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Amino acids essential for the interaction between cellular heat shock protein 90 and a Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-encoded protein kinase orf36

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Virologica Sinica 2016年第6期31卷 509-512页

作者： Chao Wang Jingchao Wang Wei Guo Cong Long Huan Wang Xiaoping Sun State Key laboratory of Virology Wuhan University Wuhan 430072 China.

Dear Editor,Protein-protein interactions（PPIs）often play important roles in biological processes（Zhang et al.,2016）.The split Renilla luciferase complementation assay（SRLCA）is one of the methods in studying *** is based on the complementation of the N-terminal domains of Renilla luciferase（LN）and C-terminal domains of Renilla luciferase （LC） non-functional halves of Renilla luciferase fused to possibly interacting proteins and emit luminescence （Deng et al., 2011; Jiang et al., 2010）（Supplementary Figure S1A）.

关键词： orf LC Amino acids essential for the interaction between cellular heat shock protein 90 and a Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus-encoded protein kinase orf36 LN

SARS冠状病毒未知蛋白orf 9b的克隆、表达和结构分析

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病毒学报 2009年第4期25卷 274-278页

作者：李文刘阳兰蕾刘铭楠首都医科大学基础医学院细胞生物学系北京100069 中国科学院生物物理研究所脑与认知研究中心北京100101

从SARS病毒基因组中克隆orf 9b基因并构建pET32-orf 9b原核表达质粒,在原核细胞中表达目的重组蛋白并将其纯化,经肠激酶酶切后,得到分子量为11 kD的orf 9b蛋白。ELISA检测表明重组orf 9b蛋白可以与SARS康复病人血清反应而不与健康人血... 详细信息

从SARS病毒基因组中克隆orf 9b基因并构建pET32-orf 9b原核表达质粒,在原核细胞中表达目的重组蛋白并将其纯化,经肠激酶酶切后,得到分子量为11 kD的orf 9b蛋白。ELISA检测表明重组orf 9b蛋白可以与SARS康复病人血清反应而不与健康人血清反应。用圆二色光谱和红外光谱初步分析了重组orf 9b蛋白的二级结构组成。圆二色光谱显示重组orf 9b蛋白中α-螺旋占12.5%,β-折叠占40%,无规则卷曲占47.5%,红外光谱显示重组orf 9b蛋白中α-螺旋占13.7%,β-折叠占47.5%,无规则卷曲占37.9%,两种检测方法对重组orf 9b蛋白结构分析的结果基本一致,提示orf 9b蛋白富含β折叠,而α-螺旋含量较少。获得该重组蛋白及对其结构的初步分析为进一步研究orf 9b蛋白的功能奠定基础。

关键词： SARS-CoV orf 9b 基因克隆蛋白表达二级结构

Genome Annotation and Comparative Genomics of orf Virus

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Advances in Microbiology 2014年第15期4卷 1117-1131页

作者： A. K. M. Firoj Mahmud K. M. Zillur Rahman Shuvra Kanti Dey Tahsina Islam Ali Azam Talukder Molecular Biology Department Umea University Umea Sweden Deptartment of Microbiology Jahangirnagar University Savar Bangladesh

orf virus (orfV), the etiological agent of contagious pustular dermatitis in small ruminants, belongs to members of the genus Parapoxvirus of the Poxviridae. The genome of the orfV is dsDNA of 139,962 bp which has about 89% coding region, 63% GC content and codes 130 proteins. There are four unique genes within the genome revealed by homology search of them two posses’ strong regulatory region and transmembrane helices. One of the orf-039 contains signal peptide indicating the possibilities to be secretory protein coding gene. Comparative genomic analysis reveals significant differences in Bovine Papular Stomatitis Virus (BPSV) strain BV-AR02 and orfV strain OV-SA00, and these may account for differences in host range. Interspecies sequence variability is observed in all functional classes of genes but is the highest in putative virulence/host range genes. Notably, orfV contains genes which are homologous of Vaccinia virus. Phylogenetic analysis reveals that although divergent, orfV virus is distinct from other known mammalian cowpox virus. An improved understanding of Parapoxvirus (PPV) biology will permit the engineering of novel vaccine viruses and expression vectors with enhanced efficacy and greater versatility. The novel vaccine will have a significant role in the economy of a country through the control of disease in an economically important and small ruminant caused by orfV.

关键词： orf Virus Contagious Pustular Dermatitis Comparative Genomics GLIMMER ACT Uniue Genes Novel Vaccine

南方水稻黑条矮缩病毒湖南分离物S9片段orf序列分析

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植物保护 2014年第3期40卷 138-142页

作者：凌晓曦刘勇张松柏匡炜彭静周灏明张德咏湖南农业大学植物保护学院长沙410128 湖南省植物保护研究所长沙410125

本文克隆了湖南省2011-2013年水稻的15个SRBSDV分离物S9两个基因,并测定了其核苷酸序列,序列分析与比较表明,S9两个orf序列同源性均大于99.5％.突变位点分析表明,S9编码的两个orf有3～9个突变位点,但大部分的核酸突变为无义突变.系统发... 详细信息

本文克隆了湖南省2011-2013年水稻的15个SRBSDV分离物S9两个基因,并测定了其核苷酸序列,序列分析与比较表明,S9两个orf序列同源性均大于99.5％.突变位点分析表明,S9编码的两个orf有3～9个突变位点,但大部分的核酸突变为无义突变.系统发育分析表明,S9编码的两个orf高度同源,处于相同的的系统发育分支.

关键词：南方水稻黑条矮缩病 orf S9片段序列分析

香蕉线条病毒orfⅡ基因的原核表达及抗体制备

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植物病理学报 2009年第1期39卷 100-103页

作者：何云蔚陈秀阮小蕾刘福秀李华平华南农业大学植物病毒研究室广州510642

orfⅡ gene of Banana streak virus GuangDong isolate(BSV-GD) was amplified from a BSV-GD recombinant plasmid by PCR,and the gene was expressed by being cloned into prokaryote expression vector pET-28b(+).The fusion protein was about 16.5 kDa in size and was soluble with SDS-PAGE *** purified protein was obtained by using the histidine labeling kit of N-terminus of *** antiserum was obtained by immunizing healthy rabbits with the purified *** blot and ELISA analysis showed that the special antiserum of BSV possessed high titer,which was tested as 1∶51 *** study was a base for further research on BSV including orfⅡ gene function and virus detection.

关键词：香蕉生产病毒病抗体制备原核表达线条 Ⅱ基因 orf 植株矮化

草莓镶脉病毒orf Ⅵ基因的原核表达与抗血清制备

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植物保护学报 2013年第6期40卷 512-516页

作者：江彤谢朝阳丁菲李祥宇贾琳安徽农业大学植物保护学院合肥230036 山东德州经济开发区东艺园林有限公司德州253000

为了分析草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)orfⅥ基因的功能,采用原核表达技术获得该基因表达的重组蛋白并制备其抗血清。利用PCR技术扩增得到SVBV中国分离物的orfⅥ基因,将此基因克隆到原核表达载体pET-SUMO上,获得重... 详细信息

为了分析草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)orfⅥ基因的功能,采用原核表达技术获得该基因表达的重组蛋白并制备其抗血清。利用PCR技术扩增得到SVBV中国分离物的orfⅥ基因,将此基因克隆到原核表达载体pET-SUMO上,获得重组质粒pET-SUMO-orfⅥ。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导与Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为90 kD的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,采用间接ELISA和Western blot方法测定抗血清的效价、反应灵敏度以及orfⅥ基因在本氏烟中的瞬时表达。结果显示,间接ELISA法测定抗血清对重组蛋白的效价达1∶256 000,Western blot法能够检测到稀释64 000倍的重组蛋白。利用稀释2000倍的抗血清,仍能够检测出SVBV中国分离物和美国分离物orfⅥ基因在本氏烟中瞬时表达的蛋白。

关键词：草莓镶脉病毒 orf Ⅵ基因原核表达抗血清

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输血传播病毒orf2基因的克隆和原核表达

中国生物制品学杂志 2007年第3期20卷 181-183,186页

作者：白慕群周旭安静姜英兰州生物制品研究所第二研究室兰州730046

目的克隆输血传播病毒(TTV)兰州株orf2的基因,并构建原核表达载体。方法通过巢式PCR,从一份兰州地区无偿献血员血清中扩增TTV病毒的orf2基因,并克隆到pGEM-T载体中,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆到高效表达质粒pET22b(+)中,构建表达载... 详细信息

目的克隆输血传播病毒(TTV)兰州株orf2的基因,并构建原核表达载体。方法通过巢式PCR,从一份兰州地区无偿献血员血清中扩增TTV病毒的orf2基因,并克隆到pGEM-T载体中,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆到高效表达质粒pET22b(+)中,构建表达载体orf2-pET22,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的orf2融合蛋白。用纯化的重组orf2蛋白作为抗原,ELISA检测人血清样本中的TTV-IgG抗体。结果orf2基因与日本TA287株的同源性为99.3%。用TTV-PCR阳性的血清对重组蛋白进行了Western blot,结果在表达蛋白位置处出现了特异性反应条带。以orf2蛋白为抗原的ELISA检测结果具有较好的准确性。结论已成功克隆了orf2基因,并在原核细胞中表达。

关键词：输血传播病毒 orf 克隆原核表达

萝卜细胞质雄性不育的分子鉴定及orf138/orfB基因序列差异性分析

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西南农业学报 2017年第6期30卷 1262-1267页

作者：李晓梅柴靓杨峰冉茂林四川省农业科学院水稻高粱研究所四川德阳618000 四川省农业科学院作物研究所四川成都610066 蔬菜种质与品种创新四川省重点实验室四川成都610066

【目的】本研究旨在了解萝卜雄性不育细胞质的分子特征。【方法】以8份萝卜细胞质雄性不育系及其保持系、5份不育材料及6个萝卜品种为试材,利用线粒体基因orf138及orf B为分子标记,设计特异引物对材料进行扩增,并对扩增产物进行测序分... 详细信息

【目的】本研究旨在了解萝卜雄性不育细胞质的分子特征。【方法】以8份萝卜细胞质雄性不育系及其保持系、5份不育材料及6个萝卜品种为试材,利用线粒体基因orf138及orf B为分子标记,设计特异引物对材料进行扩增,并对扩增产物进行测序分析。【结果】8份萝卜细胞质雄性不育系、5份不育材料及5个萝卜品种检测到含有orf138特异片段,为Ogura胞质类型,不育系相应保持系则未检测到特异片段;对扩增产物测序发现所有Ogura胞质材料可分为2种类型,Type A和Type H;27份材料orf B特异扩增后,其产物按编码区核苷酸序列的差异可分为2个类型,Ogura胞质中序列一致,普通胞质中序列一致。【结论】由此可见,orf138与orf B基因在Ogura胞质与普遍胞质间均差异明显,可利用orf138的有无及orf B基因的核苷酸序列差异进行胞质类型鉴定。

关键词：萝卜(Raphanus sativus L.) 雄性不育细胞质分子鉴定 orf138 orf B

香蕉线条病毒orf I基因的原核表达及抗体制备

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华南农业大学学报 2009年第3期30卷 18-21页

作者：何云蔚陈秀阮小蕾沈文锦刘福秀李华平华南农业大学植物病毒研究室广东广州510642

利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的orf I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以... 详细信息

利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的orf I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以不可溶的包涵体形式存在,将其变性溶解后利用N端的组氨酸标签进行纯化.以纯化产物为抗原免疫兔子制备了香蕉线条病毒的阳性兔抗血清,Western blot和ELISA分析表明,制备的兔抗血清为香蕉线条病毒的高效特异性抗血清,效价高达1∶51 200.

关键词：香蕉线条病毒 orf I 原核表达抗血清