤移植瘤生长的抑制作用。[方法]建立大鼠胶质瘤移植瘤模型,随机分成3组:Ad-p27组、Ad-LacZ组、pBS组。Ad-p27组给予腺病毒介导的人p27 kip1基因(Ad-p27kip1)瘤内注射,另2组分别给予Ad-LacZ和pBS瘤内注射,观察对肿瘤生长的抑制情况,并用免疫荧光法检测p27和CyclinD1的表达;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况。[结果]给予Ad-p27kip1基因治疗的实验组大鼠肿瘤生长受到明显抑制;在颅内肿瘤模型组给予Ad-p27治疗的大鼠生存时间明显延长;免疫荧光染色显示移植瘤p27表达明显增强,CyclinD1的表达受到抑制。Ad-p27组细胞凋亡显著多于Ad-LacZ组和pBS组。[结论]腺病毒介导的人p27基因(Ad-p27kip1)对大鼠胶质瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制是增强p27表达、抑制CyclinD1的表达、诱导胶质瘤细胞凋亡。

关键词：胶质瘤 p27kip1 基因治疗细胞凋亡

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