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耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中OXA-48家族碳青霉烯酶分子流行病学研究进展

中国感染与化疗杂志 2019年第6期19卷 687-690页

作者：韩仁如胡付品复旦大学附属华山医院抗生素研究所国家卫健委临床药理重点实验室

1引言碳青霉烯类抗生素对超广谱β内酰胺酶(ESBL)和头孢菌素酶具有高度的稳定性,但可被碳青霉烯酶水解、灭活,随着临床治疗药物的广泛应用,产生了耐碳青霉烯类的菌株,这给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战[1]。近年来,耐碳青霉烯类肠杆... 详细信息

1引言碳青霉烯类抗生素对超广谱β内酰胺酶(ESBL)和头孢菌素酶具有高度的稳定性,但可被碳青霉烯酶水解、灭活,随着临床治疗药物的广泛应用,产生了耐碳青霉烯类的菌株,这给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战[1]。近年来,耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的比率增加,特别是耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)比率增加。

关键词：耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌 OXA-48 碳青霉烯酶耐药质粒

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产OXA-48肺炎克雷伯菌的碳青霉烯异质性耐药机制研究

产OXA-48肺炎克雷伯菌的碳青霉烯异质性耐药机制研究

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作者：柯建飞浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的细菌耐药是抗感染领域较为棘手的问题,而碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的出现和流行更是对全球公共卫生领域产生了严重威胁。临床工作中,我们发现产OXA-48-like碳青霉烯酶的肺炎克... 详细信息

目的细菌耐药是抗感染领域较为棘手的问题,而碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的出现和流行更是对全球公共卫生领域产生了严重威胁。临床工作中,我们发现产OXA-48-like碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌通常介导较低的耐药水平,但用碳青霉烯类抗生素单药治疗却达不到治疗效果,这很可能与异质性耐药有关。本研究旨在探索产OXA-48肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药的机制,为临床联合用药提供理论依据。方法通过PCR从273株临床分离的肺炎克雷伯菌中筛选blaOXA-48-like基因,对blaOXA-48-like阳性菌株进行全基因组学分析,明确其ST型、耐药基因及质粒基因结构。通过群体谱分析(Population analysis profile,PAP)明确研究菌株的碳青霉烯异质性耐药表型。挑选耐药亚群,并通过传代实验,明确耐药亚群的异质性和稳定性。通过qRT-PCR明确原始临床菌株及其耐药亚群的blaOXA-48-like的mRNA相对表达量,明确肺炎克雷伯菌异质性耐药与OXA-48的关系。并通过全基因组学测序及比较基因组学分析,探讨产OXA-48肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药的潜在机制。结果从273株临床肺炎克雷伯菌株中筛选获得4株携带blaOXA-48-like基因的肺炎克雷伯菌,全基因组学提示其均为ST15型,携带的blaOXA-48-like基因型都为blaoxa-232。经PAP实验证实4株菌株均为亚胺培南和美罗培南的异质性耐药菌株。耐药亚群大部分菌株为均一性耐药,少部分仍具有异质性耐药表型,且耐药亚群的药敏表型和均一性表型传代后都具有稳定性。通过比较原始临床菌株及其耐药亚群blaOXA-48-like的mRNA相对表达量,发现耐药亚群blaOXA-48-like的mRNA相对表达量均高于原始临床菌株。比较基因组学分析,多株耐药亚群菌株中发现有外膜孔蛋白ompC和D-蛋氨酸转运系统metl等突变。结论 4株携带blaOXA-48-like基因的肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南异质性耐药,耐药亚群大部分为均一性耐药,其药敏表型及均一性表型具有稳定性。肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药与blaOXA-48-like表达量升高有关,外膜孔蛋白ompC和D-蛋氨酸转运系统metl的突变可能为产OXA-48肺炎克雷伯菌碳青霉烯异质性耐药另一潜在机制。

关键词：异质性耐药碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌 OXA-48

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呼吸内科患者产OXA-48型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染的危险因素及临床特征

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中华医院感染学杂志 2020年第10期30卷 1517-1522页

作者：张侃刘长鑫马琳王博杨继勇管希周解放军总医院第一医学中心呼吸与危重症医学科北京100853 解放军总医院第一医学中心微生物科北京100853

目的分析呼吸内科患者产OXA-48型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)感染的危险因素及临床特征。方法选择解放军总医院呼吸内科2013年7月-2015年7月产OXA-48型CRKP感染患者共27例为病例组,同时... 详细信息

目的分析呼吸内科患者产OXA-48型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)感染的危险因素及临床特征。方法选择解放军总医院呼吸内科2013年7月-2015年7月产OXA-48型CRKP感染患者共27例为病例组,同时期碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌感染患者71例作为对照组,并根据是否产超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrumβ-lactamase,ESBL)分为ESBL阳性组17例及ESBL阴性组54例,收集患者临床资料,分析患者产OXA-48型CRKP感染的危险因素及临床特点与耐药特性。结果单因素分析显示患者产OXA-48型CRKP感染的危险因素有较长的风险时间,感染前住院时间及ICU住院时间超过1周,气管插管或气管切开,机械通气,内窥镜手术,留置胃管与尿管和中心静脉置管,激素使用,喹诺酮类、3或4代头孢菌素、β-内酰胺或β-内酰胺酶抑制剂、碳青霉烯类、米诺环素等抗菌药物接触;多因素非条件Logistic回归显示接触3或4代头孢菌素(OR=25.804,P=0.020)和留置中心静脉置管(OR=22.548,P=0.033)是产OXA-48型CRKP感染的独立危险因素。病例组对亚胺培南、美罗培南、头孢吡肟耐药率分别为66.67%、55.56%、48.15%,对头孢噻肟、厄他培南、环丙沙星耐药率均为100.00%。病例组90 d全因病死率高于ESBL阳性组和阴性组(χ~2=32.176,P<0.001)。结论减少3或4代头孢菌素和碳青霉烯类抗菌药物的使用,尽可能的缩短机械通气的时间和住院时间,减少侵入性有创操作的频次,严格遵守感染控制规则,是预防感染的有效策略。

关键词： OXA-48 肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶危险因素

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Phenotypic Detection of Enterobacterales Strains Susceptible of Producing OXA-48 Carbapenemase

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Advances in Microbiology 2024年第2期14卷 115-121页

作者： Abdoulaye Seck Abdou Diop Babacar Ndiaye Assane Dieng Awa Ba Amadou Diop Chantal Mahou Douala-Djemba Thierno Abdoulaye Diallo Cheikh Anta Diop University of Dakar Dakar Senegal Medical Biology Laboratory Pasteur Institute of Dakar Dakar Senegal

Background: Nowadays, emergence of Carbapenemase-Producing Enterobacterales (CPE) throughout the world has become a public health problem, especially in countries with limited resources. In recent years, CPE of type OXA-48 (Ambler class D) have been identified in Dakar. The aim of this study was to evaluate the phenotypic detection of OXA-48 CPE using a temocillin disc (30 μg). Methodology: A retrospective study was carried out at Medical Biology Laboratory of Pasteur Institute in Dakar on Ertapenem-Resistant Enterobacterales (ERE) strains isolated from 2015 to 2017. These strains were then tested with a 30 μg temocillin disc. Any strain resistant to temocillin (inhibition diameter Results: Forty-one ERE isolated during the study period were tested, of which 34 (82.9%) were OXA-48 based on phenotypic detection using temocillin disc and confirmed by PCR (100%). OXA-48 CPE strains detected were composed of Klebsiella pneumoniae (n = 14;41.2%), Enterobacter cloacae (n = 8;23.5%), Escherichia coli (n = 7, 20.5%), Citrobacter freundii (n = 3;8.8%), Cronobacter sakazakii (n = 1;3%) and Morganella morganii (n = 1;3%). Conclusion: Temocillin resistance has a good positive predictive value for detecting OXA-48 CPE by phenotypic method, confirmed by PCR. Temocillin is therefore a good marker for detection of OXA-48 CPE except Hafnia alvei.

关键词： Ertapenem Temocillin Phenotypic Detection Carbapenemase-Producing Enterobacterales OXA-48

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过表达blaNDM-1、blaOXA-48基因的BL21(DE3)菌株的耐药性、适应性及其对MH-S细胞炎性反应的研究

过表达blaNDM-1、blaOXA-48基因的BL21(DE3)菌株的耐药性、适应性...

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作者：潘亚菲宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的检测临床肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的敏感性及其耐药基因;构建NDM-1、OXA-48过表达菌株,明确NDM-1、OXA-48对BL21(DE3)菌株耐药性和适应性的影响;同时探究过表达菌株对MH-S细胞炎性反应的影响以及过表达后细菌转录谱的变化。... 详细信息

目的检测临床肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的敏感性及其耐药基因;构建NDM-1、OXA-48过表达菌株,明确NDM-1、OXA-48对BL21(DE3)菌株耐药性和适应性的影响;同时探究过表达菌株对MH-S细胞炎性反应的影响以及过表达后细菌转录谱的变化。方法1.采用WHONET5.6软件筛查2017-2019年宁夏地区某三甲医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)分离株,统计其标本类型、科室分布和药敏结果;采用m CIM联合e CIM实验检测碳青霉烯酶表型;采用PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因(NDM、OXA-48、KPC、VIM、IMP)并进行测序。2.构建pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)、pRSFDuet-1-NDM-1-BL21(DE3)过表达载体,用SDS-PAGE和RT-PCR法检测NDM-1、OXA-48分别在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达情况;K-B法测NDM-1及OXA-48过表达菌株的耐药性,通过生物膜形成实验和血清抵抗力实验检测细菌的适应性。3.将BL21(DE3)、pRSFDuet-1-NDM-1-BL21(DE3)、pRSFDuet-1-BL21(DE3)、pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)和pET32a(+)-BL21(DE3)菌株分别与MH-S细胞共培养,利用RT-PCR方法检测细胞Toll样受体2、4(TLR2、TLR4)和NF-кB p65 m RNA的表达水平。4.将BL21(DE3)、pRSFDuet-1-NDM-1-BL21(DE3)、pRSFDuet-1-BL21(DE3)、pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)和pET32a(+)-BL21(DE3)菌株分别与MH-S细胞共培养,采用ELISA法检测细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α和TGF-β的表达情况。5.提取过表达细菌RNA后进行转录组测序和生物信息学分析。结果1.94株CRE中,40%分离自痰标本,16%分离自引流液,其余来自尿液标本、胆汁标本等。分离率较高的科室有ICU(20株)、PICU(17株)。94株CRE对头孢菌素类、β-内酰胺类等耐药率均在80%以上,对米诺环素和黏菌素B的耐药率较低,为26.60%和15.96%。92.55%(87/94)的CRE产碳青霉烯酶;其中79.31%(69/87)产金属酶,19.54%(17/87)产丝氨酸蛋白酶。耐药基因结果显示:检出率依次为bla 61.70%(58/94)、bla 34.04%(32/94)、bla 17.02%(16/94)、bla 14.89%(14/94)。bla 4.26%(4/94)。测序比对显示:bla 阳性均为KPC-2型,58株NDM阳性的菌株中有46株(79.31%)为NDM-5亚型,12株(20.69%)为NDM-1亚型。2.pRSFDuet-1-NDM-1-BL21(DE3)与pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)菌株经IPTG诱导后均有蛋白和m RNA表达。在最佳诱导条件下使NDM-1、OXA-48过表达后,pRSFDuet-1-NDM-1-BL21(DE3)与pET32a(+)-OXA-48-BL21(DE3)菌株对IPM、MEM、CRO和FEP四种抗生素由敏感变为耐药,且在血清中存活率和生物膜生成显著增加(POXA-48-BL21(DE3)和MH-S细胞共培养后,与pET32a(+)-BL21(DE3)组相比TLR2在6h、12h的m RNA表达量显著增加(POXA-48-BL21(DE3)和MH-S细胞共培养后,与pET32a(+)-BL21(DE3)组相比IL-6在12h、24h的表达量显著增加(P<0.05);与正常细胞组相比TNF-α在6h、12h和24h的表达量均显著增加(P<0.01)。5.RNA-seq结果表明,pRSFDuet-1-NDM-1-BL21(DE3)与pRSFDuet-1-BL21(

关键词： CRE NDM-1 OXA-48 耐药性 RNA-seq

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质粒介导苯唑西林酶-48型细菌的研究进展

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国际流行病学传染病学杂志 2012年第2期39卷 141-143页

作者：李保松王荣华山东省滨州医学院附属医院肛肠疝外科 256603

苯唑西林酶（oxa）-48是近年来发现的一种新的D类碳青霉烯酶，具有较强的碳青霉烯类药物水解活性。编码该酶的基因位于质粒等可移动遗传因子上，使得该类酶基因可在细菌间广泛传播；且产此类酶的细菌对几乎所有β内酰胺类抗生素耐药。... 详细信息

苯唑西林酶（oxa）-48是近年来发现的一种新的D类碳青霉烯酶，具有较强的碳青霉烯类药物水解活性。编码该酶的基因位于质粒等可移动遗传因子上，使得该类酶基因可在细菌间广泛传播；且产此类酶的细菌对几乎所有β内酰胺类抗生素耐药。此文就OXA-48的流行病学特征、分子生物学特性、耐药机制等进行综述。

关键词：质粒 OXA-48 肠杆菌科肺炎克雷伯菌

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三种重要的动物源碳青霉烯酶研究进展

三种重要的动物源碳青霉烯酶研究进展

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会...

作者：李基云张荣民刘志海尹文娟崔明全汪洋吴聪明中国农业大学动物医学院

碳青霉烯类药物是一类抗菌谱广,抗菌活性最强的非典型的β内酰胺类抗生素。随着研究的发现,动物源碳青霉烯耐药细菌的检出率越来越高,给养殖业带来极大的威胁,应该加深对其的研究。目前,世界范围内动物源碳青霉烯酶以NDM-1、OXA-48和VI... 详细信息

碳青霉烯类药物是一类抗菌谱广,抗菌活性最强的非典型的β内酰胺类抗生素。随着研究的发现,动物源碳青霉烯耐药细菌的检出率越来越高,给养殖业带来极大的威胁,应该加深对其的研究。目前,世界范围内动物源碳青霉烯酶以NDM-1、OXA-48和VIM为主要流行特征。为此,本文将从这三种主要的碳青霉烯耐药基因入手,综述动物源碳青霉烯酶的研究进展。

关键词：碳青霉烯酶 NDM OXA-48 VIM 研究进展

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