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铜绿假单胞菌重组Bb-oprf疫苗构建及鉴定

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中国人兽共患病学报 2011年第4期27卷 303-306页

作者：朱佑明罗永艾李文桂重庆医科大学附属第一医院呼吸内科重庆400016 重庆市第一人民医院重庆400022

目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-oprf疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得oprf抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒... 详细信息

目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-oprf疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得oprf抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-oprf。转化***21(DE3)感受态细胞,抽提质粒行酶切电泳和测序验证后,电穿孔转化到Bb中,构建铜绿假单胞菌rBb-oprf疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016bp的oprf编码基因;重组质粒经双酶切鉴定,切出4 947bp的载体片段和10 16bp的目的基因片段;以rBb抽提质粒为模板进行PCR扩增可得到1 016bp的oprf基因片段。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb-oprf疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定基础。

关键词：铜绿假单胞菌 oprf 疫苗

铜绿假单胞菌外膜蛋白oprf基因的克隆与原核表达

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现代预防医学 2009年第5期36卷 926-928+930页

作者：陈建国苏兆亮柳迎昭戴晓莉薛渊王胜军邵启祥许化溪江苏大学附属人民医院江苏大学医学技术学院

[目的]克隆铜绿假单胞菌oprf基因,并进行原核表达,以期进一步开展铜绿假单胞菌基因工程疫苗的研究。[方法]利用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增出oprf基因。采用T-A克隆构建pMD18-T-oprf重组质粒,测序正确后经BamHⅠ、HindⅢ双酶切获... 详细信息

[目的]克隆铜绿假单胞菌oprf基因,并进行原核表达,以期进一步开展铜绿假单胞菌基因工程疫苗的研究。[方法]利用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增出oprf基因。采用T-A克隆构建pMD18-T-oprf重组质粒,测序正确后经BamHⅠ、HindⅢ双酶切获得oprf片段,插入到表达载体pET32a,获得pET32a-oprf重组表达质粒并在表达宿主菌***21中诱导表达,利用Ni-NTA柱对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹进行鉴定。[结果]克隆oprf基因(459bp)并经DNA测序证实,表达重组蛋白oprf并获得纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹鉴定正确。[结论]成功克隆了oprf基因并获得原核表达物,为铜绿假单胞菌的致病性研究和开展基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌 oprf 克隆与表达疫苗

铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf的构建及其表达

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中国病原生物学杂志 2011年第6期6卷 420-423页

作者：朱佑明罗永艾李文桂重庆医科大学附属第一医院呼吸内科重庆400016 重庆市第一人民医院重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所

目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增oprf抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌... 详细信息

目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增oprf抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-oprf,转化***21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016 bp的oprf编码基因;重组质粒经双酶切和测序鉴定证实oprf基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析表达产物分子质量单位约为61 ku,与预期结果一致,表达的蛋白质占菌体总蛋白的16%;Western blot鉴定重组蛋白能被Pa外膜粗抗原免疫小鼠血清识别。结论成功构建了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-oprf,该质粒在***21(DE3)中高效融合表达,表达的融合蛋白具有抗原特异性。

关键词：铜绿假单胞菌 oprf 大肠埃希菌表达

铜绿假单胞菌外膜蛋白oprf和OprH基因扩增、融合、克隆及原核表达

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江西医学院学报 2004年第2期44卷 5-9页

作者：张万山陈燕曹郁生江西医学院第一附属医院烧伤中心江西南昌330006 中德联合研究院教育部食品科学重点实验室江西南昌330047

目的　在大肠杆菌中串联表达铜绿假单胞菌外膜蛋白oprf和OprH ,获得重组融合蛋白oprf/H ,为抗铜绿假单胞菌的疫苗研究打下基础。方法　从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA ,设计PCR引物扩增出oprf和OprH基因 ,扩增片段经过酶切、连接和PCR... 详细信息

目的　在大肠杆菌中串联表达铜绿假单胞菌外膜蛋白oprf和OprH ,获得重组融合蛋白oprf/H ,为抗铜绿假单胞菌的疫苗研究打下基础。方法　从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA ,设计PCR引物扩增出oprf和OprH基因 ,扩增片段经过酶切、连接和PCR扩增后 ,割胶回收PCR产物并将其克隆至克隆质粒 ,测序后构建表达质粒pGEX F/H ,并转化大肠杆菌BL2 1。结果　重组表达质粒经IPTG诱导后表达融合外膜蛋白oprf/H。

关键词：铜绿假单胞菌 oprf OprH 融合表达

铜绿假单胞菌外膜蛋白L和F基因单价、融合和联合DNA疫苗的免疫效果

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第2期39卷 125-125页

作者：宫强阮梦蝶彭永刚牛明福郭洁真河南科技大学食品与生物工程学院洛阳471023 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

铜绿假单胞菌是一种条件性人畜共患病原菌,不仅可引起人的烧伤感染、脓胸等疾病,还可引发禽类等动物的菌血症、败血症等。近年来,由于抗生素的大量应用,导致该菌的耐药性迅速上升,亟需一种更加有效的方式控制该病。本文以铜绿假单胞菌... 详细信息

铜绿假单胞菌是一种条件性人畜共患病原菌,不仅可引起人的烧伤感染、脓胸等疾病,还可引发禽类等动物的菌血症、败血症等。近年来,由于抗生素的大量应用,导致该菌的耐药性迅速上升,亟需一种更加有效的方式控制该病。本文以铜绿假单胞菌主要外膜蛋白编码基因oprL和oprf为基础构建了单价、二价融合和联合DNA疫苗,并对其免疫小鼠和鸡后诱导的体液、细胞免疫应答水平及攻毒保护效果进行了检测,旨在为研制新型高效的铜绿假单胞菌疫苗提供实验资料。

关键词：外膜蛋白编码基因铜绿假单胞菌 DNA疫苗免疫效果细胞免疫应答人畜共患烧伤感染 oprf

DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

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中国药科大学学报 2019年第6期50卷 743-752页

作者：黄仕琴石敏何颖娜岳瀚勋余娴重庆医科大学附属第二医院I期临床试验研究室重庆400010 河北中医学院药学院石家庄050200 重庆医科大学药学院生物化学与分子药理学重点实验室重庆400010

构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-oprf-VP22的阳离子脂质体(Lip-poprf-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-poprf-VP22对pVAX1-oprf-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-poprf-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-oprf-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-poprf-VP22),检测其转染DC2.4后oprf蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果表明,Lip-poprf-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5∶1时即能很好的包封pVAX1-oprf-VP22;当Lip-poprf-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-poprf-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2∶1增加到10∶1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4∶1、5∶1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5∶1时,Lip-poprf-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-poprf-VP22转染DC2.4后可表达更多oprf蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。

关键词：铜绿假单胞菌 DNA疫苗 DC靶向适配体 oprf

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面向车联网的抗设备捕获认证密钥协商协议

中国科学：信息科学 2022年第12期52卷 2351-2370页

作者：姜奇杨雪王金花程庆丰马鑫迪马建峰西安电子科技大学网络与信息安全学院西安710071 河南省网络密码技术重点实验室郑州450001 战略支援部队信息工程大学网络空间安全学院郑州450001

随着汽车保有量的持续增长和道路交通的饱和,车联网被视为有效提高交通效率,改善驾乘体验的有效技术之一.认证密钥协商协议是保证车载单元(onboard unit,OBU)与各种信息服务器安全交互的关键手段.通常,认证密钥协商协议所需的密钥被存储... 详细信息

随着汽车保有量的持续增长和道路交通的饱和,车联网被视为有效提高交通效率,改善驾乘体验的有效技术之一.认证密钥协商协议是保证车载单元(onboard unit,OBU)与各种信息服务器安全交互的关键手段.通常,认证密钥协商协议所需的密钥被存储于OBU中.然而,由于车辆常处于无人值守状态,OBU失盗事件时有发生.因此,如何确保私钥的存储安全是一个具有挑战性的难题.为了解决上述问题,本文提出了基于不经意伪随机函数(oblivious pseudorandom functions,oprf)和两方协同签名的抗捕获认证密钥协商协议.借助于两方协同签名,私钥被分成两个部分,一部分使用辅助设备的公钥加密,另一部分通过OBU和辅助设备运行oprf协议才能恢复.由于OBU中没有存储任何秘密信息,即使OBU被盗取,攻击者仍然无法获取私钥.本文对提出的方案进行了全面的安全性分析和性能比较.结果表明所提出的方案可以抵抗各种已知的攻击,特别是设备被捕获导致的密钥泄露.此外,所提出的方案可以实现计算开销和通信开销的平衡.

关键词：车联网 Schnorr协同签名 oprf 认证密钥协商抗设备捕获

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车联网场景下的抗泄露安全协议研究

车联网场景下的抗泄露安全协议研究

作者：王金花西安电子科技大学

学位级别：硕士

随着汽车保有量的持续增长和道路交通的饱和,车联网被视为提高交通效率,改善驾乘体验的有效技术之一。目前,车联网的应用领域不断增加,如娱乐、导航等,车辆和各种信息服务器的通信越来越频繁。安全通信协议是保证车辆与信息服务器安全... 详细信息

随着汽车保有量的持续增长和道路交通的饱和,车联网被视为提高交通效率,改善驾乘体验的有效技术之一。目前,车联网的应用领域不断增加,如娱乐、导航等,车辆和各种信息服务器的通信越来越频繁。安全通信协议是保证车辆与信息服务器安全交互的关键手段。安全通信协议所需的密钥通常被存储于车辆的内存中。然而,由于车辆常处于无人值守状态,车辆被盗事件时有发生,车辆容易遭受攻击者的物理攻击。目前国内外已经提出了大量的车联网场景下的安全通信协议。但是,这些协议大多没有考虑私钥的安全存储问题,或假设密钥存储在抗篡改设备上。然而,现实中几乎不存在满足上述条件的抗篡改设备。因此,设计一个面向车联网的安全通信协议以防止车辆被盗取后的密钥泄露是一个具有挑战性的难题。本文以车联网为背景,利用不经意伪随机函数（Oblivious Pseudo-Random Function,oprf）和部分不经意伪随机函数（Partial Oblivious Pseudo-Random Function,Poprf）的特性,设计了基于oprf的双因子认证密钥协商协议（oprf-based two factor authentication,oprf-2FA）和基于TPoprf的安全导航信息通信协议（TPoprf-based secure navigation communication,TPoprf-NC）。具体的研究成果如下:1、oprf-2FA方案通过结合oprf技术和两方协同签名技术防止车辆被盗取后的密钥泄露。首先,车辆的私钥被分成两个部分:一部分使用辅助设备的公钥加密,另一部分通过拥有输入的车载单元和拥有oprf密钥的辅助设备运行oprf协议恢复。即使车辆被攻击者盗取,由于车辆中没有存储和私钥有关的秘密信息,攻击者仍然无法获取私钥。其次,oprf-2FA使用基于两方计算的协同签名实现了车辆与服务器的双向认证和密钥协商。最后,本文对提出的oprf-2FA方案进行了全面的安全性分析和性能比较。结果表明所提出的oprf-2FA方案可以抵抗各种已知的攻击,特别是防止车辆被盗取后的密钥泄露,且提出的oprf-2FA协议具有更优的性能。2、基于车辆导航系统中对通信时延和通信带宽的要求,本文结合最简单的秘密共享-（2.2）门限和无证书认证方案提出了TPoprf-NC方案。首先,用户向车载单元输入口令,通过与辅助设备交互执行TPoprf协议计算密钥材料,进而恢复解密密钥并通过解密获得车辆的私钥。然后,车辆与导航服务器执行CL-ICAE实现双向认证,认证之后,导航服务器为车辆提供路线规划的服务。此外,在辅助设备的帮助下,TPoprf-NC使用随机数共享算法实现了对密钥的定期更新。密钥的定期更新增加了密钥的安全性,即使车载单元或辅助设备被盗取,敌手也无法获得更新后的密钥。最后,通过对协议TPoprf-NC的安全性分析和性能比较,证明了TPoprf-NC具有抗密钥泄露的安全属性,且提出的TPoprf-NC具有更优的性能。

关键词：车联网抗密钥泄露 oprf TPoprf 认证协同签名

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视频直播平台中的用户隐私保护研究

视频直播平台中的用户隐私保护研究

作者：赵威浙江工商大学

学位级别：硕士

随着我国信息技术的发展与科技的进步,各种直播平台层出不穷,目前直播平台已经渗透到我们生活中的方方面面。而除了娱乐直播和商务类直播持续火热之外,教育直播这一新兴领域也逐渐受到资本市场和平台机构的青睐,不少直播平台相继推出教... 详细信息

随着我国信息技术的发展与科技的进步,各种直播平台层出不穷,目前直播平台已经渗透到我们生活中的方方面面。而除了娱乐直播和商务类直播持续火热之外,教育直播这一新兴领域也逐渐受到资本市场和平台机构的青睐,不少直播平台相继推出教育直播。教育直播以其互动性强、自主性高和高效性等特点受到广大受教育人群和在线教育机构的热烈欢迎。虽然教育直播平台的蓬勃发展给我们带来很多便利,同时也给用户的隐私带来了很多威胁,这些直播平台对用户隐私信息的保护严重缺失,平台中用户的隐私信息被窃取后可能会造成严重后果。在此背景下,设计并实现考虑用户隐私的视频直播平台,无论在理论研究还是在实际应用中都具有重要意义。本文首先阐述了考虑用户隐私的视频直播平台的研究背景与意义,并对隐私保护领域的主要研究方向及其国内外研究现状做了详细介绍。其次本文结合视频直播平台的设计,研究了一些密码学中的关键技术。文章阐述了密码学中的一些加密算法,并对他们的优缺点进行分析。文章还研究了 JavaFX浏览器框架,它能够将本文中由Java编写的密码学算法逻辑组件的生成结果嵌入到Web页面进行提交,并将信息处理组件以注入的形式与其交互,适合用于实现本文中的视频直播平台。接着针对目前教育类直播平台普遍存在的隐私泄露问题,本文详细阐述了考虑用户隐私的视频直播平台的设计,针对教育类用户,将班级设置为标签并对传递在用户和权限管理服务器之间的数据进行加密保护。本文提出对多标签支持和主动匹配的方案;本文还考虑到用户之间的关注关系会发生变化的需求,我们提出的权限撤回方案进一步满足对用户隐私保护的需求。本文实现了考虑用户隐私的视频直播平台。平台设计的核心是基于RSA盲签名的oprf算法。整个平台中对信息所有的加密和解密操作都是在用户的本地客户端进行的,而平台权限管理服务器对用户加密后的标签信息会进行盲匹配。学生用户和教师用户在发布和验证关注请求时,双方不需要同步在线,并且所有的加解密操作都是在平台用户的客户端上自动完成的,用户在平台上的操作像在其它平台上的操作一样简单方便。最后我们对平台进行分析和实验测试,并对实验结果进行仔细分析。经过实验和分析对比,平台的安全性和性能完全符合我们的预期,在满足安全性的同时,平台完全符合实际应用的需要。

关键词：隐私保护教育直播平台 RSA盲签名 oprf