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Combination treatment of bisphosphonate(pamidronate) and Quercus infectoria semipurified fraction promotes proliferation and differentiation of osteoblast cell via expression of osterix and Runx2 marker

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Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 2018年第5期8卷 261-267页

作者： Abdullah Amira Raudhah Hapidin Hermizi Abdullah Hasmah Biomedicine Programme School of Health Sciences Universiti Sains Malaysia Environmental and Occupational Health Programme School of Health Sciences Universiti Sains Malaysia

Objective:To understand the effects of combination treatment of pamidronate with isolated Quercus infectoria semi-purified fraction(Qlsm-F)on human foetal osteoblast cell model(hFOB1.19 cell line)through assessment of Runt related transcription fraction-2(Runx2)and osterix(Osx).Methods:The isolation and purification of QIsm-F were conducted by chromatographic *** order to assess relative efficacy of QIsm-F to the osteoblast model,the determination of half maximal effective concentration(EC_(50))was performed by MTT *** 1.19 cells were cultured in DMEM F-12 and supplemented with 10%fetal bovine serum along with 1%penicillin-streptomycin incubated in 5%CO_2 at 37℃.Expression of Runx2 and Osx was assessed through western blotting and confirmed with immunofluorescence ***:Results of western blot analysis and immunofluorescence staining demonstrated that compared to hFOB 1.19 cells treated with single individual treatment of QIsm-F and control groups,levels of Runx2 and Osx were elevated with higher fluorescence intensity and more rapid proliferation in hFOB 1.19 cells treated with combined treatment of QIsm-F and ***:The finding demonstrates the synergistic effect between osteoporotic drug pamidronate and established *** combination treatment helps increase the efficiency of pamidronate acting on osteoblast cells by stimulating osteoblast proliferation and differentiation via expression of Runx2 and Osx.

关键词： Pamidronate Runx2 osterix Osteoblast Quercus infectoria semi-purified fraction

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osterix过表达对人牙周膜细胞骨向分化的影响

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华西口腔医学杂志 2013年第2期32卷 199-204页

作者：赵艳红李洪发王春玲杨强郑朝付雅丽天津医科大学口腔医院正畸科天津300070 山东大学口腔医院正畸科济南250012 天津市天津医院骨科天津300211

目的研究osterix(Osx)过表达对人牙周膜细胞受力后骨向分化的影响,探讨Osx与正畸牙周组织骨改建的关系。方法采用组织块法培养人牙周膜细胞,用重组质粒pcDNA3.1 flag-Osx转染人牙周膜细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blo... 详细信息

目的研究osterix(Osx)过表达对人牙周膜细胞受力后骨向分化的影响,探讨Osx与正畸牙周组织骨改建的关系。方法采用组织块法培养人牙周膜细胞,用重组质粒pcDNA3.1 flag-Osx转染人牙周膜细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测未转染组、转染空质粒组、转染Osx组细胞Osx mRNA和蛋白表达水平;并观察核心结合因子α1(Cbfα1)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥素(OPN)、骨钙素(OC)、骨涎蛋白(BSP)和a1(Ⅰ)型胶原蛋白(ColⅠ)的mRNA表达情况。3组细胞加载6 h离心力后,观察上述检测指标的变化。结果转染24 h后,相对未转染组,转染空质粒组Osx mRNA和蛋白水平无明显变化(P>0.05);而转染Osx组Osx mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),同时5个成骨标志基因的mRNA表达亦均明显升高(P<0.05,P<0.01)。加力6 h后,3组Osx和成骨标志基因表达水平均明显升高,但是转染Osx组Osx mRNA和蛋白表达增强更加显著,增加量约为其他两组的2倍,其ALP、OPN、OC、BSP和ColⅠ的mRNA表达亦升高更显著。结论 Osx过表达可以促进人牙周膜细胞在机械力作用下向成骨样细胞分化。Osx可能通过调控多种成骨基因的表达,从而在正畸牙周组织的骨改建过程中发挥着重要的作用。

关键词： osterix 过表达人牙周膜细胞机械刺激成骨分化

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Runx2参与调控osterix启动子活性及其基因表达(英文)

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生物化学与生物物理进展 2006年第10期33卷 957-964页

作者：孙冬梅刘中博赵岩宫振伟李丹王溪原曾宪录刘文广东北师范大学遗传与细胞研究所长春130024

尽管Runx2和osterix都是成骨细胞分化途径中关键的转录因子,但是Runx2是否能够调控osterix,还不为所知.研究发现,在非成骨细胞系,无论是间充质干细胞还是已分化的细胞,以及成骨细胞系中,Runx2都能诱导osterix的表达.同时Runx2能够上调3.... 详细信息

尽管Runx2和osterix都是成骨细胞分化途径中关键的转录因子,但是Runx2是否能够调控osterix,还不为所知.研究发现,在非成骨细胞系,无论是间充质干细胞还是已分化的细胞,以及成骨细胞系中,Runx2都能诱导osterix的表达.同时Runx2能够上调3.2kb人的osterix基因启动子活性.进一步实验证明,在这一段启动子中存在Runx2功能性的结合位点.因而,实验结果有力地支持了这样一个假设,即Runx2参与了osterix基因的表达调控.瞬时转染和荧光素酶双报告分析结果显示,在非成骨细胞中,osterix明显上调2.3kb的Ⅰ型胶原蛋白启动子活性,但Runx2却不能.这样的差别暗示,在成骨细胞分化过程中位于Runx2下游的转录因子osterix是刺激Ⅰ型胶原蛋白基因表达所必需的.

关键词： Runx2 osterix 基因表达调控

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人重组骨形成蛋白2作用下人牙周膜细胞osterix的表达变化

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中华医学杂志 2013年第14期93卷 1104-1108页

作者：赵艳红李洪发杨强王悦郑朝王春玲天津医科大学口腔医院正畸科 300070 天津市天津医院骨科山东大学口腔医学院正畸科

目的观察人重组骨形成蛋白2（rhBMP-2）作用下，人牙周膜细胞内osterix（Osx）mRNA和蛋白的表达变化，初步探讨牙周膜细胞成骨分化过程中BMP-2与Osx的信号传递途径。方法组织块法培养人牙周膜细胞至3代。用含rhBMP-2的培养液，按照不同... 详细信息

目的观察人重组骨形成蛋白2（rhBMP-2）作用下，人牙周膜细胞内osterix（Osx）mRNA和蛋白的表达变化，初步探讨牙周膜细胞成骨分化过程中BMP-2与Osx的信号传递途径。方法组织块法培养人牙周膜细胞至3代。用含rhBMP-2的培养液，按照不同浓度、不同时间分组进行培养，后采用实时定量反转录（Real—timeRT）-PCR和Western印迹法分别检测各组细胞OsxmRNA和蛋白表达变化。选用SB203580抑制细胞p38磷酸化，检测rhBMP．2诱导过程中磷酸化p38（P．p38）蛋白、OsxmRNA表达及细胞矿化反应变化。结果在rhBMP-2持续作用下，人牙周膜细胞内OsxmRNA表达明显升高并具有时效性；Osx蛋白表达从无到有，并逐渐增强。当rhBMP~浓度≤200斗g／L时，OsxmRNA和蛋白表达呈现为剂量依赖性增强；当rhBMP-2〉200μg／L时，Osx表达趋于平缓。在p38抑制剂SB203580干扰下，rhBMP-对p-p38及Osx的诱导增强作用被显著抑制（OsxmRNA表达：0．378±0．034比0．134±0．027，Osx蛋白表达：0．353±0．024比0．155±0．031，均P〈0．01），矿化结节形成亦相对较少且滞后。结论BMP_2对Osx具有显著正向调控作用，p38途径是此信号传递过程中的一个重要环节，BMP-2／p38／Osx通路可能是牙周膜细胞成骨分化过程中的一条重要信号通路。

关键词：骨形态发生蛋白质类 p38丝裂原活化蛋白激酶类牙周膜成骨分化 osterix

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osterix基因敲除及过表达对小鼠脊椎骨量的影响

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第三军医大学学报 2013年第21期35卷 2306-2309页

作者：陈思旭宗兆文贾敏华祥沈岳赵玉峰郭庆山刘道城第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤科、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究小鼠osterix基因敲除及过表达后对其脊椎骨量的影响及作用机制。方法将12周龄的野生型小鼠(WT)、osterix基因敲除小鼠(osterix-KO)和osterix过表达转基因小鼠(osterix-CA)分为3组(每组8只,均为雄性),分别采用X线摄像和HE染色观... 详细信息

目的研究小鼠osterix基因敲除及过表达后对其脊椎骨量的影响及作用机制。方法将12周龄的野生型小鼠(WT)、osterix基因敲除小鼠(osterix-KO)和osterix过表达转基因小鼠(osterix-CA)分为3组(每组8只,均为雄性),分别采用X线摄像和HE染色观察小鼠腰椎骨量的变化,TRAP染色检测破骨细胞水平,免疫组织化学检测NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨涎蛋白(BSP)和骨桥蛋白(OPN)表达水平,并将所得数据进行统计学分析。结果 osterixKO小鼠在X线和HE染色表现为腰椎骨密度和骨量增加,破骨细胞数量显著减少(Posterix-CA小鼠的脊椎X线、HE染色表现及破骨细胞数量与WT小鼠无明显差异。结论 osterix基因敲除小鼠脊柱骨吸收活性减弱伴成骨细胞分化能力降低,进而发生骨量明显增加。

关键词： osterix 脊椎骨量

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氟对成骨细胞Runx2和osterix及COL I A2表达的影响

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中国地方病学杂志 2011年第1期30卷 23-26页

作者：张亚楼刘开泰刘继文钟近洁新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室新疆医科大学公共卫生学院中国疾病预防控制中心教育培训处

目的研究氟对体外培养成骨细胞中Runx2和osterix及对其下游基因胶原（COL）I A2表达的影响.方法体外培养人成骨细胞,按染氟（NaF）剂量将成骨细胞分为0（对照）、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000、80.000、160.00... 详细信息

目的研究氟对体外培养成骨细胞中Runx2和osterix及对其下游基因胶原（COL）I A2表达的影响.方法体外培养人成骨细胞,按染氟（NaF）剂量将成骨细胞分为0（对照）、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000、80.000、160.000 mg/L组,培养24 h后收集细胞,提取RNA,采用荧光定量反转录聚合酶链反应[Real-time（RT）-PCR]方法检测Runx2和osterix mRNA及下游基因COL I A2的表达.结果成骨细胞在体外染氟培养24 h后,当NaF剂量为0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000 mg/L时,Runx2 mRNA表达水平（388.00±41.80、209.00±25.80、42.80±4.52、63.00±16.10、24.30±4.23、16.20±4.32）均高于对照组（1.00±0.12,P均＜0.05）;当NaF剂量为40.000、80.000、160.000、mg/L时,Runx2 mRNA表达水平（0.40±0.05、1.91±0.28、4.87±1.36）与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.当NaF剂量为1.250、2.500、5.000mg/L时,osterix mRNA的表达水平（4.04±1.67、229.00±51.00、46.40±10.60）均高于对照组（1.00±0.42,P均＜0.05）;当NaF剂量为10.000、20.000、40.000、80.000、160.000 mg/L时,osterix mRNA的表达水平（0.16±0.07、0.13±0.01、1.73±0.54、0.01±0.01、0.09±0.01）与对照组比较,差异无统计学意义（P均＞0.05）;当NaF剂量为0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000 mg/L时,COL I A2 mRNA的表达水平（2.27±0.89、8.03±2.31、14.20±2.75、7.66±1.34、8.96±2.30）均高于对照组（1.00±0.04,P＜0.05）;当剂量为160 mg/L时,COL I A2 mRNA的表达水平（0.54±0.01）低于对照组（P＜0.05）.结论氟可影响成骨细胞Runx2和osterixmRNA表达,表达水平与染氟的剂量有关.Runx2和osterix又可以调节COLI A2 mRNA表达.

关键词：氟化物中毒基因表达 Runx2 osterix 胶原Ⅰ型

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osterix在调控脊柱发育中的作用

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第三军医大学学报 2013年第3期35卷 220-222页

作者：宗兆文陈思旭贾敏沈岳赵玉峰郭庆山华翔 Jerry Feng 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤科创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 德克萨斯州卫生科学中心Baylor医学院美国达拉斯75246

目的观察核转录因子osterix在脊柱发育中的作用。方法采用Lox P/Cre系统,以2.3 kbⅠ型胶原蛋白为启动子,在小鼠成骨细胞和骨细胞中特异性敲除osterix,观察osterix敲除小鼠大体情况,采用X线摄片、HE染色和Nissl染色观察其对小鼠脊柱发育... 详细信息

目的观察核转录因子osterix在脊柱发育中的作用。方法采用Lox P/Cre系统,以2.3 kbⅠ型胶原蛋白为启动子,在小鼠成骨细胞和骨细胞中特异性敲除osterix,观察osterix敲除小鼠大体情况,采用X线摄片、HE染色和Nissl染色观察其对小鼠脊柱发育的影响。结果 osterix敲除小鼠后肢瘫痪,行走时前肢运动正常,拖动后肢爬行,osterix的敲除效率约为75%;X线片结果显示,osterix敲除小鼠形体变小,胸腰段脊柱出现楔形椎体、严重的脊柱侧弯和椎管狭窄等畸形;HE染色结果显示胸腰段脊椎结构发育严重异常;Nissl染色结果显示,受累节段脊髓神经元结构严重受损。结论 osterix在脊柱发育中起到重要作用,敲除后可导致脊柱侧弯等畸形。

关键词： osterix 脊柱发育基因敲除

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骨形态发生蛋白2/osterix信号通路调控的前成骨细胞分化

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中国组织工程研究 2016年第24期20卷 3581-3587页

作者：李成琳陈书兰任伟伟潍坊医学院口腔医学院山东省潍坊市261000 青岛市市立医院口腔医学中心山东省青岛市266071 湖北医药学院附属东风口腔医院儿童口腔科湖北省十堰市442000

背景:研究发现osterix基因的表达能够受到骨形态发生蛋白2信号通路的调控,从而调节骨的形成发育。目的:分析骨形态发生蛋白2/osterix信号通路对小鼠前成骨细胞分化的调控作用。方法:将骨形态发生蛋白2作用于前成骨细胞,利用实时定量RT-... 详细信息

背景:研究发现osterix基因的表达能够受到骨形态发生蛋白2信号通路的调控,从而调节骨的形成发育。目的:分析骨形态发生蛋白2/osterix信号通路对小鼠前成骨细胞分化的调控作用。方法:将骨形态发生蛋白2作用于前成骨细胞,利用实时定量RT-PCR法及免疫印迹法检测不同时间段osterix m RNA和蛋白的表达水平;构建pc DNA3.1/myc-osterix真核表达载体,并转染至前成骨细胞,利用实时定量RT-PCR法检测转染osterix真核表达载体和骨形态发生蛋白2作用后碱性磷酸酶、骨涎蛋白、细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)的m RNA表达水平。结果与结论:(1)实时定量RT-PCR法检测结果表明骨形态发生蛋白2上调osterix m RNA在小鼠前成骨细胞中的表达水平,并在24 h时上调作用最为显著;(2)免疫印迹法检测骨形态发生蛋白2显著上调osterix蛋白的表达水平;(3)成功构建了pc DNA3.1/myc-osterix真核表达载体,在转染小鼠前成骨细胞和以骨形态发生蛋白2作用后检测到碱性磷酸酶、骨涎蛋白、细胞外基质磷酸化糖蛋白的m RNA表达显著增强;(4)结果说明,骨形态发生蛋白2通过上调小鼠前成骨细胞中osterix的表达来调控碱性磷酸酶、细胞外基质磷酸化糖蛋白等成骨标志基因的合成,表明骨形态发生蛋白2/osterix这一信号通路在骨发育过程中具有重要作用。

关键词：骨形态发生蛋白质类信号传导成骨细胞组织工程组织构建骨细胞骨形态发生蛋白2 osterix 前成骨细胞实时定量RT-PCR 信号通路免疫印迹

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骨形态发生蛋白2通过Smad途径上调osterix的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2008年第1期24卷 40-45页

作者：潘秋辉李益广杨松海马纪谢在春于永春孙奋勇中山大学附属第二医院医学研究中心广州510120 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632 同济大学附属第十人民医院科教科上海200071

osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T... 详细信息

osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T3-E1,C2C12中Osx的转录水平显著上调,并且与成骨分化指标Col1a1,osteocalcin具有相似的表达动力学特征.而且,在C3H10T1/2细胞中过表达负显性(dominant negative,DN)Osx基因,能够有效抑制BMP2诱导的成骨分化.过表达BMP/Smad信号通路抑制蛋白Smad6,能够抑制Osx转录水平的上调.但是通过荧光素酶报告载体对Osx的启动子-1254^+85区域进行分析后未发现接受BMP通路调控的启动子区域.上述结果表明,BMP2能够通过Smad途径上调Osx的表达,并对成骨分化的过程具有十分重要的作用.

关键词： osterix 成骨细胞骨形态发生蛋白2

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氟铝联合对MC3T3-E1细胞Runx2、osterix mRNA表达的影响

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卫生研究 2011年第2期40卷 164-166页

作者：郭晓英蔡偌欣吴思思何杨孙贵范中国医科大学公共卫生学院地球化学性疾病研究室沈阳110001

目的观察氟铝单独及联合对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化及Runx2、osterix mRNA表达的影响。方法在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝,观察MC3T3-E1细胞增殖和分化能力,用RT-PCR法测定MC3T3-E1细胞Runx2和Ost... 详细信息

目的观察氟铝单独及联合对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化及Runx2、osterix mRNA表达的影响。方法在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝,观察MC3T3-E1细胞增殖和分化能力,用RT-PCR法测定MC3T3-E1细胞Runx2和osterix mRNA表达的情况。结果与对照组相比,氟铝联合染毒可显著提高MC3T3-E1细胞增殖和分化能力(PosterixmRNA的表达水平也显著提高(Posterix基因表达水平,从而促进骨形成。

关键词：氟铝 MC3T3-E1细胞 Runx2 osterix 氟铝联合染毒

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