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p26抗菌肽的抗菌活性及作用机制研究

P26抗菌肽的抗菌活性及作用机制研究

作者：杜娟安徽农业大学

学位级别：硕士

抗菌肽(Antimicrobialpeptides,AMps)是一类由特定基因编码的小分子多肽,广泛分布于各种生物中,是生物天然免疫的重要分子。本研究以抗菌肽p26为研究对象,测定其对几种细菌的最小杀菌浓度(Minimal bactericidal concentration,MBC)和最... 详细信息

抗菌肽(Antimicrobialpeptides,AMps)是一类由特定基因编码的小分子多肽,广泛分布于各种生物中,是生物天然免疫的重要分子。本研究以抗菌肽p26为研究对象,测定其对几种细菌的最小杀菌浓度(Minimal bactericidal concentration,MBC)和最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC),系统开展 p26 的膜作用以及非膜作用的抗菌机制研究,并评估了 p26抗菌肽对冷却肉的防腐保鲜效果。主要研究内容如下:(1)p26具有6个氨基酸,分子量为496.9[M+2H]2+,净电荷为3.0,亲水残基比例达到50%。p26 对四种供试细菌(Staphylococcus aureus、Listeria monocytogenes、Escherichia coli和Salmonella enterica)的 MBC在 100-400μg/mL之间,对四种供试细菌的MIC在25-200 μg/mL之间。(2)细菌细胞的膜透过率和磷离子泄漏测定结果表明,和没有经过抗菌肽处理的正常的细菌相比,p26抗菌肽均可造成四种供试细菌细胞的膜通透性增加和细胞外无机磷浓度的增加;透射电子显微镜的检测结果发现在p26处理细菌后,细菌的细胞膜也发生一定变形与褶皱,有较明显细胞内的物质泄露,电子密度的降低、不均匀,以及形成空腔。其中p26处理李斯特菌后,在细菌的细胞膜中看到了轻微的破损和孔洞;扫描电子显微镜检测结果表明p26处理后的李斯特菌的细胞表面发生破裂破损,出现了轻微的断裂面;DNA电泳迁移率变动分析结果显示p26只有在较高的浓度下才可以与细菌的DNA发生结合,而且这种结合能力具有一定的浓度依赖性。(3)从不同浓度p26、Nisin、CL对细菌生物膜的初始粘附力影响的结果看出p26、Nisin、CL分别与李斯特菌结合1h后,发现李斯特菌的粘附率降低了。在抑制细菌生物膜形成上,p26在25 μg/mL时可抑制63.76%李斯特菌生物膜形成,在200μg/mL时仅有7.57%李斯特菌生物膜残留。从对形成的李斯特菌生物膜的破坏作用来看,随着p26、Nisin、CL浓度的增加,对李斯特菌生物膜的破坏作用越好。p26对李斯特菌生物膜的破坏率在200μg/mL可达到62.05%。(4)p26在不同盐浓度条件可下对李斯特菌和沙门氏菌抗菌活性产生影响。不同盐浓度的条件下(NaCl、CaCl),与基础培养基相比,盐浓度越高,对抗菌稳定性影响越大,抗菌活性越低。不同浓度的血清可对p26抗菌活性产生影响。随着血清浓度提高,抗菌肽p26的抗菌活性减弱。从p26在不同pH值的培养基下对李斯特菌和沙门氏菌抗菌稳定性的影响结果可以得出,抗菌肽在弱碱性的环境下抗菌活性要比在弱酸性的条件下高。(5)依据微生物、pH以及TVB-N等指标,评估了 p26对冷却肉防腐保鲜的效果。结果显示,p26处理的冷却肉与对照组相比,在保鲜时间上延长了一倍。和p26与EDTA单独处理相比,在同等浓度下,p26与EDTA复配,可显著提升对于冷却肉防腐保鲜的效果。本研究在理论上将有助于抗菌肽p26抗菌活性、作用机制的认知,在应用上可为抗菌肽p26开发成为肽类防腐剂提供技术支撑。

关键词：抗菌肽 p26 抗菌活性作用机制冷却肉

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甜菜坏死黄脉病毒p26蛋白的原核表达纯化

甜菜坏死黄脉病毒P26蛋白的原核表达纯化

中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学...

作者：刘亚囡姜宁张宗英韩成贵王颖中国农业大学作物有害生物监测与绿色防控农业部重点实验室/中国农业大学植物保护学院

甜菜坏死黄脉病毒（Beet necroticyellow vein virus,BNYVV）引起的甜菜丛根病（Rhizomania）是世界主要甜菜产区普遍发生的病毒病害。BNYVV是正单链RNA病毒,属于甜菜坏死黄脉病毒属（Benyvirus）,基因组含有4～5个RNA。BNYVV RNA5编码... 详细信息

甜菜坏死黄脉病毒（Beet necroticyellow vein virus,BNYVV）引起的甜菜丛根病（Rhizomania）是世界主要甜菜产区普遍发生的病毒病害。BNYVV是正单链RNA病毒,属于甜菜坏死黄脉病毒属（Benyvirus）,基因组含有4～5个RNA。BNYVV RNA5编码的p26蛋白是一个致病因子,含RNA5的分离物其致病性比不含RNA 5的分离物致病性更强。并且p26可能与RNA3编码的p25蛋白一起协同作用,加重病毒在寄主上的致病性。本研究将p26基因构建到***表达载体上,进一步对MBp-p26融合蛋白进行原核表达,结果表明在18℃下,终浓度0.2mmol/L IpTG诱导16h后,p26融合蛋白可在上清中大量表达,进一步通过镍柱纯化得到目的蛋白。纯化的p26用于多克隆抗体的制备,为甜菜坏死黄脉病毒的检测及p26蛋白的致病性机制研究打下了材料基础。

关键词：甜菜坏死黄脉病毒 p26 原核表达抗血清制备

来源： cnki会议评论

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p26型化油器节油效果显著

消防科学与技术 1984年第2期 11-11页

作者：于林法宋立源震旦消防机械厂

BJ10型十马力手抬消防泵,是以175F型单缸汽油发动机为动力,直接驱动一单级离心泵,实现能量转换,输出做功。对整机性能有重要影响的化油器,原先采用的是K16型化油器,经长期使用后,发现燃油消耗大,怠速不稳定,且限制发动机动力指标的进一... 详细信息

BJ10型十马力手抬消防泵,是以175F型单缸汽油发动机为动力,直接驱动一单级离心泵,实现能量转换,输出做功。对整机性能有重要影响的化油器,原先采用的是K16型化油器,经长期使用后,发现燃油消耗大,怠速不稳定,且限制发动机动力指标的进一步提高。

关键词：化油器怠速发动机汽化器内燃机热力参数 p26 量孔

46,XY,add(3)(p26)伴发育迟缓智力低下一例

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中国优生与遗传杂志 2015年第12期23卷 46-46页

作者：徐彩霞杨蕾空军航空医学研究所附属医院小儿科 100089

1病例患者,男,3岁,第5胎第1产,孕41周顺产。母38岁,前3胎为药物引产,第4胎自然流产。孕早期先兆流产,保胎治疗,母孕期贫血,产前羊水穿刺检查,胎儿3号染色体异常。父母染色体核型正常,非近亲婚配,否认家族遗传病史。咨询医生,告知因染色... 详细信息

1病例患者,男,3岁,第5胎第1产,孕41周顺产。母38岁,前3胎为药物引产,第4胎自然流产。孕早期先兆流产,保胎治疗,母孕期贫血,产前羊水穿刺检查,胎儿3号染色体异常。父母染色体核型正常,非近亲婚配,否认家族遗传病史。咨询医生,告知因染色体核型罕见,预后不详。出生体重3200g,身长51cm。

关键词：羊水穿刺检查早期先兆流产智力低下近亲婚配 XY,add p26 自然流产家族遗传病史染色体异常人工喂养

bcl-2,MDR1基因及编码蛋白在儿童急性白血病骨髓单个核细胞中表达的研究

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中国医科大学学报 2004年第5期33卷 463-465页

作者：何莉侯克佐中国医科大学附属第一医院儿科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤内科实验室辽宁沈阳110001

目的 :探讨bcl 2 ,MDR1基因及编码蛋白p2 6 ,p170表达与多药耐药的关系。方法 :RT pCR技术、S p免疫组化方法检测 36例白血病患儿及 10例血小板减少性紫癜患儿骨髓单个核细胞bcl 2 ,MDR1基因及蛋白表达。结果 :bcl 2基因的表达初治组、... 详细信息

目的 :探讨bcl 2 ,MDR1基因及编码蛋白p2 6 ,p170表达与多药耐药的关系。方法 :RT pCR技术、S p免疫组化方法检测 36例白血病患儿及 10例血小板减少性紫癜患儿骨髓单个核细胞bcl 2 ,MDR1基因及蛋白表达。结果 :bcl 2基因的表达初治组、完全缓解组低于复发组 (p p p2 6 ,p170阳性率初治组、完全缓解组、对照组低于复发组 (p p170阳性率初治组高于对照组 (p p170阳性率明显高于化疗前 (p p170和p2 6蛋白之间均无相关性。结论 :bcl 2和MDR1基因、蛋白通过不同的机制与白血病的耐药有关。

关键词：白血病 bcl-2基因 MDR1基因 p170 p26 耐药

胃癌中p27 cyclin E蛋白的表达及临床意义

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山西医药杂志 2003年第2期32卷 104-106页

作者：高付升王迎宾刘玉村高红桥大同市第五人民医院 037006 北京大学第一医院

目的　探讨 p2 7、cyclin E蛋白在胃癌中的表达及其与临床病理参数之间的关系。方法　用免疫组织化学 ( Sp)法对 10例非瘤病变的正常胃黏膜、40例胃癌和癌旁黏膜进行染色 ,分析 p2 7、cyclin E蛋白表达及其与临床病理参数之间的关系。... 详细信息

目的　探讨 p2 7、cyclin E蛋白在胃癌中的表达及其与临床病理参数之间的关系。方法　用免疫组织化学 ( Sp)法对 10例非瘤病变的正常胃黏膜、40例胃癌和癌旁黏膜进行染色 ,分析 p2 7、cyclin E蛋白表达及其与临床病理参数之间的关系。结果　 p2 7、cyclin E蛋白在正常胃黏膜与瘤旁黏膜表达差异无统计学意义 ( p>0 .0 5 ) ;p2 7在胃癌中的蛋白表达低于瘤旁黏膜和正常胃黏膜 ( ppp2 7、cyclin E蛋白表达间无相关性 ( p=0 .0 64 ) ,但与 0 .0 5很接近 ,无统计学意义可能与样本数量少有关。肿瘤组织中 p2 7的阳性率为 2 8% ( 11/ 40 ) ,且在组织分化程度高、预后好者中阳性表达高 ( ppp2 7、cyclin E蛋白的异常表达与胃癌的发生、发展有关。

关键词：胃癌 p26 cyclinE蛋白临床意义免疫组织化学预后基因表达