检索结果-南通市图书馆

PRRSV河南地方分离株orf 2～6基因的克隆与序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2008年第7期 10-13页

作者：党占国李志勇陈溥言崔保安夏平安河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 焦作市畜牧局河南焦作454001 南京农业大学江苏南京210095

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ATCC VR-2332株的orf2～6基因的核苷酸序列，设计合成4对特异性引物，用RT—PCR方法扩增出PRRSV河南地方株（命名为HN-2株）的orf 2～6片段，克隆到pUC-57T载体并进行测序。应用DNASta... 详细信息

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ATCC VR-2332株的orf2～6基因的核苷酸序列，设计合成4对特异性引物，用RT—PCR方法扩增出PRRSV河南地方株（命名为HN-2株）的orf 2～6片段，克隆到pUC-57T载体并进行测序。应用DNAStar序列分析软件对分离株的orf 2～6基因和其推导的氨基酸序列与不同来源的9个PRRSV毒株进行了同源性比较，结果表明：该分离株的orf 2～6基因与不同来源美洲型毒株之间的同源性分别为89．1％～98．1％和81．4％～96．1％，而与欧洲型毒株之间的同源性仅为46．9％～61．9％和44．2％～45．0％；同时将分离株orf 2～6基因的推导氨基酸序列与7个关洲型PRRSV毒株进行变异分析比较，证实了该分离株orf 2～6基因发生了变异。

关键词： PRRSV orf 2-6基因基因克隆变异分析

2018年四川地区猪繁殖与呼吸综合征病毒orf5基因的分子流行病学调查研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2020年第4期47卷 1172-1182页

作者：刘瀚扬张毅肖冉陈斌吴永胜苏志鹏李峪鹏裴超信许祯莹朱佳文成都市农林科学院畜牧研究所成都611130 四川省动物疫病预防控制中心成都610047 武汉市动物疫病预防控制中心武汉430014 四川特驱投资集团有限公司成都610207 四川农业大学动物医学院成都611130

为研究四川地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及进化趋势,本研究以GP5蛋白为研究对象,对2018年间收集的378份四川省不同区市县PRRSV疑似病料进行了实时荧光定量PCR检测,并对部分毒株orf 5基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进... 详细信息

为研究四川地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及进化趋势,本研究以GP5蛋白为研究对象,对2018年间收集的378份四川省不同区市县PRRSV疑似病料进行了实时荧光定量PCR检测,并对部分毒株orf 5基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行进化分析和N-糖基化位点预测。通过疑似病料实时荧光定量PCR检测,共检出阳性样品69份,阳性率为18.25%。对其中23株PRRSV的orf 5基因序列分析结果显示,orf 5基因之间核苷酸同源性为81.6%~100%,推导的氨基酸同源性为81.4%~100%,均属于美洲型毒株。其中,1株属于以经典毒株VR2332为代表的亚型Ⅰ,17株属于以高致病毒株JXA1为代表的亚型Ⅱ,5株属于重组毒株NADC30为代表的亚型Ⅲ,说明2018年间四川省PRRSV流行毒株存在基因多样性,HP-PRRSV依然是主要流行毒株,但仍存在不断进化的经典毒株,同时,类似NADC30和QYYZ的重组毒株也开始出现。通过氨基酸突变位点和N-糖基化位点分析发现,23株PRRSV在GP5两个重要抗原表位相关区域和毒力相关位点均发生了一定程度的突变,推测这些突变可能影响了病毒逃避机体免疫和病毒毒力,提示在PRRSV防控中,应该加强遗传进化分析,根据不同类型的毒株选择有针对性的疫苗和防控策略。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 分子流行病学 orf 5基因变异分析

2016-2017年江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及orf5基因变异分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2018年第10期45卷 2831-2839页

作者：袁为锋张帆帆李龙显李昊张付华刘小萍叶昱李凯黄冬艳丁珍吴琼宋德平唐玉新江西农业大学动物科学技术学院南昌330045 江西省动物疫病诊断与防控重点实验室南昌330045 九江市畜牧兽医局九江332000 上饶市畜牧兽医科学研究所上饶361102

为了解近年来江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分子流行病学和其遗传变异情况,本次调查于2016-2017年从江西省各地区规模化猪场采集453份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病... 详细信息

为了解近年来江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分子流行病学和其遗传变异情况,本次调查于2016-2017年从江西省各地区规模化猪场采集453份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病料,采用RT-PCR方法对所有病料进行检测。结果发现,其中321份病料为PRRSV阳性,阳性率为70.86%,各地区的阳性率在19.15%~84.85%之间。挑选14份阳性样品测序后,经orf5基因序列分析,江西地区各PRRSV毒株orf5基因的核苷酸同源性为83%~100%,PRRSV流行毒株与参考毒株的同源性在59.9%~98.5%之间。基于orf5基因的进化树分析表明,14个测序毒株均为美洲型毒株,其中有4株为基因亚型Ⅰ,即高致病性毒株(HP-PRRSV);3株为基因亚型Ⅱ,即经典毒株;3株为基因亚型Ⅲ,即NADC30-like毒株;4株为新出现的基因亚型Ⅳ。氨基酸序列比对分析表明,基因亚型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ毒株orf5基因编码的GP5蛋白氨基酸在3个表位及2个重要的抗原相关区域存在较大变异,其中以NADC30毒株为代表的基因亚型Ⅲ毒株和以GD1404毒株为代表的基因亚型Ⅳ毒株均表现出独有的氨基酸变异,这些变异可能会影响GP5蛋白的免疫原性。本次调查结果表明,2016-2017年江西地区PRRSV流行出现了新形势,美洲型毒株出现了多基因亚型共同存在的局面,以高致病性毒株(HP-PRRSV)为主,NADC30-like毒株和新基因亚型等新毒株的比例较高,同时还存在经典毒株;持续实时监测PRRSV的毒株流行和变异情况,可为临床诊断、药物和疫苗开发及PRRS的科学防控提供依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 分子流行病学 orf 5基因变异分析

香蕉线条病毒orf I基因的原核表达及抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华南农业大学学报 2009年第3期30卷 18-21页

作者：何云蔚陈秀阮小蕾沈文锦刘福秀李华平华南农业大学植物病毒研究室广东广州510642

利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的orf I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以... 详细信息

利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的orf I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以不可溶的包涵体形式存在,将其变性溶解后利用N端的组氨酸标签进行纯化.以纯化产物为抗原免疫兔子制备了香蕉线条病毒的阳性兔抗血清,Western blot和ELISA分析表明,制备的兔抗血清为香蕉线条病毒的高效特异性抗血清,效价高达1∶51 200.

关键词：香蕉线条病毒 orf I 原核表达抗血清

草莓镶脉病毒(SVBV)orf Ⅵ基因的克隆及蛋白特性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西南大学学报（自然科学版） 2011年第12期33卷 1-6页

作者：李瑞倪方锐贾琳蒋磊江彤安徽农业大学植物保护学院合肥230036

用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV orf Ⅵ基因的全长片段,进行克隆并测序.序列分析表明SVBV orf Ⅵ基因完整序列全长1 557bp,编码518个氨基酸.将其与SVBV... 详细信息

用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV orf Ⅵ基因的全长片段,进行克隆并测序.序列分析表明SVBV orf Ⅵ基因完整序列全长1 557bp,编码518个氨基酸.将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的orf Ⅵ基因相比较,结果表明SVBV中国分离物orf Ⅵ基因与SVBV美国分离物orf Ⅵ基因核苷酸序列相似性最高,达84.5%;而与花椰菜花叶病毒属其他成员的orf Ⅵ基因序列相似性均较低,仅为23.7%～27.9%.构建SVBV及其同属其他成员orf Ⅵ基因的系统关系树,结果显示SVBV中国分离物与SVBV美国分离物单独形成1个分支,说明来源于草莓的2个SVBV亲缘关系最近,而与其同属其他成员的亲缘关系均较远.生物信息学分析表明SVBVorf Ⅵ基因表达的P6蛋白序列含有多种蛋白激酶磷酸化位点,其二级结构N端是1个α-螺旋富集区.该研究将为进一步研究P6蛋白的功能提供理论依据.

关键词：草莓镶脉病毒 orf Ⅵ基因克隆序列分析二级结构

浙江省猪繁殖与呼吸综合征病毒orf5基因的遗传变异分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2019年第12期46卷 3715-3724页

作者：王雅婷柴娟张红丽刘霞虞一聪倪柏锋赵灵燕徐辉谢荣辉浙江省动物疫病预防控制中心

为了解2014-2016年浙江地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)orf 5基因变异情况,试验通过RT-PCR方法对从浙江省各地区采集的PRRSV阳性病料进行orf 5基因扩增,应用DNAStar和Mega 5.1软件对所测序列进行同源性和遗传变异分析。结果显示,54株2014-2016年浙江分离株orf5序列之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.1%~100%和80.6%~100%,与经典株VR2332核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.8%~90.4%和81.6%~90.0%,与高致病PRRSV毒株JXA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.5%~99.5%和83.1%~99.0%。系统进化分析表明,54个毒株均为美洲型毒株,属于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ3个不同的基因亚型,其中基因亚型Ⅲ和Ⅳ毒株是浙江省近年来新出现的毒株。氨基酸序列分析结果显示,54个毒株在GP5蛋白的信号肽区域、非中和抗体表位的氨基酸序列变异较大,而在中和表位氨基酸序列变异较小。本研究结果表明,浙江地区PRRSV流行出现了新形势,多种基因亚型共同存在,其中以基因亚型Ⅰ毒株为主。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) orf 5基因遗传变异

白念珠菌orf19.6012-MYC融合菌株的构建及鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国真菌学杂志 2018年第2期13卷 75-78页

作者：鲁仁义张晓龙阎澜姜远英中国人民解放军第二军医大学药学院新药研究中心上海200433

目的构建白念珠菌orf19.6012-MYC融合菌株。方法利用In-Fusion试剂盒构建插入片段,采用醋酸锂转染法将片段同源重组至SN152基因组DNA中,采用PCR以及Western blotting方法进行验证,对验证为阳性的菌株进行生长曲线的测定及菌丝诱导实验... 详细信息

目的构建白念珠菌orf19.6012-MYC融合菌株。方法利用In-Fusion试剂盒构建插入片段,采用醋酸锂转染法将片段同源重组至SN152基因组DNA中,采用PCR以及Western blotting方法进行验证,对验证为阳性的菌株进行生长曲线的测定及菌丝诱导实验。结果经验证,成功构建orf19.6012-MYC融合菌株,且orf19.6012-MYC融合菌的生长增殖能力、液体菌丝形成能力与亲本菌一致。结论采用同源重组的方法成功构建稳定表达的orf19.6012-MYC融合菌株。

关键词：同源重组 orf 19.6012 MYC标签

麦氏安瘿蜂体内侵染Wolbachia的WO噬菌体的检测及其orf7基因序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生命科学研究 2014年第3期18卷 227-231页

作者：苏成元杨筱慧朱道弘中南林业科技大学昆虫行为与进化生态学实验室中国湖南长沙410004 湖南师范大学生命科学学院中国湖南长沙410081

Wolbachia为节肢动物等的细胞质共生细菌,能对宿主的繁殖模式进行调控,包括诱导胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化及雄性致死。WO噬菌体是一类侵染节肢动物体内Wolbachia的细菌病毒。为检测麦氏安瘿蜂Wolbachia是否被WO噬菌体侵染,本研究使... 详细信息

Wolbachia为节肢动物等的细胞质共生细菌,能对宿主的繁殖模式进行调控,包括诱导胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化及雄性致死。WO噬菌体是一类侵染节肢动物体内Wolbachia的细菌病毒。为检测麦氏安瘿蜂Wolbachia是否被WO噬菌体侵染,本研究使用WO噬菌体的orf 7基因引物,对信阳、六安及长沙3种群的WO噬菌体进行了PCR检测。结果显示,3种群的雌、雄虫体内的Wolbachia均有WO噬菌体的侵染,感染率为100%。获得的3种群麦氏安瘿蜂Wolbachia的WO噬菌体orf 7基因序列均为371 bp,序列完全一致。其序列与粉斑螟Ephestia cautella的wECau B3-1和wCauA5-1株系、反颚茧蜂Asobara tabida的wAtabA3-3株系的一致性最高,在NJ和ML系统树中,均聚合在同一分支,属于WO噬菌体的第Ⅲ大群。

关键词：麦氏安瘿蜂 Wolbachia WO噬菌体 orf 7基因系统发育关系

5株PRRSV orf3，5，6基因的变异分析及orf3-5串联基因重组腺病毒的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

5株PRRSV ORF3，5，6基因的变异分析及ORF3-5串联基因重组腺病毒...

作者：王旭荣西北农林科技大学

学位级别：硕士

本试验通过对PRRSV 5 株广东流行株orf3, 5, 6 3 个基因的分析,探讨广东省5株流行株之间及其与其他毒株间的遗传变异关系,为探索广东省PRRSV 的来源、分子流行病学特征和抗原变异规律提供依据,同时为研制基因工程疫苗奠定了基础。另外... 详细信息

本试验通过对PRRSV 5 株广东流行株orf3, 5, 6 3 个基因的分析,探讨广东省5株流行株之间及其与其他毒株间的遗传变异关系,为探索广东省PRRSV 的来源、分子流行病学特征和抗原变异规律提供依据,同时为研制基因工程疫苗奠定了基础。另外将腺病毒表达系统与PRRSV 的主要抗原多肽的基因有机地结合起来,利用腺病毒对动物体细胞的广泛感染性,改善PRRSV 的GP3、GP5 对动物免疫系统的刺激效率和方式,模拟PRRSV病毒的自然感染过程,以期更好地发挥PRRSV GP3、GP5 的抗原活性,为研制PRRSV高效安全的基因工程疫苗开辟新途径。本试验的主要内容及结果如下: 1.5 株PRRSV GD 株orf3、orf5、orf6 基因的变异分析根据GeneBank 中发表的序列分别设计合成了针对PRRSV orf3, orf5 和orf6 基因的引物,利用RT-PCR 方法从广东省送检的5 份可疑病料中均分别扩增得到大小约787bp、630bp、550bp 的片段,克隆入pMD18-T 载体并测序。应用DNAStar 软件分析所测的序列,与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS/Repro、RespPRRS MLV)及LV4.2.1 等毒株的序列进行比较,结果表明:广东省的5 个毒株在遗传关系上接近HB-1(sh)株,本研究中分离于不同猪场的5 个毒株间的核苷酸序列差异不显著,可能有共同的来源。 *** orf3-5串联基因重组腺病毒的构建用WP3L和WP3R引物从pT-orf3阳性质粒上扩增完整的orf3 片段,利用T-A 连接的原理将片段亚克隆入pMD18-T 载体EcoV 处,按常规方法转化DH5a,筛选出正向重组质粒并测序,命名为pMD-orf3。用WP5L和WP5R引物从pT-orf5 阳性质粒上扩增orf5 基因,用Sph I/Hind III 双酶切后回收目的片段,将重组质粒pMD-orf3 也经Sph I/Hind III 双酶切并去磷酸化,与目的片段于16℃连接,按常规方法筛选出重组阳性质粒并测序,命名为pMD-orf3-5。用Not I/HindIII 从重组质粒载体pMD-orf3-5上切取orf3-5 基因插入pAdTrack-CMV穿梭载体,挑取卡那霉素(Kan)抗性的单菌落,按常规方法获得阳性重组子pAdTrack-CMV-3-5。将构建的携有PRRSV orf3-5 串联基因的重组穿梭载体Pme I 线性化后与腺病毒骨架载体pAdEasy-1 共转染*** BJ5183,使之同源重组,经PCR、酶切鉴定获得重组腺病毒质粒pAdCMV-3-5,然后用Pac I 线性化,用脂质体介导转染入人

关键词： PRRSV orf 变异分析 orf3-5 串联基因重组腺病毒