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otx2 stimulates adult retinal ganglion cell regeneration

Neural Regeneration Research 2022年第3期17卷 690-696页

作者： Raoul Torero Ibad Nicole Quenech’du Alain Prochiantz Kenneth L.Moya Centre for Interdisciplinary Research in Biology(CIRB) Collége de FranceCNRS UMR 7241INSERM U1050Labex MemoLifeParis Sciences et Lettres Research UniversityParisFrance

Retinal ganglion cell(RGC) axons provide the only link between the light sensitive and photon transducing neural retina and visual centers of the brain.RGC axon degeneration occurs in a number of blinding diseases and the ability to stimulate axon regeneration from surviving ganglion cells could provide the anatomic substrate for restoration of vision.otx2 is a homeoprotein transcription factor expressed in the retina and previous studies showed that,in response to stress,exogenous otx2 increases the in vitro and in vivo survival of RGCs.Here we examined and quantified the effects of otx2 on adult RGC axon regeneration in vitro and in vivo.The results show that exogenous otx2 stimulates the regrowth of axons from RGCs in cultures of dissociated adult retinal cells and from explants of adult retinal tissue and that RGCs respond directly to otx2 as regrowth is observed in cultures of purified adult rat RGCs.Importantly,after nerve crush in vivo,we observed a positive effect of otx2 on the number of regenerating axons up to the optic chiasm within 14 days post crush and a very modest level of acuity absent in control mice.The effect of otx2 on RGC survival and regeneration is of potential interest for degenerative diseases affecting this cell type.All animal procedures were approved by the local "Comié d'éιthique en expérimentation animale n°59" and authorization n° 00702.01 delivered March 28,2014 by the French "Ministére de l'enseignement supérieur et de la recherche".

关键词： axon regeneration dissociated retinal culture GAP-43 homeoprotein optic nerve crush otx2 retinal explants retinal ganglion cell

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SALL4 maintains self-renewal of porcine pluripotent stem cells through downregulation of otx2

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Frontiers of Agricultural Science and Engineering 2019年第1期6卷 81-92页

作者： Ning WANG Sile WANG Yaxian WANG Yuanxing CAI Fan YANG Huayan WANG Department of Animal Biotechnology College of Veterinary Medicine Northwest A&F University

Sall4 as one of the spalt family members contains several alternative splicing variants, which are differentially expressed and has a key role in maintaining pluripotent stem cells. However, the molecular features and function of SALL4 have not been well elucidated in porcine induced pluripotent stem cells(piPSCs). In this study, we identi?ed SALL4 splice variants and found two SALL4 splicing variants through analysis of the porcine transcriptome data derived from piPSCs. SALL4 A was only detected in piPSCs but SALL4 B was globally expressed in porcine tissues and piPSCs. The level of SALL4 B was signi?cantly reduced when piPSCs differentiation occurred, however, the expression of SALL4 A was not affected, indicating that SALL4 B may be essential for the maintenance of piPSCs self-renewal. Overexpression of SALL4 A and SALL4 B in PEF cells could signi?cantly stimulated expression of endogenous pluripotent genes,when SALL4 B signi?cantly promoted OCT4 expression.Conversely, SALL4 A signi?cantly promoted KLF4 expression. Additionally, both SALL4 A and SALL4 B could repress otx2 promoter activity in a dose-dependent manner. Conversely, otx2 also negatively regulated SALL4 expression. These observations indicate that a negative feedback regulatory mechanism may exist between SALL4 and otx2, which is useful for the maintenance of the self-renewal of piPSCs.

关键词： otx2 pluripotency pig SALL4 transcription regulation

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丙泊酚通过调控otx2抑制脂多糖诱导的小胶质细胞焦亡和炎症反应

丙泊酚通过调控Otx2抑制脂多糖诱导的小胶质细胞焦亡和炎症反应

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作者：金青青湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:小胶质细胞是中枢神经系统内固有的免疫效应细胞,在中枢神经系统的生理过程中发挥至关重要的作用。丙泊酚是一种新型的快速短效静脉麻醉药,它的神经保护作用早有报道,然而关于丙泊酚对活化的小胶质细胞焦亡和神经炎症影响的研究还... 详细信息

背景:小胶质细胞是中枢神经系统内固有的免疫效应细胞,在中枢神经系统的生理过程中发挥至关重要的作用。丙泊酚是一种新型的快速短效静脉麻醉药,它的神经保护作用早有报道,然而关于丙泊酚对活化的小胶质细胞焦亡和神经炎症影响的研究还比较少,其具体机制也尚未阐明。目的:探讨丙泊酚对脂多糖诱导的小胶质细胞焦亡和炎症反应中的作用及其可能的机制。方法:1.利用1μg/ml脂多糖（LPS）诱导BV小胶质细胞激活建立体外神经炎症损伤模型,进行形态学的观察及采用ELISA试剂盒检测细胞上清液中炎性因子IL-6、T NF-α、IL-1β和IL-18的表达量,以确定炎症模型的建立。2.利用上述方法建立体外神经炎症损伤模型,采用随机数字表法把BV小胶质细胞随机分为5组,每组n=5,分别为:Con组、DMSO溶剂对照组、Pro组、LP S组、LPS+Pro组。Con组正常培养,DMSO溶剂对照组加入0.1%的DMSO,Pro组加入30μM的丙泊酚,LPS组加入1μg/ml的LPS处理24h,LPS+Pro组加入30μM的丙泊酚预处理1h后再加入1μg/ml的LPS处理24h,采用CCK-8试剂盒法检测不同处理对BV小胶质细胞生长情况和存活率的影响。3.利用上述方法建立体外神经炎症损伤模型,采用随机数字表法把BV小胶质细胞随机分为3组,每组n=3,分别为:Con组、LPS组、LPS+Pro组,各组按照上述方法进行处理,采用Western Blot法检测细胞焦亡标志物（NLRP3、GSDMD、Caspase-1 P20）和炎性因子（IL-1β、IL-18）的蛋白表达量,探究丙泊酚在LPS诱导的BV小胶质细胞焦亡和炎症反应中发挥的作用。4.利用上述方法建立体外神经炎症损伤模型,采用随机数字表法把BV小胶质细胞随机分为3组,每组n=3,分别为:Con组、LPS组、LPS+Pro组,各组按照上述方法进行处理,采用Western Blot检测细胞otx2的蛋白表达量,观察otx2在丙泊酚参与的抑制小胶质细胞焦亡和炎症反应中的变化。5.利用慢病毒转染技术转染BV小胶质细胞过表达或敲低otx2,采用Western Blot法检测细胞的转染效率;采用随机数字表法把BV小胶质细胞随机分为3组,每组n=3,分别为:Con组、LPS组、sh otx2+LPS组,采用Western Blot法检测细胞焦亡标志物和炎性因子的表达量;采用随机数字表法将BV小胶质细胞随机分为4组,每组n=3,分别为:Con组、LPS组、LPS+Pro组、otx2-OE+LPS+Pro组,采用West ern Blot法和免疫荧光法检测细胞焦亡标志物和炎性因子的表达量。探究丙泊酚是否通过调控otx2的表达发挥抑制小胶质细胞焦亡和炎症反应的作用。结果:1.静息状态下的小胶质细胞经LPS（1μg/ml）处理后,在显微镜下拍照可以观察到形态学上小胶质细胞活化的表现,同时,LPS组细胞上清液中的TNF-α（p2.CCK-8实验结果显示,与Con组相比,DMSO组、Pro组、LPS组及LPS+Pro组对细胞活性均无明显影响（p>0.05）。3.Western Blot结果显示,与Con组相比,LPS组细胞中的细胞焦亡标志物NL RP3（p20（p20（potx2蛋白表达水平明显升高（potx2-OE/shotx2转染成功（p20（potx2+LPS组相较于LPS组,NLRP3（p20（potx2-OE+LPS+Pro组NLRP3（p20（

关键词：丙泊酚小胶质细胞 otx2 细胞焦亡炎症反应

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otx2基因表达下调对MC3T3-E1细胞增殖分化和自噬的影响

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中国医科大学学报 2018年第11期47卷 1015-1020页

作者：田玉楼于默史娅婕张薇中国医科大学口腔医学院正畸教研室沈阳110002

目的研究otx2基因对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖分化及自噬水平的影响。方法应用otx2基因小干扰RNA(siRNA)转染MC3T3-E1细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平,化学比色法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)合成情况,... 详细信息

目的研究otx2基因对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖分化及自噬水平的影响。方法应用otx2基因小干扰RNA(siRNA)转染MC3T3-E1细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平,化学比色法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)合成情况,单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察各组自噬体表达情况。结果与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率明显升高(P 0.05);ALP活性明显低于对照组(P otx2基因表达下调可以抑制MC3T3-E1细胞增殖,降低细胞分化水平,引起MC3T3-E1细胞自噬水平降低。

关键词： otx2 siRNA 转染自噬

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miR-124和otx2在牙鲆变态发育期间的表达调控及其靶向关系验证

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中国水产科学 2019年第6期26卷 1040-1048页

作者：季文瑶付元帅施志仪谢燕上海海洋大学水产与生命学院农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海海洋大学教育部水产遗传资源开发利用重点实验室上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心

牙鲆(Paralichthysolivaceus)是研究鱼类变态发育的理想模型,其右眼移位及生活习性的改变受甲状腺激素(TH)调控。同时microRNA (miRNAs)在变态期间发挥关键性作用。为研究TH、pol-miR-124及otx2在牙鲆变态中的调控机制,本实验通过生物... 详细信息

牙鲆(Paralichthysolivaceus)是研究鱼类变态发育的理想模型,其右眼移位及生活习性的改变受甲状腺激素(TH)调控。同时microRNA (miRNAs)在变态期间发挥关键性作用。为研究TH、pol-miR-124及otx2在牙鲆变态中的调控机制,本实验通过生物信息学方法预测pol-miR-124潜在靶基因otx2,首先利用qRT-PCR检测在牙鲆各组织、正常变态及外源TH处理仔鱼后pol-miR-124和otx2的表达模式。然后克隆400bp含有"种子序列"的otx23′UTR区序列,构建野生型重组载体pmirGLO-otx2并转染293T细胞检测双荧光素酶活性确定靶向关系。qRT-PCR结果表明:pol-miR-124和otx2均在脑和眼睛组织中特异性高表达;在仔鱼变态28 dph表达量最高与变态进程相一致; TH作用下,在20 dph、24 dph时期, pol-miR-124的表达量低于正常组,而otx2的表达量高于正常组;在28 dph、32dph、36dph时期,pol-miR-124的表达量高于正常组,但otx2的表达量低于正常组,两者呈现出相反的表达趋势;双荧光素酶结果显示pol-miR-124靶向负调控otx2。本实验旨为揭示牙鲆视觉感光系统的发育机制奠定研究基础,同时为探讨牙鲆变态发育机制提供了新的理论依据。

关键词：牙鲆甲状腺激素 pol-miR-124 otx2

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七彩神仙鱼otx2基因克隆及其表达分析

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淡水渔业 2021年第3期51卷 13-19页

作者：魏域玲温彬高建忠陈再忠上海海洋大学国家水产科学实验教育示范中心上海201306 上海海洋大学农业与农村部淡水水生遗传资源重点实验室上海201306 上海水生动物遗传育种协同创新上海海洋大学上海201306 上海海洋大学上海市水产养殖工程研究中心上海201306

为探讨otx2基因在七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi)亲代抚育过程中的作用,本试验采用RT-PCR法克隆得到了七彩神仙鱼otx2基因,otx2基因的cDNA序列的CDS区序列长度为873 bp,共编码290个氨基酸,预测分子质量为31771.55 Da,理论等电点为9.4... 详细信息

为探讨otx2基因在七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi)亲代抚育过程中的作用,本试验采用RT-PCR法克隆得到了七彩神仙鱼otx2基因,otx2基因的cDNA序列的CDS区序列长度为873 bp,共编码290个氨基酸,预测分子质量为31771.55 Da,理论等电点为9.40。运用SMART、Swiss-model和MEGA软件对基因的结构及物种进化关系进行分析。氨基酸序列预测显示,该基因具有otx保守结构域,在进化关系上与尼罗罗非鱼和白边锯鳞鱼亲缘关系相近,同源性分析发现,其氨基酸序列与尼罗罗非鱼、长、西瓜刨、牙鲆和白边锯鳞鱼的同源性都在75%以上。荧光定量PCR分析显示,otx2基因在雌性七彩神仙鱼的脑、心脏、肝脏、肾脏等组织中都有表达,并且在脑组织中显著高表达。荧光原位杂交结果显示,otx2基因在七彩神仙鱼脑组织中的小球周灰质带、纵枕、顶盖室等区域均有表达。

关键词：七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi) otx2 基因克隆荧光原位杂交

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PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内otx2和PV免疫反应阳性神经元的分布

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神经解剖学杂志 2011年第6期27卷 587-596页

作者：赵娟娟蒲川将西条寿夫崛悦郎上野照子李瑞锡彭裕文复旦大学上海医学院解剖与组织胚胎学系上海200032 富山大学医科药科研究生院系统情绪科学研究室日本国富山930-0194

目的:探讨血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)在上丘神经元的作用。方法:采用免疫细胞化学法和图像分析技术观察正常成年小鼠和PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内otx2和小白蛋白(parvalbumin,PV... 详细信息

目的:探讨血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)在上丘神经元的作用。方法:采用免疫细胞化学法和图像分析技术观察正常成年小鼠和PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内otx2和小白蛋白(parvalbumin,PV)免疫反应阳性神经元的形态、数目、大小及分布。结果:PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内otx2和PV免疫反应阳性神经元的基本形态及分布特征与正常小鼠无明显差别,即otx2免疫反应阳性神经元密集地分布于上丘的浅层,而PV免疫反应阳性神经元则分布于上丘的各层。但这两种神经元的数目在PDGFR-β基因敲除小鼠却明显减少,其平均直径也较正常小鼠者明显为小。结论:PDGFR-β可能通过otx2和PV等神经化学物质,参与上丘的功能形成与发育。

关键词：血小板源性生长因子受体 otx2 小白蛋白免疫细胞化学上丘小鼠

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龟板提取物调控otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究

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中药新药与临床药理 2017年第2期28卷 171-176页

作者：周笑莉刘忆思陈东风李彩霞广州中医药大学解剖学教研室广东广州510405 广州中医药大学组织与胚胎学教研室广东广州510405

目的探讨龟板提取物是否能够通过调控同源盒基因otx2(orthodenticle homeobox 2)来促进神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺神经元的分化。方法分离培养孕14 d左右的SD胎鼠NSCs 7 d,随机设空白对照组和30μg·m L^(-1)的龟板有... 详细信息

目的探讨龟板提取物是否能够通过调控同源盒基因otx2(orthodenticle homeobox 2)来促进神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺神经元的分化。方法分离培养孕14 d左右的SD胎鼠NSCs 7 d,随机设空白对照组和30μg·m L^(-1)的龟板有效成分PTE(2B)组、龟板提取物十八酸乙酯(S6)组、4-甾酮(S9)组,诱导分化5~7 d,用免疫荧光法检测多巴胺酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元和otx2的表达,用实时荧光定量PCR法检测otx2的m RNA表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测otx2的蛋白表达。结果与空白对照组比较,2B组、S6组和S9组otx2和TH的荧光表达均升高(Potx2的m RNA表达升高(Potx2的蛋白表达升高(Potx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化。

关键词：龟板提取物 otx2 神经干细胞多巴胺酪氨酸羟化酶

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otx2和CRX调控视网膜光感受器细胞发育分化的研究进展

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眼科新进展 2015年第3期35卷 287-289页

作者：邱莹彭广华郑州大学第一附属医院眼科河南省郑州市450052

视网膜感受器细胞可以将光信号转化为电信号,从而产生视觉。哺乳动物的光感受器细胞包括视锥细胞和视杆细胞。视锥细胞和视杆细胞的发育受多种调控因子的作用,其中,转录因子otx2和CRX对视锥细胞和视杆细胞的发育分化和功能维持起着至关... 详细信息

视网膜感受器细胞可以将光信号转化为电信号,从而产生视觉。哺乳动物的光感受器细胞包括视锥细胞和视杆细胞。视锥细胞和视杆细胞的发育受多种调控因子的作用,其中,转录因子otx2和CRX对视锥细胞和视杆细胞的发育分化和功能维持起着至关重要的作用。本文综述otx2和CRX在视网膜光感受器细胞发育分化中的关键机制,为研究视网膜疾病的发生机制和干预治疗提供理论基础。

关键词：光感受器 otx2 CRX 发育分化

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山羊DCT基因启动子活性区及其转录因子调控探究

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畜牧兽医学报 2018年第1期49卷 55-64页

作者：刘春杨张乐超王麒周荣艳李兰会李祥龙河北农业大学动物科技学院保定071000 河北科技师范学院秦皇岛066004

旨在探究山羊DCT基因启动子活性区及相关转录因子对该基因的调控作用,为山羊DCT基因的表达调控提供理论依据。通过对山羊DCT基因5′侧翼区序列及第一外显子区序列进行生物信息学分析,并与人和小鼠DCT基因启动子序列进行比对,同时结合在... 详细信息

旨在探究山羊DCT基因启动子活性区及相关转录因子对该基因的调控作用,为山羊DCT基因的表达调控提供理论依据。通过对山羊DCT基因5′侧翼区序列及第一外显子区序列进行生物信息学分析,并与人和小鼠DCT基因启动子序列进行比对,同时结合在线启动子预测结果,采用快速克隆的方法构建5个5′系列缺失序列的启动子报告基因载体,以此为基础构建3′缺失序列的6个报告基因载体,并构建SOX10、MITF和otx2转录因子结合位点点突变的6个报告基因载体,以瞬时转染的方法转染A375细胞,双荧光素酶检测试剂盒检测缺失片段和点突变片段的启动子活性。结果表明,成功构建了山羊DCT基因11个不同长度的启动子报告基因载体,-990^+232bp的P3片段荧光素酶活性极显著高于其他片段(Potx2结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著增强(Potx2对山羊DCT基因的调控作用尚需深入研究。

关键词：山羊 DCT基因启动子 SOX10 MITF otx2

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