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黑腹果蝇ORD基因的原核表达及生物信息学分析

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基因组学与应用生物学 2021年第7期40卷 2461-2467页

作者：刘焱晖林先武颜日辉海南大学林学院海口570228 海南大学植物保护学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室海口570228

黏连蛋白ORD(orientation disruptor)是维持黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)减数分裂姐妹染色单体间黏连与卵母细胞同源重组、联会所必需的。本研究旨在对黑腹果蝇ORD基因进行原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。通过PCR扩... 详细信息

黏连蛋白ORD(orientation disruptor)是维持黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)减数分裂姐妹染色单体间黏连与卵母细胞同源重组、联会所必需的。本研究旨在对黑腹果蝇ORD基因进行原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。通过PCR扩增出黑腹果蝇ORD基因,采用同源重组法构建pET-sumo-ORD重组质粒,经IPTG诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting验证。结果表明,诱导表达的His-ORD融合蛋白大小约为69 kD,为包涵体蛋白。系统发育树分析表明,黑腹果蝇与毛里求斯果蝇(Drosophila mauritiana)、塞舌尔果蝇(Drosophila sechellia)和拟果蝇(Drosophila simulans)的ORD基因亲缘关系较近。生物信息学分析表明,ORD蛋白的预测等电点(pI)为5.69,疏水性平均值(GRAVY)为-0.309,属于亲水性蛋白质,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。蛋白互作网络分析表明,ORD与INCENP存在相互作用,与CONA、CG13541共同定位。本研究结果为深入研究该基因的功能以及促进减数分裂黏连体研究提供了理论依据和试验基础。

关键词：黑腹果蝇 ORD 原核表达生物信息学分析

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天然产物绝对构型的确定(英文)

中国天然药物 2013年第3期11卷 193-198页

作者：孔令义王鹏中国药科大学"天然药物活性组分与药效"国家重点实验室天然药物化学教研室南京210009 盐城师范学院药学院盐城214002

天然产物结构研究一直是天然药物化学相关领域最重要的工作之一,尤其对天然产物绝对构型(AC)的确定更是具有挑战性的研究内容,目前得到国内外学者越来越多的关注。在过去的几十年里已发展了许多技术和方法用来确定天然产物的绝对构型,... 详细信息

天然产物结构研究一直是天然药物化学相关领域最重要的工作之一,尤其对天然产物绝对构型(AC)的确定更是具有挑战性的研究内容,目前得到国内外学者越来越多的关注。在过去的几十年里已发展了许多技术和方法用来确定天然产物的绝对构型,包括直接法(或绝对方法),例如X射线单晶衍射(XRD)、电子圆二色谱(ECD)、振动圆二色谱(VCD)及拉曼光学活性(ROA);使用已知绝对构型的参照物或衍生化试剂的间接法(或相对方法),例如利用经验规则的圆二色谱,以及利用手性衍生化试剂各向异性效应的核磁共振法(NMR)。但由于这些方法适用的化合物类型和结构不尽相同,目前尚没有一种通用技术涵盖所有类型天然产物绝对构型的测定,我们只能灵活应用各种技术和方法才能确定大部分天然产物的绝对构型。本综述总结了大多数当前天然产物绝对构型测定中常用的以及具有潜在前景的技术和方法,并简要介绍了它们的原理及特点。

关键词：绝对构型天然产物 XRD NMR ORD CD ECCD ECD,VCD ROA

基于倾斜航空摄影测量技术建立动态路网模型的交通仿真方法

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科学技术与工程 2018年第33期18卷 215-223页

作者：张国星王海晓李娅男深圳大学土木工程学院深圳518061 内蒙古农业大学能源与交通工程学院呼和浩特010018

提出了基于倾斜航空摄影测量技术,从实景测量中提取道路三维线形数据,将数据通过自编程序转化为仿真文件的新建模方法。选取坡道路段和交叉口分别作为路网建模仿真实验方案;采用对照实验法研究了道路线形、车型比、交通负荷等方面发生... 详细信息

提出了基于倾斜航空摄影测量技术,从实景测量中提取道路三维线形数据,将数据通过自编程序转化为仿真文件的新建模方法。选取坡道路段和交叉口分别作为路网建模仿真实验方案;采用对照实验法研究了道路线形、车型比、交通负荷等方面发生变化时,新建模方法和传统路网建模方法在仿真结果上的差异。仿真结果表明:新模型中车流的速度和加减速的变化更符合真实行驶状态,可以减少静态数据误差对仿真结果的影响;新模型中车速与加减速度在不同交通流情况下对车道坡度变化更敏感,与实际交通状态的模拟精度及仿真参数的精准度更高。

关键词：倾斜摄影测量交通仿真 Bentley ORD PTV VISSIM

探究果蝇黏连蛋白SOLO所在黏连复合体的组成及蛋白互作关系

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探究果蝇黏连蛋白SOLO所在黏连复合体的组成及蛋白互作关系

作者：刘焱晖海南大学

学位级别：硕士

双翅目(Diptera)环裂亚目(Cyclorrhapha)昆虫统称为蝇类,是四害之一,分布地区广泛。住区蝇类通过机械接触可携带传播百种细菌以及多种病毒,而其他蝇类,如地中海实蝇、美洲斑潜蝇等均属于世界范围性检疫害虫,由于寄主范围较广,并极易随... 详细信息

双翅目(Diptera)环裂亚目(Cyclorrhapha)昆虫统称为蝇类,是四害之一,分布地区广泛。住区蝇类通过机械接触可携带传播百种细菌以及多种病毒,而其他蝇类,如地中海实蝇、美洲斑潜蝇等均属于世界范围性检疫害虫,由于寄主范围较广,并极易随农产品运输而进行种群扩散,给人们的健康和农业生产带来极大的威胁。减数分裂是真核生物有性生殖个体采用的一种特殊的分裂方式。在减数分裂中过程中,姐妹染色单体间的黏连是维持正常水平的同源重组和染色体精确分离所必需的。其中两个减数分裂黏连蛋白:ORD与SOLO,在维持雌性果蝇联会复合体稳定及指导雌、雄果蝇减数分裂I期同源染色体和II期姐妹染色单体的正确配对与分离过程中起到了重要作用,ORD与SOLO的缺失均会导致染色体不分离(nondisjunction,NDJ)现象出现。由于环裂亚目昆虫的减数分裂黏连蛋白具有较高的同源性以及保守性,因此对模式生物黑腹果蝇减数分裂黏连复合体进行研究,探究SOLO所在黏连体亚基的组成及各亚基之间的互作关系,促进减数分裂研究,以便为蝇类害虫、双翅目昆虫及其他昆虫的生物防治提供理论基础。1.提取w品系果蝇总RNA,反转录合成第一链c DNA。对ORD基因进行PCR扩增后,采用同源重组法构建p ET-sumo-ORD重组质粒,经IPTG诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE及Western blot验证。结果表明,诱导表达的His-ORD融合蛋白大小约为69 KDa,为包涵体蛋白。系统发育树分析表明,黑腹果蝇与毛里求斯果蝇、塞舌尔果蝇和拟果蝇ORD基因亲缘关系较近。生物信息学分析表明ORD蛋白的预测等电点(PI)为5.69,疏水性平均值(GRAVY)为-0.309,属于亲水性蛋白质,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。蛋白互作网络分析表明,ORD与INCENP存在相互作用,与CONA、CG13541共同定位。2.利用Gateway克隆技术,经入门克隆、LR表达载体克隆后,显微注射得到Venus::ORD转基因果蝇品系。对转基因果蝇品系进行染色体定位实验,挑取目的片段整合在三号染色体上的转基因果蝇进行拯救实验,验证Venus::ORD整合片段在果蝇体内是否正确表达。结果表明:ORD质粒碱基测序结果与参考序列NP＿001286760碱基同源性为99.6%,蛋白质氨基酸序列比对发现第444位氨基酸存在差异(D-E),因为两者均为酸性,故不影响后续实验。对Venus::ORD转基因果蝇进行染色体定位实验,结果表明有4个果蝇品系目的片段整合在三号染色体上,一个品系的目的片段整合在二号染色体上。拯救实验结果表明,野生型中的NDJ出现频率为0.17%,ORD突变体中NDJ频率为41.85%,而在ORD突变体中过表达Venus::ORD目的片段后,NDJ的频率为0,证明ORD突变体果蝇被外源的Venus::ORD完全拯救,整合片段在果蝇体内正确表达。3.通过遗传杂交及免疫荧光实验,对SOLO突变体中的Venus::ORD在有丝分裂及减数分裂过程中的荧光信号进行观察,判断SOLO与ORD之间是否存在相互作用。结果表明:在有丝分裂与减数分裂过程中,SOLO突变体中的ORD蛋白均正确定位,未受到明显的影响。并且SOLO与ORD在有丝分裂和减数分裂前期细胞核内的定位并不一致,推测SOLO与ORD可能不存在于同一个复合体中,SOLO不参与ORD功能的调控。4.对果蝇卵巢进行解剖、提取总蛋白,通过免疫共沉淀联合质谱分析的方法,筛选出SOLO的潜在互作蛋白。结果表明:CO-IP实验后,经Western blot验证,实验组中有特异的FH::SOLO蛋白条带而对照组无条带,证明CO-IP实验成功,故送样质谱分析。经质谱分析,最终筛选出31个SOLO的潜在互作蛋白,其中SOLO已经被证明与SMC1、SMC3之间存在相互作用,说明本实验分析得到的SOLO潜在相互作用蛋白结果可信度较高。通过后续生物信息学分析,发现SOLO可能在三个蛋白复合体中发挥作用,或者SOLO所在复合体与这三个复合体相互作用。

关键词：减数分裂黏连蛋白 SOLO ORD 免疫荧光免疫共沉淀

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基于BIM软件二次开发差异性研究

智能城市 2023年第7期9卷 24-26页

作者：邵帅田鹏张航豪张浩吉林建筑大学交通科学与工程学院吉林长春130119

BIM理论不局限于建筑方面,也应用于道路、桥梁等交通基础设施中,目前国内道路领域应用BIM的主流平台包括AutoDesk和Bentley,常用软件包括ORD、Civil 3D等。国内外对BIM应用标准不同,造成软件功能无法满足用户需求,进而产生了软件二次开... 详细信息

BIM理论不局限于建筑方面,也应用于道路、桥梁等交通基础设施中,目前国内道路领域应用BIM的主流平台包括AutoDesk和Bentley,常用软件包括ORD、Civil 3D等。国内外对BIM应用标准不同,造成软件功能无法满足用户需求,进而产生了软件二次开发。文章针对ORD、Civil 3D软件的二次开发差异性进行对比,对软件插件与接口开发、软件功能拓展开发,以期为相关研究提供参考。

关键词：道路信息模型 Civil 3D ORD 二次开发

基于路网组构的台风风灾风险度评价——以浙江省温州市瓯飞区域围填海规划为例

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灾害学 2014年第2期29卷 175-181页

作者：杨天翔官江敬东姚晓文刘旭上海复旦规划建筑设计研究院上海200433

作为风灾作用的客体和城市的结构要素,城市的路网格局将直接影响台风风险度的大小和分布。以温州瓯飞项目的规划路网为例,对区域的台风风灾风险度进行研究:①基于瓯飞区域地形进行三个代表风向(北风、东北风、东风)的计算流体力学(CFD)... 详细信息

作为风灾作用的客体和城市的结构要素,城市的路网格局将直接影响台风风险度的大小和分布。以温州瓯飞项目的规划路网为例,对区域的台风风灾风险度进行研究:①基于瓯飞区域地形进行三个代表风向(北风、东北风、东风)的计算流体力学(CFD)模拟,将风速平均值作为致灾因子危险度的依据;②基于规划的路网格局,以空间句法理论中的集成度变量预测区域未来的经济和社会活动格局,并以经济发展和生命线工程为线索对基于路网格局的承灾体易损性进行量化;③通过"危险度×易损性"原则分别就三个风向得出风灾风险度。文中通过CFD模拟来分析不同风向的风灾危险性有助于将危险度模拟和响应措施具体化;利用结合运动经济体理论的空间句法模型可间接得出区域路网格局下的易损性分布;将研究区域划为特定大小的网格并通过Getis ORD G统计可得出风险度指标的空间分布特性,并可暗示风灾响应措施的有利度。

关键词：台风灾害风险度 CFD模拟易损性路网组构空间句法理论 Getis ORD G空间统计

Moving from High Culture to ORDinary Culture——On Raymond Williams' Culture Study

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海外英语 2015年第17期 156-157页

作者：陆育红辽宁师范大学外语学院

Culture study has become a new trend in the academic fields,while how to define the scope and object of the culturalstudy,different people have different opinions.Ranging from Matthew Arnold's Culture and Anarchy to Raymond Williams' The Long Revolution,scholars have been constantly exploring the core of cultural study of different periods.Raymond Williams hadcommitted himself to the field of the study,and his study also has pushed ahead the people's understanding of the theory.His con-tribution to the study has been analyzed here and that has brought a great influence to the study of the field.

关键词： British cultural study aesthetics mass culture ORD

[TC]^2三维人体测量系统的应用研究——获取人体体型特征截面的研究

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国外丝绸 2009年第3期24卷 22-25页

作者：王祺明周天祥张渭源东华大学服装学院上海200051 绍兴文理学院浙江绍兴312000

通过分析美国[TC]^2三维人体测量系统的输出文件格式，进行了人体特征截面的研究。选择VRML文件格式的人体模型作为获取体型特征截面的研究对象，利用ORD格式的特征水平截面高度数据与人体模型的交点获取人体特征水平截面的点集，为进... 详细信息

通过分析美国[TC]^2三维人体测量系统的输出文件格式，进行了人体特征截面的研究。选择VRML文件格式的人体模型作为获取体型特征截面的研究对象，利用ORD格式的特征水平截面高度数据与人体模型的交点获取人体特征水平截面的点集，为进一步的研究人体特征截面和体型分类奠定基础。

关键词：服装量身定制三维人体测量系统 VRML ORD 人体截面

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NONMETALS DEPOSITS

Abstracts of Chinese Geological Literature 2008年第1期24卷 77-78页

20080309 Duan Zhenyuan(Northwest Geology Party of Jiangxi Province,Jiujiang 332000,China);Gao Fenglin Characteristics of Zhaocun Bentonite Deposit,Zhejiang Province(Resources Survey & Environment,ISSN1671-4814,CN32-16... 详细信息

关键词： Northwest Jiangxi tables sedimentary limestone ORD