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opcml对卵巢癌细胞抑制的体内外实验研究

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肿瘤防治研究 2007年第2期34卷 121-124,164页

作者：姚德生李力 Kenneth Garson Barbara C Vanderhyden 广西医科大学肿瘤医院妇瘤科南宁530021 加拿大渥太华大学癌症中心

目的探讨opcml在体外、体内对卵巢癌细胞的影响。方法将opcml用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验、细胞周期的分析和体内成瘤试验等来研究opcml在卵巢癌细胞中的... 详细信息

目的探讨opcml在体外、体内对卵巢癌细胞的影响。方法将opcml用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验、细胞周期的分析和体内成瘤试验等来研究opcml在卵巢癌细胞中的功能。结果(1)opcml能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞,转导效率几乎达100%,同时达到稳定的表达,Westernblot能检测到opcml(60kDa)和GFP(27kDa)基因蛋白在靶细胞中的表达;(2)在A2780细胞系,转导入opcml后的细胞(A2780-opcml)的增殖明显的比未转基因(A2780)或仅转空载体(A2780-pWPI)者慢(Popcml对细胞的增殖无明显的影响(P>0.05);(3)用流式细胞仪法对细胞周期分析显示,opcml对A2780的细胞周期有明显的滞留作用(Popcml能明显增强细胞的粘附力;(5)表达opcml的A2780细胞在裸鼠皮下仅有一个(1/4)有肿瘤生长,体积显著小于A2780及A2780-pWPI组(4/4)(Popcml蛋白在肿瘤组织中的表达。结论慢病毒载体作为转基因的工具,具有高效转导率和稳定表达的特点;opcml能够增加细胞的粘附能力,抑制A2780的增殖和体内成瘤,提示opcml可能是一个新的抑癌基因。

关键词： opcml 卵巢癌慢病毒载体基因转移移植瘤模型

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opcml抑制卵巢癌细胞的体外实验研究

广西医科大学学报 2007年第2期24卷 266-269页

作者：谭媛姚德生李力广西医科大学广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科南宁530021

目的:探讨鸦片受体类的细胞黏附因子opcml在体外对卵巢癌细胞的影响。方法:将opcml用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖实验、细胞周期分析和细胞聚合力实验观察OPC-ML对卵巢癌细胞的影... 详细信息

目的:探讨鸦片受体类的细胞黏附因子opcml在体外对卵巢癌细胞的影响。方法:将opcml用重组慢病毒转导入人卵巢癌细胞A2780、OCC1和正常小鼠卵巢上皮细胞CD1。通过细胞增殖实验、细胞周期分析和细胞聚合力实验观察OPC-ML对卵巢癌细胞的影响。结果:①opcml基因能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞,转导效率可达100%,同时达到稳定的表达,Western blot能检测到opcml和标志绿色荧光GFP蛋白在靶细胞中的表达。②细胞增殖实验显示,A2780细胞中,转导opcml基因72h后的细胞(即A2780-opcml细胞)数为(7.6±1.0)×105个,显著少于未转导基因(即A2780)或仅转导空载体(即A2780-pWPI)的细胞[分别为(20.0±2.6)×105和(18.1±1.7)×105个(Popcml基因对细胞的增殖无明显的影响(P>0.05);③细胞周期分析显示,opcml基因对A2780细胞的细胞周期有明显的阻滞作用[转导前、后分别为66.5%、75.1%(P0.05);④细胞聚合力实验显示,opcml基因能明显增强细胞的黏附力(Popcml能够增加细胞的黏附能力,抑制人卵巢癌细胞A2780的增殖,opcml可能是一个新的抑癌基因。

关键词： opcml 卵巢癌细胞株慢病毒载体基因转移

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携带opcml基因的慢病毒表达质粒的构建

现代妇产科进展 2006年第7期15卷 518-521,i0001页

作者：姚德生李力 Kenneth Garson Barbara C.Vanderhyden 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科南宁530021 加拿大渥太华大学癌症中心

目的:建立携带和表达opcml基因的慢病毒(lentiviral viruses,LV)表达质粒。方法:用内切酶将opcml基因从已构建的表达质粒pcDNA3-opcml上切下,插入慢病毒载体pWPI-GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI-opcml,通过酶切、测序和检测验证opcml蛋白... 详细信息

目的:建立携带和表达opcml基因的慢病毒(lentiviral viruses,LV)表达质粒。方法:用内切酶将opcml基因从已构建的表达质粒pcDNA3-opcml上切下,插入慢病毒载体pWPI-GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI-opcml,通过酶切、测序和检测验证opcml蛋白后,将pWPI-opcml、pCMV-dR8.74和pMDG共转染包装细胞293T,获得重组慢病毒,再感染靶细胞A2780,通过检测标志蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)和目的蛋白opcml进一步验证pWPI-opcml在细胞中opcml的表达。结果:(1)pWPI-opcml中携有正确的opcml基因,并能在人类细胞中表达;(2)pWPI-opcml共转染包装细胞293T能产生重组病毒;(3)目的基因opcml能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞A2780,并达到稳定的表达,转导效率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Western blotting能检测到opcml和GFP蛋白在靶细胞中的表达。结论:pWPI-opcml能在人细胞中表达opcml蛋白,共转染包装细胞获得的重组慢病毒能感染人细胞,作为转基因的工具,具有高效性。

关键词：基因 opcml 卵巢肿瘤慢病毒载体基因转移

候选抑癌基因opcml在人乳腺癌中的表达及其临床意义

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第三军医大学学报 2013年第23期35卷 2565-2568页

作者：李金平王昇李宏廉斌江海峰任国胜宁夏医科大学总医院:肿瘤医院肿瘤外科银川750004 宁夏医科大学总医院:肿瘤医院病理科银川750004 重庆医科大学附属第一医院肿瘤分子及表观遗传学实验室重庆400016

目的探讨候选抑癌基因opcml(opioid-binding protein/cell adhesion molecule-like)在人乳腺癌组织中的蛋白表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测117例人乳腺癌组织、41例癌旁组织及24例乳腺腺病组织中的候选抑癌基因opcml蛋白表... 详细信息

目的探讨候选抑癌基因opcml(opioid-binding protein/cell adhesion molecule-like)在人乳腺癌组织中的蛋白表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测117例人乳腺癌组织、41例癌旁组织及24例乳腺腺病组织中的候选抑癌基因opcml蛋白表达情况,结合临床病理资料进行统计学分析。结果 117例人乳腺癌组织、41例癌旁组织及24例乳腺腺病组织中opcml蛋白的阳性表达率分别为19.66%(23/117)、90.24%(37/41)、70.83%(17/24),3种乳腺组织中的表达差异有统计学意义(Popcml蛋白表达与组织学分级、淋巴结是否转移、pTNM分期显著相关(Popcml蛋白表达与Ki-67(r=-0.261)、HER-2(r=-0.294)、EGFR(r=-0.242)呈负相关关系(Popcml在人乳腺癌组织中呈现低表达或表达缺失,且与Ki-67、HER-2及EGFR的表达呈负相关,可能在乳腺癌的发展中起抑癌作用。

关键词：乳腺癌 opcml 免疫组化

opcml在胃癌中的表达及对胃癌细胞生物学的作用

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OPCML在胃癌中的表达及对胃癌细胞生物学的作用

作者：李明暨南大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:胃癌是一种有着很高死亡率和发病率的癌症。寻找分子标志物对胃癌的诊断及预后有着非常重要的意义。opcml(Opioid-binding protein/cell adhesion molecule-like),为鸦片受体类的细胞黏附因子,一种抑癌基因,主要定位于... 详细信息

研究背景及目的:胃癌是一种有着很高死亡率和发病率的癌症。寻找分子标志物对胃癌的诊断及预后有着非常重要的意义。opcml(Opioid-binding protein/cell adhesion molecule-like),为鸦片受体类的细胞黏附因子,一种抑癌基因,主要定位于人类染色体11q25。目前,opcml在胃癌中表达的研究较少,本研究旨在检测人胃癌组织中opcml基因的表达及临床意义,并分析其过表达后对胃癌细胞株AGS增殖、克隆形成和迁移能力的影响,探讨opcml基因在胃癌发生和发展过程中的可能作用机制。方法： (1)采用免疫组织化学技术检测opcml蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并分析其与胃癌临床病理学特征和预后的关系。(2)RT-PCR法检测opcml在人胃癌细胞株(7901、AGS、BGC823、MKN28、N87、KATO、SNU1)及正常胃粘膜组织中基因的扩增情况。(3)构建表达载体pc DNA3.1-opcml,以pc DNA3.1-Vector作为对照组,转染至胃癌细胞株AGS中,RT-PCR和Western分别检测转染后opcml m RNA和蛋白的表达水平。(4)通过CCK8法、平板克隆形成实验、软琼脂实验和划痕实验,分析opcml表达上调后,对胃癌细胞株AGS增殖、克隆形成和迁移能力等生物学作用的影响。结果： (1)opcml在胃癌组织中呈现低表达,占68.6%(81/118);在118例胃癌组织中opcml表达与胃癌浸润深度和分化程度有显著相关性(Popcml的表达、胃癌浸润深度、淋巴结转移和远处转移密切相关(Popcml在胃癌细胞的m RNA表达水平显著低于正常胃粘膜组织。(3)RT-PCR、Western分别显示pc DNA3.1-opcml转染后AGS细胞株中opcml m RNA和蛋白表达水平明显升高。(4)CCK8实验结果显示AGS细胞转染opcml基因后,增殖能力显著下降。(5)平板克隆形成实验显示opcml过表达抑制AGS细胞克隆(数量、体积)的形成。转染组和对照组形成的克隆数分别为(8.33±5.29)和(29.87±10.82),平均克隆形成率相差72﹪。(6)软琼脂实验转染组和对照组形成克隆数分别为(23.33±6.66)和(69.67±10.50),相对克隆形成率差异为67﹪,两者具有统计学差异(Popcml在人胃癌组织及胃癌细胞株中低表达或者表达缺失;opcml在胃癌中的表达与胃壁浸润深度和分化程度显著相关;opcml表达与胃癌患者预后相关。(2)opcml对胃癌细胞的增殖和迁移等生物学行为有显著抑制作用。

关键词：胃癌 opcml 表达生物学行为

异硫氰酸苯乙酯影响膀胱癌细胞增殖及opcml基因表达的实验研究

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异硫氰酸苯乙酯影响膀胱癌细胞增殖及OPCML基因表达的实验研究

作者：文曙光南华大学

学位级别：硕士

目的观察异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对膀胱癌细胞opcml表达的影响,并探讨其在细胞生长增殖中的作用及可能的机制。方法体外培养膀胱癌细胞系T24,用不同浓度PEITC孵育后,采用MTT实验观察PEITC对T24细胞的增殖的影响;实时定量PCR和Western blo... 详细信息

目的观察异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对膀胱癌细胞opcml表达的影响,并探讨其在细胞生长增殖中的作用及可能的机制。方法体外培养膀胱癌细胞系T24,用不同浓度PEITC孵育后,采用MTT实验观察PEITC对T24细胞的增殖的影响;实时定量PCR和Western blot分别检测不同浓度PEITC对T24细胞中opcml mRNA和蛋白表达影响;提取基因组DNA,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测opcml启动子上游甲基化状态,并测定PEITC处理前后细胞内甲基化活性的变化。同时采用实时定量PCR和Western blot分别检测细胞内DNMT1 mRNA和蛋白表达水平;最后建立裸鼠异种移植瘤模型,观察不同浓度PEITC对移植瘤生长的影响、opcml和DNMT1的表达水平。结果1.10,30和50μmol/L PEITC处理T24细胞后,MTT结果显示,在此浓度范围内T24细胞的增殖能力明显降低,并呈一定的时间依赖性。2.实时荧光定量PCR结果显示,未处理组细胞中opcml mRNA表达水平很低。而用10,30和50μmol/L PEITC处理后,随着PEITC浓度的递增,opcml mRNA表达有所增加,opcml蛋白表达水平趋势也与之类似。3.MSP结果显示,PEITC可抑制opcml启动子区域DNA甲基化,也能降低T24细胞内甲基化活性;同时,PEITC处理也能降低细胞内DNMT1的mRNA和蛋白表达水平。4.PEITC可抑制裸鼠皮下肿瘤的生长以及移植瘤组织中DNMT1的表达,也能上调移植瘤中opcml的表达水平。结论1.PEITC能抑制T24细胞的增殖以及移植瘤的生长;2.PEITC通过抑制T24细胞的甲基化活性,从而上调opcml基因的表达而发挥作用。

关键词：异硫氰酸苯乙酯甲基化膀胱癌 opcml

候选抑癌基因opcml在人乳腺癌组织及细胞系中的表达及意义

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候选抑癌基因OPCML在人乳腺癌组织及细胞系中的表达及意义

作者：李宏宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的探讨候选抑癌基因opcml在人乳腺癌组织、癌旁组织、乳腺良性病变组织及人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231，MB468，MCF-7，SK-BR-3, T47D,BT-549）中的表达及临床意义。方法(1)应用组织芯片技术和免疫组织化学染色PV二步法检测opcml在12... 详细信息

目的探讨候选抑癌基因opcml在人乳腺癌组织、癌旁组织、乳腺良性病变组织及人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231，MB468，MCF-7，SK-BR-3, T47D,BT-549）中的表达及临床意义。方法(1)应用组织芯片技术和免疫组织化学染色PV二步法检测opcml在129例人乳腺癌组织、41例癌旁组织及49例乳腺良性病变组织中的表达情况，分析其与临床病理特征及乳腺癌分子标记物之间的关系。(2)Western-blot蛋白印记法检测opcml在人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231，MB468，MCF-7，SK-BR-3, T47D,BT-549）中的表达情况。结果1.129例乳腺癌组织中opcml的阳性表达率为20.16%（26/129），41例乳腺癌癌旁组织中的阳性表达率为90.24%（37/41），49例乳腺良性病变组织中的阳性表达率为75.51%（37/49）。opcml在乳腺良性病变组与乳腺癌组中表达水平有明显的统计学差异（popcml的表达水平明显低于乳腺癌癌旁组织及良性病变组织。2.在129例乳腺癌组织中opcml表达与组织学分级、淋巴结是否转移、pTNM分期有显著关系(Popcml基因表达与Ki67(r=-0.236)、HER2（r=-0.262)、EGFR（r=-0.243)呈负相关关系(Popcml在6种乳腺癌细胞株中的蛋白表达情况，结果发现opcml蛋白只在乳腺癌癌旁组织中表达，在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231，MB468，MCF-7，SK-BR-3, T47D,BT-549中opcml蛋白表达缺失。结论1.opcml基因在人乳腺癌组织中呈现低表达或缺失，其表达与组织学分级、淋巴结是否转移、pTNM分期有显著关系(Popcml在乳腺癌的发生、发展中可能具有一定作用。2.Western blot蛋白印记方法检测了opcml在6种人乳腺癌细胞株中的蛋白表达情况，结果发现opcml蛋白只在人乳腺癌癌旁组织中表达，在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231，MB468，MCF-7，SK-BR-3, T47D,BT-549中opcml蛋白表达缺失，提示opcml基因与乳腺癌发生、发展密切相关，有望成为乳腺癌早期诊断的表观遗传分子生物标志物。

关键词：候选抑癌基因 opcml 乳腺癌

候选抑癌基因opcml对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

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候选抑癌基因OPCML对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭...

作者：廉斌宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的探讨候选抑癌基因opcml转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（MB-231）后，观察其表达对MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法体外化学合成含有目的基因opcml的质粒pcDNA3.1-opcml作为实验组，空载体pcDNA3.1作为对照组，在Lipof... 详细信息

目的探讨候选抑癌基因opcml转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（MB-231）后，观察其表达对MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法体外化学合成含有目的基因opcml的质粒pcDNA3.1-opcml作为实验组，空载体pcDNA3.1作为对照组，在Lipofectamine2000（脂质体）介导下转染MB-231细胞，利用G418二硫酸盐筛选出成功转染的细胞，构建细胞模型。通过体外细胞平板克隆形成实验、体内裸鼠移植瘤实验检测实验组及对照组MB-231细胞的增殖情况，流式细胞计数（FCM）检测两组细胞凋亡率的变化，通过Transwell侵袭实验和细胞划痕愈合实验分别检测实验组及对照组细胞侵袭、迁移的能力。之后综合分析其统计学上有无差异，以Popcml和空载体pcDNA3.1成功转染人乳腺癌MB-231细胞，体外细胞平板克隆形成实验表明，opcml组MB-231细胞增殖能力较对照组下降，opcml组和pcDNA3.1转染组MB-231细胞的克隆形成率分别为：(28.67±2.52)%，(47.67±4.51)%，Popcml组MB-231细胞的凋亡率高于pcDNA3.1转染组[（21.99±1.14）%vs（15.08±1.66）%,Popcml组MB-231细胞的侵袭细胞数明显少于pcDNA3.1组和未转染组[(35.33±3.51)vs(63.26±4.36)、(61.37±8.21)]，Popcml组MB-231细胞的迁移距离(30.67±4.04)μm明显低于pcDNA3.1转染组（72.33±4.51）μm和未转染组（66.12±6.56）μm，Popcml基因的表达对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖有抑制作用，促进其凋亡，并抑制其侵袭、迁移能力。因此，opcml基因为一抑癌基因，可能作为乳腺癌基因治疗的一个候选靶点。

关键词：候选抑癌基因 opcml 乳腺癌增殖凋亡侵袭迁移

木犀草素通过逆转opcml基因甲基化抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖

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南方医科大学学报 2020年第4期40卷 550-555页

作者：董欣敏郑媞张子英白喜玲李华张剑内蒙古医科大学附属人民医院肿瘤内科内蒙古呼和浩特010010 内蒙古医科大学附属人民医院医务科内蒙古呼和浩特010010 内蒙古医科大学基础医学院药理学院内蒙古呼和浩特010110 内蒙古医科大学附属人民医院介入科内蒙古呼和浩特010010 内蒙古医科大学附属医院放疗科内蒙古呼和浩特010050

目的观察木犀草素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖以及对opcml基因表达的影响。方法体外培养MDA-MB-231细胞,加入终浓度为0(对照组)以及5、10和20μmol/L的木犀草素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;并提... 详细信息

目的观察木犀草素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖以及对opcml基因表达的影响。方法体外培养MDA-MB-231细胞,加入终浓度为0(对照组)以及5、10和20μmol/L的木犀草素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;并提取胞内总mRNA和蛋白,以实时定量PCR和Western blot检测opcml的mRNA及蛋白变化;同时采用甲基化特异性PCR(MSP)检测opcml启动子区域的甲基化水平,并分析细胞内甲基化酶的活性。结果 MTT结果显示,MDAMB-231细胞经5、10以及20μmol/L木犀草素孵育24 h后,随着浓度的递增,细胞活性逐渐降低(Popcml mRNA和蛋白(Popcml启动子的甲基化状态,上调非甲基化opcml的水平,并能降低细胞内甲基化酶的活性(Popcml基因的表达以及甲基化水平有关。

关键词：木犀草素乳腺癌 opcml 甲基化