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电针募穴对慢传输型便秘大鼠结肠p-ulk1蛋白表达的影响研究

电针募穴对慢传输型便秘大鼠结肠p-ulk1蛋白表达的影响研究

引用

作者：冯雅凡黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过实验探究电针对慢传输型便秘大鼠行为学和结肠组织形态学的影响,揭示电针降低p-ulk1蛋白的过度表达,抑制受损结肠组织Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的过度自噬,增加Cajal间质细胞(interstitial cells of Caj... 详细信息

目的:通过实验探究电针对慢传输型便秘大鼠行为学和结肠组织形态学的影响,揭示电针降低p-ulk1蛋白的过度表达,抑制受损结肠组织Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的过度自噬,增加Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)数量,减轻便秘后结肠传输功能障碍的机制。方法:实验分为两部分实验一:研究电针治疗对STC大鼠一般情况以及胃肠传输功能与受损结肠组织病理形态学的影响选取清洁级SD健康雄性大鼠24只,随机被分为空白组、模型组、药物组、电针组各6只。用生理盐水予空白组大鼠灌胃,其余组大鼠采取复方地芬诺酯混悬液灌胃。电针组参考《实验动物学》并按实验动物与人对照取穴原则,选取“中脘”穴、双侧“天枢”穴、“关元”穴进行针刺,加以通电,疏波,2Hz,电流强度为0.5—1m A,留针时间为20min,每日一次,连续治疗两周,药物组采用莫沙必利来治疗,每日一次,连续治疗两周,治疗结束后,观察大鼠一般情况,对各组大鼠粪便含水率进行观察,对各组大鼠结肠组织形态进行HE染色观察。实验二:免疫组化法检测各组大鼠结肠组织中p-ulk1蛋白含量表达将SpF级SD健康雄性大鼠24只随机被分为空白组、模型组、药物组、电针组各6只。制备模型与干预手段同实验一。各组大鼠在取材后,其结肠组织中p-ulk1蛋白含量的表达情况通过免疫组化法来检测。结果:1.大鼠一般情况观察:空白组大鼠毛发光亮,无稀疏脱落,大便成形,质地柔软,呈现长条形,性情温和,实验操作干预过程中配合较好;模型组、电针组、药物组各组大鼠造模后毛发晦暗,部分大鼠毛发散在脱落,大便较干,质地发硬,形状为长条或椭圆,性情易怒急躁,配合度低。电针组及药物组干预后与模型组相比,粪便质地较柔软,毛发光泽度有明显改善,急躁性情改善,配合度增高。2.首例黑便排出时间:与空白组大鼠首粒黑便排出时间相比,模型组、药物组、电针组排出时间明显延长,差异具有统计学意义(p1);与模型组相比,药物组首粒黑便排出时间显著缩短,差异具有统计学意义(p1),电针组首粒黑便排出时间明显缩短,差异具有统计学意义(p1)。3.粪便含水率:与空白组相比,模型组的粪便含水率减小,差异具有统计学意义(p1);与模型组相比,药物组粪便含水率增加,差异具有统计学意义(p1),电针组粪便含水率增高,差异有统计学意义(p1)。4.小肠推进率:与空白组相比,模型组的小肠推进率显著降低,差异具有统计学意义(p1);与模型组相比,药物组小肠推进速度明显增加,差异具有统计学意义(p1),电针组小肠推进率显著增高,差异有统计学意义(p1)。5.HE结果:HE染色结果表明,可见空白组结肠完整的结构,黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜层明显分层。黏膜层单柱状上皮的排列较为整齐、紧密,未见明显变性坏死。固有层内大量大肠腺呈单管状,内含较多杯状细胞。黏膜下层、肌层和外膜连接紧密,未观察到明显病理改变。其他亦未见明显病理变化;模型组大鼠结肠结构完好,黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜层明显分层,肌层与外膜紧密相连,比起模型组有明显恢复迹象;电针组样本结肠组织结构较为完好,未观察到显著的变性和坏死。粘膜下层、肌层与外膜连接紧密,未见明显病理变化。其他亦未见明显病理变化;6.免疫组化结果显示:与空白组相比,模型组大鼠p-ulk1蛋白表达显著升高(p1)。与模型组相比,药物组、电针组p-ulk1蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(p1)。与药物组相比,电针组p-ulk1蛋白表达下降,差异具有统计学意义(p1)。结论:1.电针可以改善STC大鼠结肠传输功能,促进大鼠结肠传输功能恢复。2.电针可以降低结肠组织内磷酸化自噬相关蛋白1(p-ulk1)过度表达,减轻STC大鼠结肠组织ICC的过度自噬,增加ICC细胞数量,促进结肠传输,从而改善便秘症状。

关键词：慢传输型便秘电针结肠 p-ulk1 自噬

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安胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠mTOR/ulk1信号通路的影响

安胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠mTOR/ULK1信号通路的影响

引用

作者：吕慧广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过构建慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）大鼠模型,观察安胃汤对CAG大鼠胃黏膜mTOR/ulk1信号通路的影响。方法:本课题共用实验大鼠84只,将其随机分为空白对照组、病理模型组、盐水对照组、胃复春组及安胃汤高、... 详细信息

目的:通过构建慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）大鼠模型,观察安胃汤对CAG大鼠胃黏膜mTOR/ulk1信号通路的影响。方法:本课题共用实验大鼠84只,将其随机分为空白对照组、病理模型组、盐水对照组、胃复春组及安胃汤高、中、低剂量组,每组各12只。除空白对照组以外,其他各组通过氨水、脱氧胆酸钠和饥饿失常等综合因素建立CAG模型,造模成功后各组每天一次灌胃给药。空白对照组予以正常饲养,盐水对照组给予0.9%氯化钠注射液,胃复春组给予0.78g胃复春片悬浊液,安胃汤高、中、低各剂量组分别给予浓度为2.0g/m L、1.0g/m L、0.5g/m L的安胃汤。除空白对照组外其他各组予以相应药物进行灌胃治疗,按照1m L/100g灌胃,1次/d,连续给药28天。药物干预结束后,将各组实验大鼠处死,留取胃黏膜组织标本,采用HE染色法观察各组大鼠胃黏膜病理形态改变,Western Blot检测mTOR、ulk1、p-ulk1蛋白相对表达含量,实时荧光定量pCR方法检测mTOR、ulk1的表达情况。结果:1.一般情况:空白对照组大鼠的精神状态较好,毛发光泽,体重较前明显增加,饮食及排便正常。模型对照组、盐水对照组大鼠精神较差,反应稍迟钝,动作缓慢,毛发粗糙无光泽,进食、饮水明显减少。安胃汤高、中剂量组精神较好,反应灵敏,体重逐步增加,毛发有光泽,饮食及排便基本正常。安胃汤低剂量组、胃复春组大鼠精神一般,体重无明显变化,饮食、排便基本正常,改善效果比安胃汤高、中剂量组的稍差,但比模型组的效果好。2.胃黏膜病理形态改变:空白组大鼠的胃黏膜正常,结构完整,各层排列均比较整齐,上皮细胞、腺体未见萎缩。模型组上皮细胞出现萎缩,排列紊乱、稀疏,腺体的数目明显比空白组少,部分出现肠上皮化生。安胃汤高剂量组、中剂量组胃黏膜各层的结构基本正常,腺体排列紧密、规则,少量的炎症细胞。安胃汤低剂量组和胃复春对照组的腺体减少,数量间于安胃汤高、中剂量组与模型组之间,腺体排列稍稀疏,个别腺体萎缩并伴有有肠上皮化生。3.胃黏膜中mTOR、ulk1、p-ulk1蛋白的表达:在WB中,与空白组比较,模型组的胃黏膜组织中mTOR、p-ulk1蛋白表达明显上调,ulk1蛋白的表达下调（p＜0.05）。与模型组比较,各治疗组均能够下调胃黏膜中mTOR、p-ulk1蛋白的表达,上调ulk1蛋白的表达（p＜0.05）。胃复春组大鼠的胃黏膜组织中mTOR、ulk1、p-ulk1的表达与安胃汤高、中、低剂量组相比较,差异无统计学意义（p＞0.05）。在pCR中,与空白组比较,模型组胃黏膜组织中mTOR的表达水平明显上调,ulk1的表达水平显著的下调（p＜0.05）。与模型组比较,各治疗组均能下调mTOR的表达,ulk1的表达水平显著的上调（p＜0.05）。胃复春组大鼠的胃黏膜组织中mTOR、ulk1的表达与安胃汤高、中、低剂量组相比较,差异无统计学意义（p＞0.05）。安胃汤高、中、低剂量组之间的mTOR、ulk1的表达进行两两比较,差异均无统计学意义（p＞0.05）。结论:1.安胃汤能够明显改善CAG大鼠的精神活动、饮食、反应灵敏度等一般情况;2.安胃汤可以明显改善CAG大鼠胃黏膜组织的病理变化,具有明显的抗CAG作用;3.安胃汤能够抑制CAG大鼠胃黏膜mTORC1信号转导通路,抑制mTOR的表达,上调ulk1蛋白的表达;4.安胃汤与临床有效药物胃复春片均能明显促进CAG大鼠胃黏膜的修复,而安胃汤高、中、低剂量组之间无明显量效关系。

关键词：安胃汤慢性萎缩性胃炎 mTOR ulk1 p-ulk1

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