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中国兽医杂志 2016年第1期52卷 24-26页

作者：林祥超高志强张鹤晓张康郭金玉牛建蕊张乐萃青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 北京出入境检验检疫局北京通州100026 北京森康生物技术开发有限公司北京怀柔101400 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050

扩增猪圆环病毒2型的orf-2全基因(702 bp),将目的片段与缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5CMV K-NpA连接,构建重组穿梭质粒CMV-orf-2。将穿梭质粒与骨架质粒pacAd5 9.2-100经限制性内切酶PacI线性化后共转染293T细胞,进行细胞内重组。7~15 d... 详细信息

扩增猪圆环病毒2型的orf-2全基因(702 bp),将目的片段与缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5CMV K-NpA连接,构建重组穿梭质粒CMV-orf-2。将穿梭质粒与骨架质粒pacAd5 9.2-100经限制性内切酶PacI线性化后共转染293T细胞,进行细胞内重组。7~15 d后获重组腺病毒rAd5 CMV-OPFF-2与对照组重组腺病毒rAd5 CMV-GFP。使用293细胞进行病毒增殖,对增殖稳定的rAd5 CMV-orf-2进行鉴定;rAd5 CMV-OPFF-2 TCID_(50),为10^(7.5/)50μL,用该代次rAd5 CMV-orf-2进行PCV-2阳性血清中和试验,结果表明,重组腺病毒成功,PCV-2阳性血清不能中和重组腺病毒。

关键词：猪圆环病毒2型 orf-2 缺陷型重组腺病毒

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Expression of TTV-orf2 Protein for Detection of Anti-TTV IgG Antibodies in Human Sera

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Advances in Infectious Diseases 2013年第3期3卷 223-229页

作者： Shiwani Singh Akanksha Singh Dhananjay Singh Mankotia Kalpana Luthra Mohammad Irshad Clinical Biochemistry Division Department of Laboratory Medicine All India Institute of Medical Sciences New Delhi India

The present study describes the cloning and expression of orf-2 region of TTV genome and the use of expressed peptide in developing immunoassay for detection of anti-TTV antibodies in serum. Presence of TTV-DNA in serum was detected by PCR amplifying N-22 region of orf-1 of TTV genome. This was followed by genotyping of TTV by RFLP using N-22 amplicon. Using genotype-1 positive serum as the source of TTV, the orf-2 region was amplified by PCR and subsequently cloned and expressed in pET-19b vector. The expressed protein, identified as 20 kDa protein on SDS-PAGE gel, was purified by affinity chromatography and then used as antigen to develop western blot assay for detection of anti-TTV antibodies in serum. Analysis of sera for anti-TTV antibodies and their comparison with presence of TTV-DNA, produced encouraging results. There was a good relation between presence of anti-TTV and TTV-DNA in these sera samples. Anti-TTV antibodies could be detected in all TTV-DNA positive sera irrespective of the presence of TTV-genotype. This investigation demonstrates that orf-2 peptide may be used in developing immunoassay for identification of TTV infection.

关键词： TTV orf-2 Anti TTV-IgG Expression N-22

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