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蝴蝶兰不同部位CymMV和orsv同步检测及含量比较研究

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植物病理学报 2024年第3期54卷 504-511页

作者：孙爱青王丽花张艺萍杨秀梅苏艳吴学尉云南大学昆明650091 云南省农业科学院花卉研究所/云南省花卉育种重点实验室/国家观赏园艺工程技术研究中心昆明650205

为探究建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,orsv)在蝴蝶兰不同部位的RNA质量及带毒量,以携带2种病毒的植株为试验材料,采用基于TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法检测蝴蝶兰的蕊柱... 详细信息

为探究建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,orsv)在蝴蝶兰不同部位的RNA质量及带毒量,以携带2种病毒的植株为试验材料,采用基于TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法检测蝴蝶兰的蕊柱、唇瓣、萼片、花梗(韧皮部)、叶片、气生根和地下根7个部位,并采用基因芯片法对带毒量进行复检验证。结果表明,蝴蝶兰不同部位的RNA提取效果存在差异,蕊柱的浓度最高,其次是唇瓣和气生根,地下根的浓度最低。双重实时荧光定量PCR检测结果表明,CymMV和orsv在唇瓣和气生根中载量最高,在蕊柱和花梗中载量最低,2种病毒在不同部位的病毒载量变化趋势一致。本研究为蝴蝶兰病毒监测样本采集的部位选择提供了一定的理论指导。

关键词：蝴蝶兰 CymMV orsv 检测带毒率不同部位比较

CymMV及orsv在蝴蝶兰上的症状表现及高温对其影响

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CymMV及ORSV在蝴蝶兰上的症状表现及高温对其影响

作者：刘沛然北京林业大学

学位级别：硕士

建兰花叶病毒(CymMV)及齿兰环斑病毒(orsv)对蝴蝶兰危害严重。目前还没有一套有效的防治方法。本研究期望通过五方面的研究来指导生产,找到在生产中可以有效减轻病毒病危害的方法;掌握不同品种蝴蝶兰感病后发病的规律及症状表现的特征;... 详细信息

建兰花叶病毒(CymMV)及齿兰环斑病毒(orsv)对蝴蝶兰危害严重。目前还没有一套有效的防治方法。本研究期望通过五方面的研究来指导生产,找到在生产中可以有效减轻病毒病危害的方法;掌握不同品种蝴蝶兰感病后发病的规律及症状表现的特征;筛选出抗病品种直接应用于生产本研究的五方面内容:(1)蝴蝶兰植株不同部位病毒检测结果相关性的研究;(2)对比三亚及北京两种不同的栽培环境对蝴蝶兰病毒病的影响;(3)高温对蝴蝶兰病毒病的影响;(4)不同品种的蝴蝶兰发病规律及不同生长期的症状表现;(5)抗病品种的筛选。本研究获得到以下结论:1.一旦蝴蝶兰感染了病毒,其植株的叶片、花梗及根段都能被DAS-ELISA法有效的检测出病毒的存在,但无法在0.5 mm的根尖上检测到病毒。2.在三亚栽培的蝴蝶兰病毒病症状的表现程度较在北京栽培的蝴蝶兰症状轻。3.高温处理并不能脱去蝴蝶兰病毒,但可有效的抑制病毒病症状的显现,减轻病症的表现程度。4.研究了22个品种的症状,总结出了不同品种蝴蝶兰的发病规律,并归类如下发现有以下表现类型:(1)当蝴蝶兰植株感染病毒后,在其叶片上会很快形成明显的病毒病症状,但是当其开花后花瓣上却没有任何影响花朵观赏品质的症状出现。(2)当蝴蝶兰植株感染病毒后,在其叶片上并没有明显的病毒病病症的显现,但当其开花后会在花瓣上形成较为明显的放射状褪色条纹。(3)这类品种较为特殊,感染病毒后的营养生长初期在叶片上表现出很明显的褪绿,但随着花期的邻近症状逐渐消失,开花后在叶片上甚至完全看不到症状的存在,而其花瓣却仍然表现出明显的不规则放射状褪色条纹。而花朵凋谢后叶片上的症状又逐渐恢复。(4)感染了病毒后,植株在营养生长期的叶片上及生殖生长期的花瓣上均表现出明显的病毒病症状。这类现象是最为常见的。(5)感染了病毒后,其叶片及花朵没有任何病毒病病症的显现。5.将抗病品种分为两类,并筛选了部分抗病品种。第一类为完全抗病品种,即感染病毒后叶片及花均无症状表现的品种,如9006号、315号、TG04号等品种。第二类为不完全抗病品种,即感染病毒后叶片表现出明显的病毒病症状,而花瓣却没有发现任何病毒症状,完全能正常保持该品种优良的观赏特征,如9001号、322号、96号蝴蝶兰。6 CymMV单独侵染蝴蝶兰,有时不表现症状。orsv及CymMV复合感染蝴蝶兰会使病症加速加剧表现。

关键词： CymMV orsv 病毒检测脱毒蝴蝶兰

TaqMan探针三重实时荧光定量PCR法同步检测CymMV、orsv和CymRSV

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TaqMan探针三重实时荧光定量PCR法同步检测CymMV、ORSV和CymRSV

第十七届中国球宿根花卉年会

作者：孙爱青王丽花张艺萍杨秀梅魏怡杨冬李文涵陆江吴学尉云南省农业科学院花卉研究所云南大学

为建立一种特异性强、灵敏度高且能定量分析建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymM V)、齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,orsv)和建兰环斑病毒(Cynbidium ringspot vivus,CymRSV)携带情况的高效检测方法,本研究分别比对了10条CymMV,15条orsv和5条CymRSV的CP(coat protein)基因序列,利用各自的高度保守区设计引物探针并筛选,获得156bp、148bp和145bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合。以各自靶标序列为模板构建阳性重组混合质粒,优化反应条件,建立了三重TaqMan实时荧光定量PCR检测体系,并探究其灵敏度、特异性、稳定性及应用效果。结果显示:构建的CymMV,orsv和CymRSV标准曲线线性方程分别为y(CymMV)=-3.336x+41.789,y(orsv)=-3.319x+41.901,y(CymRSV)=-3.332x+41.202,扩增效率分别为99.4%、100.1%、99.6%,相关系数均为0.999,3个病毒的标准曲线线性关系良好;最低检出限分别为1 copy,10 copies和1 copy,最低稳定检出限分别为10 copies、10～2 copies和10～2 copies,检测灵敏度是RT-PCR的10～10～4倍;与其他6种病毒反应均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Cq值变异系数分别小于0.55%和0.95%,表明该方法具有较高的可靠性和准确性。此外,利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品开展方法验证,三重同步法比基因芯片法的检出提高了53.85%(CymMV)和162.5%(orsv)。综上,本研究建立的基于Taqman的三重实时荧光定量PCR检测技术体系特异性强、灵敏度高,且能高通量定量分析目标病毒载量,对于批量样品的CymMV、0RSV和CymRSV同步高效检测、痕量病毒的早期监测意义重大,本研究可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术撑。

关键词：三重qRT-PCR CymMV orsv CymRSV 病毒检测兰花

来源： cnki会议评论

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杂交兰种苗超低温脱毒技术研究

中国农业科技导报 2018年第1期20卷 147-153页

作者：李涵陆琳瞿素萍田敏邹凌李慧敏黎霞曹桦云南省农业科学院花卉研究所国家观赏园艺工程技术研究中心昆明650100

以携带建兰花叶病毒(Cy MV)和齿兰环斑病毒(orsv)的杂交兰根状茎为试材,采用包埋玻璃化超低温保存法对杂交兰病毒脱除进行研究。结果表明:低温炼苗21 d的茎尖,在0.5 mol/L的蔗糖浓度预培养基中培养3 d,然后浸入0.4 mol/L高糖液体培养基... 详细信息

以携带建兰花叶病毒(Cy MV)和齿兰环斑病毒(orsv)的杂交兰根状茎为试材,采用包埋玻璃化超低温保存法对杂交兰病毒脱除进行研究。结果表明:低温炼苗21 d的茎尖,在0.5 mol/L的蔗糖浓度预培养基中培养3 d,然后浸入0.4 mol/L高糖液体培养基中加载90 min,之后转入玻璃化溶液PVS2(protect vitrification solution 2)中冰上处理6 h,再液氮保存1 h,最后于37℃水浴中解冻2~3 min,1.2 mol/L高糖液体培养基中卸载20 min,待恢复培养后,杂交兰茎尖成活率为64%以上,随机检测30个样品,两种病毒脱毒率均为100%。研究为杂交兰种苗脱毒奠定了一定的理论基础。

关键词：杂交兰超低温保存脱毒 Cy MV orsv

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广东地区两种兰花病毒病害的分子鉴定及检测

中国病毒学 2004年第2期19卷 149-152页

作者：周国辉陈晓琴李梅辉周洁浪唐添华冯盛祥郭丽晶张旺华南农业大学资源环境学院广东广州510642 广东省植物保护总站广东广州510500 广东省顺德农业局广东顺德528333

根据已报道的建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(orsv)基因组核苷酸序列,在其cp基因上下游设计PCR引物。CyMV预计扩增产物784bp,orsv预计扩增产物604bp。以采集自广东省顺德的墨兰和文心兰表现病毒病症状的病株叶组织总RNA为模板,进行RT... 详细信息

根据已报道的建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(orsv)基因组核苷酸序列,在其cp基因上下游设计PCR引物。CyMV预计扩增产物784bp,orsv预计扩增产物604bp。以采集自广东省顺德的墨兰和文心兰表现病毒病症状的病株叶组织总RNA为模板,进行RT-PCR扩增。对预期大小的5个扩增产物进行克隆和测序,结果表明,来源于不同兰种或同一兰种不同兰场的病样CyMV引物扩增产物核苷酸序列存在少量差异,但均与世界各地的CyMV分离物cp基因高度同源;而来源于不同兰种的病样orsv引物扩增产物核苷酸序列完全相同,与世界各地的orsv分离物cp基因高度同源。因此可将侵染广东兰花的两种病毒鉴定为CyMV和orsv。混合上述两种病毒的 PCR引物,采用双重RT-PCR扩增,对采自广东顺德23个兰场共153份样品进行病毒检测,76份(49.7%)检出CyMV,52份(34.0%)检出orsv,2份(1.3%)同时检出CyMV和orsv。

关键词：广东地区兰花病毒病害分子鉴定检测建兰花叶病毒 CyMV 齿兰环斑病毒 orsv 基因组核苷酸序列

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蝴蝶兰无毒苗组培快繁技术研究

蝴蝶兰无毒苗组培快繁技术研究

作者：李正民海南大学

学位级别：硕士

蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)又称蝶兰,观赏价值极高。常用的繁殖方式是组织培养。建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus, CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, orsv)是危害兰花植物最严重的两种病毒。研究蝴蝶兰脱病毒方... 详细信息

蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)又称蝶兰,观赏价值极高。常用的繁殖方式是组织培养。建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus, CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, orsv)是危害兰花植物最严重的两种病毒。研究蝴蝶兰脱病毒方法和途径具有重要意义。本实验以“豹斑花”(Dtps. Leopard Prince)为实验材料,首先以花梗腋芽为外植体建立其组培快繁体系,然后以化学药剂处理作为脱毒方法,感染CyMV和orsv的蝴蝶兰增殖芽为试材,通过添加不同病毒抑制剂来筛选最佳的病毒抑制剂及浓度。旨在解决蝴蝶兰无毒苗生产快繁的技术问题,为其提供理论依据。主要结果如下： (1)在花宝1号3.0g/L+3.0mg/L BA+0.3mg/L NAA+20g/L蔗糖的培养基中,腋芽萌发效果很好;先期暗培养7d有助于减轻褐化。 (2)采用L16(44)正交设计探讨了基本培养基、BA、NAA、蔗糖4种因子对蝴蝶兰不定芽增殖的影响,得出BA是影响增殖系数的主要因子,NAA、基本培养基次之,蔗糖最弱。MS添加8.0mg/L BA+0.8mg/L NAA+20g/L蔗糖对不定芽增殖有良好的效果,增殖系数能够达到2.83。适宜蝴蝶兰丛生芽增殖的有机添加物是香蕉。双芽接法结合切全叶的分切方式有利于丛生芽增殖。 (3)诱导蝴蝶兰生根的最佳培养基为3.5g/L花宝1号+0.3mg/L NAA+0.5mg/L IAA+0.5mg/L MET+20g/L蔗糖;生根阶段,活性炭添加量不宜超过1g/L,也可不添加;蔗糖能显著影响试管苗生长情况,添加量以20g/L为佳。移栽基质以水苔最好,成活率达93.18%。 (4)氨基寡糖素具有很高的病毒脱除率,达83.33%(CyMV)和66.67%(orsv),病毒唑次之为83.33%(CyMV)和50%(orsv),中药类无显著脱毒效果。

关键词：蝴蝶兰组织培养脱毒 CyMV orsv

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病毒抑制剂对蝴蝶兰病毒植株的脱毒效果

热带生物学报 2013年第1期4卷 56-60,73页

作者：李正民王安石王健陶楚海南大学园艺园林学院海南海口570228 海南出入境检验检疫局热带植物隔离检疫中心海南海口570311

选取感染建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(orsv)的蝴蝶兰植株进行离体培养,在芽增殖培养基中添加不同的病毒抑制剂,研究对CyMV和orsv病毒的脱除效果。结果表明,氨基寡糖素具有很好的脱毒效果,对CyMV的脱除率为83.33%,对orsv的脱除率为... 详细信息

选取感染建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(orsv)的蝴蝶兰植株进行离体培养,在芽增殖培养基中添加不同的病毒抑制剂,研究对CyMV和orsv病毒的脱除效果。结果表明,氨基寡糖素具有很好的脱毒效果,对CyMV的脱除率为83.33%,对orsv的脱除率为66.67%;病毒唑次之,对CyMV的脱除率为83.33%,对orsv的脱除率为50%;中药类的脱毒效果不明显。

关键词：蝴蝶兰脱毒 CyMV orsv

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兰花病毒检测与脱毒技术研究进展

安徽农业科学 2022年第3期50卷 8-11,18页

作者：黎文敏薛铭谢利郭和蓉张志胜曾瑞珍华南农业大学林学与风景园林学院广东广州510642

兰花病毒病是制约兰花产业发展的重要因素,其中由建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontolossum ring spot virus,orsv)引起的病毒病在全球范围内影响广泛且危害严重。目前兰花病毒病尚无特效药可以防治,加... 详细信息

兰花病毒病是制约兰花产业发展的重要因素,其中由建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontolossum ring spot virus,orsv)引起的病毒病在全球范围内影响广泛且危害严重。目前兰花病毒病尚无特效药可以防治,加强检疫、及时销毁染病植株以及采用无病毒种苗是病毒病防治的有效措施。因此,对引起兰花病毒病的主要病毒、病毒检测方法和脱毒技术研究进展进行综述,以期为兰花脱毒技术的深入研究和脱毒苗工厂化生产提供参考。

关键词：兰花 CymMV orsv 检测方法脱毒技术