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作者：王成虎天津医科大学

学位级别：硕士

目的:2007年,我们报道了一个典型、完整的原发性开角型青光眼大家系(TJ1家系),在该家系中发现了中国人所特有的新的致病性小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白(MYOC)基因T455K突变。本研究将探讨视神经病变诱导反应蛋白(optn)基因突变与TJ1家... 详细信息

目的:2007年,我们报道了一个典型、完整的原发性开角型青光眼大家系(TJ1家系),在该家系中发现了中国人所特有的新的致病性小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白(MYOC)基因T455K突变。本研究将探讨视神经病变诱导反应蛋白(optn)基因突变与TJ1家系的关系。方法:(1)基因组DNA的提取:采用DNA分离试剂盒提取19名家系成员及50例正常对照组成员的外周静脉血基因组DNA。(2)聚合酶链反应:应用聚合酶链反应(PCR)技术分段扩增optn基因所有13个编码外显子及邻近的非编码区域。(3)PCR产物的单链构象多态性分析:应用单链构象多态性(SSCP)分析技术筛查19名家系成员optn基因的13个编码外显子及邻近的非编码区域。对SSCP结果异常的片断,则用同样的方法(PCR-SSCP)筛查50例正常对照者中该片断是否存在异常。(4)PCR产物的纯化:将SSCP筛选出的PCR产物用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行纯化。(5)将纯化后的PCR产物直接进行DNA测序。结果:共检测出M98K、R545Q和IVS5+38T＞G三种序列改变:①M98K携带者:家系成员5/19,其中2/5为POAG,1/5为可疑者,2/5为无青光眼体征者;对照组0/50。②R545Q携带者:家系成员3/19,其中1/3为POAG,2人为无青光眼体征者;对照组5/50。③IVS5+38T＞G携带者:家系成员12/19,其中5/12为POAG,1/12为可疑者,6/12为无青光眼体征者;对照组:30/50。结论:(1)中国人原发性开角型青光眼TJ1家系的遗传方式为常染色体显性遗传。(2)MYOC基因和optn基因可能均参与了TJ1家系POAG的发病,MYOC基因是致病基因,optn基因可能在MYOC基因的致病中起调节作用,突变的optineurin蛋白可能通过影响MYOC基因mRNA的稳定性使MYOC基因的致病性增强。(3)optn基因R545Q序列改变在中国人中是一种常见的基因多态性表现,与POAG的发病无关。(4)optn基因IVS5+38T＞G序列改变在中国人中是一种常见的基因多态性表现,与POAG的发病无关,IVS5+38T＞G可能是中国人所特有的一种多态性序列改变。

关键词：青光眼开角型 MYOC基因 optn基因 T455K M98K 突变单核苷酸多态性

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加压培养对视网膜神经节细胞存活状态的影响

加压培养对视网膜神经节细胞存活状态的影响

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作者：敖秀芹中国医科大学

学位级别：硕士

青光眼是世界第二大致盲性眼病,视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells, RGCs)的凋亡是青光眼发病的基本病理机制,眼内压升高是最重要的危险因素,但是眼内压引起RGCs凋亡的确切机制还不清楚。有研究表明遗传因素在青光眼的发病中起... 详细信息

青光眼是世界第二大致盲性眼病,视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells, RGCs)的凋亡是青光眼发病的基本病理机制,眼内压升高是最重要的危险因素,但是眼内压引起RGCs凋亡的确切机制还不清楚。有研究表明遗传因素在青光眼的发病中起着重要的作用。optn基因是POAG确定的两个致病基因之一,研究证实其在细胞存活和凋亡中起到调控作用。本实验对RGC-5 (Retinal ganglion cell-5)进行加压培养,通过对不同压力培养条件下视网膜神经节细胞的生长存活率、凋亡情况及optn基因表达等指标的观察,分析不同压力培养条件下RGC-5细胞的活性和总体存活状态,从而初步探讨压力对视网膜神经节细胞的直接作用及影响。方法对传代培养的RGC-5分别给予0、20、40、60、80mmHg压力48小时,应用MTT方法和流式细胞学检测方法检测压力对RGC-5细胞存活率和凋亡的影响。应用免疫组织化学方法、Q-Real-time PCR和Western-Blot的方法检测压力作用下培养的RGC-5细胞optn基因的表达量。统计结果均以均数±标准差表示,各组间的比较用配对t检验分析方法,均用SPSS13.0软件进行统计分析。结果1、培养的RGC-5细胞呈梭型,平均分裂时间为2-3天左右,细胞生长旺盛。2、MTT和流式检测结果显示在加压处理48小时后RGC-5存活率随着压力的增高逐渐下降,各组间差异有显著的统计学意义(Poptn基因mRNA的表达量分别为对照组的0.12倍,0.04倍,0.35倍,0.48倍,各加压组细胞mRNA表达量与对照组比较均有统计学差异(P0.05),40mmHg和60mmHg加压组与对照组比较有显著的统计学差异(Poptn基因表达水平的V字形波动提示在不同压力条件下optn基因对培养视网膜神经节细胞的存活的调控作用可能不同,存在着细胞受损晚期的保护性作用可能。

关键词：视网膜神经节细胞压力凋亡 optn基因青光眼

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