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p21^(cip/waf1)及p27^(Kip1)与增殖细胞核抗原在人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的表达

中国组织工程研究与临床康复 2009年第23期13卷 4577-4580页

作者：汤志华闵军陈积圣叶林余杰雄中山大学附属第二医院肝胆外科广东省广州市510120 中山大学附属江门中心医院博士后科研基地广东省江门市529030

背景:p21cip/waf1、p27Kip1是两种重要的细胞周期的负调控因子,增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。目的:观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中p21cip/waf1,p27Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。设计、时间及地点:细... 详细信息

背景:p21cip/waf1、p27Kip1是两种重要的细胞周期的负调控因子,增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。目的:观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中p21cip/waf1,p27Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。设计、时间及地点:细胞学基因水平观察,于2006-12/2007-06在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。材料:骨髓来源于中山大学附属第二医院行骨髓穿刺的健康供者。方法:全骨髓贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第5代后,加入含20μg/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基向肝细胞诱导分化。主要观察指标:诱导后RT-pCR检测细胞内p21cip/waf1,p27Kip1及增殖细胞核抗原基因mRNA的表达。结果:骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导后0,1,3,5,7d,细胞内p21cip/waf1mRNA表达的相对量逐渐升高(pp27Kip1mRNA表达的相对量无明显差异(p>0.05),增殖细胞核抗原mRNA表达的相对量除诱导后0,1d无明显差异(p>0.05)外,其余各时间点均逐渐降低(pp21cip/waf1高表达抑制了骨髓间充质干细胞增殖,同时在其向肝细胞分化过程中起一定调控作用,p27Kip1可能并不起作用,增殖细胞核抗原的表达则与p21cip/waf1相反,呈逐步减少趋势。

关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞分化 p21cip/waf1 p27Kip1 增殖细胞核抗原

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汉防己甲素抑制pANC-1细胞增殖作用的机制探讨

汉防己甲素抑制PANC-1细胞增殖作用的机制探讨

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作者：吕蒙恩华中科技大学

学位级别：硕士

目的: 观察汉防己甲素对人胰腺癌细胞株pANC-1细胞增殖的影响。方法: 1. MTT法检测pANC-1细胞对不同浓度汉防己甲素的药物敏感性。 2.流式细胞术检测汉防己甲素对pANC-1细胞周期的影响。 3.流式细胞术检测汉防己甲素对pANC-1细胞凋亡... 详细信息

目的: 观察汉防己甲素对人胰腺癌细胞株pANC-1细胞增殖的影响。方法: 1. MTT法检测pANC-1细胞对不同浓度汉防己甲素的药物敏感性。 2.流式细胞术检测汉防己甲素对pANC-1细胞周期的影响。 3.流式细胞术检测汉防己甲素对pANC-1细胞凋亡的诱导作用。结果: ***结果显示汉防己甲素对pANC-1细胞增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。不同浓度汉防己甲素作用pANC-1细胞24 h和72 h,IC50分别约为17μmol/L和10μmol/L。80μmol/L汉防己甲素处理72 h,pANC-1细胞的抑制率达到100%。 ***-1细胞经汉防己甲素处理24 h后,流式细胞术检测到明显的细胞G1期阻滞(G1期细胞比例可增至68.19%),而S期细胞比例则显著降低(可降至23.82%)。G2/M期细胞比例增加(可增至7.98%)。 3.汉防己甲素处理pANC-1细胞24h,流式细胞术检测到较明显的细胞凋亡发生(凋亡率8.29%)。结论: 1.汉防己甲素能有效抑制pANC-1细胞增殖,IC50在微摩尔水平。 2.汉防己甲素能显著引起pANC-1细胞G1期阻滞,并降低S期细胞比例。G2/M期细胞比例也有所增加。 3.汉防己甲素可诱导pANC-1细胞凋亡的发生。目的: 探讨汉防己甲素抑制pANC-1细胞增殖作用的可能分子机制。方法: 1.实时定量pCR检测pANC-1细胞经汉防己甲素处理24-72 h后细胞周期相关基因p21cip/waf1、c-myc、Cdc25A、E2F1和凋亡相关基因survivin mRNA水平变化。 2. western blot检测经汉防己甲素处理24-72 h后pANC-1细胞p21cip/waf1蛋白表达水平的改变。结果: 1实时定量pCR结果显示,pANC-1细胞经汉防己甲素处理24 h,与对照组相比,p21cip/waf1 mRNA水平明显增加,而Cdc25A、c-myc、E2F1、survivin mRNA水平均下降。 *** blot结果表明pANC-1细胞中p21cip/waf1蛋白在汉防己甲素处理早期升高。结论: 1.汉防己甲素早期可能通过上调p21cip/waf1 mRNA和蛋白的表达,下调Cdc25A、c-myc、E2F1 mRNA的表达,致使pANC-1细胞G1期阻滞。 2.汉防己甲素也可能通过下调survivin mRNA的表达,诱导pANC-1细胞凋亡的发生。

关键词：汉防己甲素 pANC-1细胞细胞增殖细胞周期凋亡实时定量pCR p21cip/waf1 survivin

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姜黄素HAT抑制活性与其抗肿瘤活性的相关性

姜黄素HAT抑制活性与其抗肿瘤活性的相关性

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作者：赵晋燕中国协和医科大学

学位级别：硕士

姜黄素(Curcumin)是一种多酚类物质,可抑制多种肿瘤细胞的体外生长以及体内肿瘤发生,在癌症预防和治疗方面有很大的发展潜力。组蛋白乙酰转移酶(Histoneacetyltransferase,HAT)与组蛋白去乙酰酶(Histone deacetylase,HDAC)共同调节核心... 详细信息

姜黄素(Curcumin)是一种多酚类物质,可抑制多种肿瘤细胞的体外生长以及体内肿瘤发生,在癌症预防和治疗方面有很大的发展潜力。组蛋白乙酰转移酶(Histoneacetyltransferase,HAT)与组蛋白去乙酰酶(Histone deacetylase,HDAC)共同调节核心组蛋白的乙酰化状态。HAT过度表达可募集多种转录因子,导致基因表达异常,从而引发肿瘤或其他疾病。近年研究报道,姜黄素是一个典型的HAT抑制剂,我们就姜黄素HAT抑制活性与其抗肿瘤作用的相关性进行了初步探讨。在体外酶学检测中,姜黄素对HDAC活性无影响,而SAHA可明显抑制HDAC活性,IC为0.41μM;姜黄素具有良好的HAT抑制活性,IC为53μM。在细胞毒性实验中,姜黄素可抑制多种肿瘤细胞的生长,IC范围为5～30μM。HDAC抑制剂SAHA也可抑制多种肿瘤细胞的生长,IC范围为0.45～3.86μM。采用概率和法计算姜黄素与SAHA联合应用在细胞毒性水平上的相互作用,显示姜黄素与0.33μM SAHA联合应用时,表现为单纯相加或拮抗效应;与1μM SAHA联合应用时,表现为拮抗效应。在蛋白水平,姜黄素与SAHA均促进细胞组蛋白乙酰化,但姜黄素的作用很弱。姜黄素与SAHA联合应用时,组蛋白乙酰化水平表现为相加或协同。使用半定量RT-pCR法检测p21mRNA表达,姜黄素与SAHA均可促进细胞p21mRNA的表达,高浓度的诱导量分别为1.3～1.8倍和3～6倍。两药联合应用时表现为姜黄素拮抗SAHA诱导的p21 mRNA表达,相互作用指数(CDI)小于0.85。流式细胞仪检测显示,姜黄素和SAHA均可诱导细胞产生ROS(Reactive OxygenSpecies,活性氧族);两药联合应用时,姜黄素明显拮抗SAHA诱导的ROS产生。以上结果表明,姜黄素在体外具有HAT抑制活性,而对HDAC活性无影响。在细胞水平对组蛋白乙酰化略有促进,在基因表达水平促进p21 mRNA表达,诱导肿瘤细胞ROS水平增加。姜黄素与SAHA联合应用时,在组蛋白乙酰化水平表现为相加或协同,拮抗SAHA诱导p21mRNA的表达,同时拮抗SAHA诱导的ROS产生。我们认为姜黄素的抗肿瘤作用,与其HAT抑制活性及对组蛋白乙酰化的诱导作用关系不大。

关键词：姜黄素组蛋白组蛋白乙酰转移酶 p21cip/waf1 ROS

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汉防己甲素抑制pANC-1细胞增殖作用的机制探讨

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临床血液学杂志（输血与检验） 2010年第3期23卷 327-332页

作者：吕蒙恩肖青王琳苏凤菊陈治中石亮胡丽华华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022

目的:探讨汉防己甲素对人胰腺癌细胞株pANC-1细胞增殖的影响及其相关机制。方法:采用MTT法观察汉防己甲素对人胰腺癌细胞株pANC-1细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对pANC-1细胞周期及凋亡的影响;实时定量pCR检测细胞周期和凋亡相关基因p... 详细信息

目的:探讨汉防己甲素对人胰腺癌细胞株pANC-1细胞增殖的影响及其相关机制。方法:采用MTT法观察汉防己甲素对人胰腺癌细胞株pANC-1细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对pANC-1细胞周期及凋亡的影响;实时定量pCR检测细胞周期和凋亡相关基因p21cip/waf1、cdc25A、c-Myc、E2F1和survivin mRNA水平的变化;Western blot检测p21cip/waf1蛋白水平的改变。结果:MTT结果显示汉防己甲素对pANC-1细胞增殖抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性。经汉防己甲素处理后,流式细胞术检测到明显的G1期细胞阻滞和细胞凋亡。实时定量pCR结果显示,汉防己甲素处理早期,p21cip/waf1mRNA水平明显增加,而cdc25A、c-Myc、2F1、survivin mRNA水平均下降。Western blot结果表明p21cip/waf1蛋白水平在汉防己甲素处理早期升高。结论:我们的研究表明汉防己甲素能有效的抑制人胰腺癌细胞株pANC-1细胞增殖。该过程可能通过上调21cip/waf1mRNA和蛋白的表达,下调cdc25A、c-Myc、E2F1mRNA的表达,致使pANC-1细胞G1期阻滞;也可能通过下调survivin mRNA的表达,诱导pANC-1细胞凋亡。

关键词：汉防己甲素细胞周期凋亡 pANC-1细胞 p21cip/waf1

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