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肿瘤防治研究 2005年第7期32卷 389-391,455页

作者：单保恩张静河北医科大学第四医院科研中心暨河北省肿瘤基因诊断预防和治疗重点实验室石家庄050011

目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达pgp的细胞系,用于筛选特异性逆转pgp的药物。方法经RTpCR反应得到小鼠肿瘤细胞pgpDNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染BMDC1细胞。采用Northern印迹法和流式细胞技... 详细信息

目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达pgp的细胞系,用于筛选特异性逆转pgp的药物。方法经RTpCR反应得到小鼠肿瘤细胞pgpDNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染BMDC1细胞。采用Northern印迹法和流式细胞技术检测细胞pgpmRNA和pgp分子的表达;以MTT法分析细胞的增殖活性;应用药物聚集和排放实验检测其生物学活性。结果成功构建了稳定表达特异性pgp基因和pgp分子的BMDC1(ADR+/+)细胞系。经阿霉素诱导,BMDC1(ADR+/+)细胞pgp的表达明显增高,在阿霉素增加至12000ng/mL时,仍有80%的细胞保持良好增殖状态,而BMDC1(wt)细胞在1000ng/mL时100%细胞死亡。BMDC1(ADR+/+)较(wt)细胞对MD123有较低的聚集量和较高的排放量,加入pgp逆转剂Verapamil后,BMDC1(ADR+/+)细胞MD123聚集量增加,药物外排作用消失。结论BMDC1(ADR+/+)细胞系具有较强的药物耐受性,可用于筛选特异性逆转pgp的药物,Verapamil可逆转pgp耐药性,具有Verapamil特性者可视为具有逆转pgp耐药性。

关键词：多药耐药 p-糖蛋白基因转导 p—gp细胞系

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