检索结果-南通市图书馆

生物技术 2022年第2期32卷 153-158页

作者：李赛男陈娜楼庄伟葛菁萍高冬妮黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心黑龙江哈尔滨150500 黑龙江大学生命科学学院微生物省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150080 东北林业大学生物学流动站黑龙江哈尔滨150040

[目的]定量分析重组杆状病毒在少突神经胶质细胞(oligodendrocyte,ol)中的表达水平,为探索重组杆状病毒最佳转导条件。[方法]首先构建重组杆状病毒,将重组杆状病毒转导至OL细胞,通过荧光显微镜观察细胞形态及EGFP表达情况,并采集细胞的... 详细信息

[目的]定量分析重组杆状病毒在少突神经胶质细胞(oligodendrocyte,ol)中的表达水平,为探索重组杆状病毒最佳转导条件。[方法]首先构建重组杆状病毒,将重组杆状病毒转导至OL细胞,通过荧光显微镜观察细胞形态及EGFP表达情况,并采集细胞的数字图像。利用CellProfiler软件对重组杆状病毒在OL细胞中转导后的表达水平进行数字图像分析,得到各个优化条件的EGFP阳性细胞比率及表达强度,绘制图表并分析。[结果]40MOI重组杆状病毒转导OL细胞并添加10 mmol/L丁酸钠,转导时间为12 h,培养时间为72 h时病毒转导效率最高;培养时间为48 h,其它条件相同情况下EGFP表达强度最高。[结论]定量分析优化后,重组杆状病毒转导OL细胞的表达效率及EGFP的表达水平得到显著上调。

关键词： CellProfiler软件重组杆状病毒 OL细胞绿色荧光蛋白表达水平

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

CVB对OL细胞和ol/BDV细胞I型IFN信号转导途径的影响

引用

微生物学杂志 2019年第4期39卷 46-51页

作者：翟爱霞颜冬梅王海萍卜桐崔乐乐考文萍张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室伍连徳研究所黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室黑龙江省普通高校感染与免疫科技创新团队黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第四医院黑龙江哈尔滨150001

探讨柯萨奇病毒(coxsackievirus, CVB)对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte, ol)和博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)持续感染的OL细胞(ol/BDV)中I型干扰素(interferon, IFN)、microRNA-155(miR-155)表达以及干扰素调节因子(interferon regulatory factor, IRF)7细胞定位的影响。CVB感染OL细胞和ol/BDV细胞0、2、4、6、12和24 h,qPCR检测I型IFN mRNA和miR-155表达水平。OL细胞和ol/BDV细胞分别转染IRF7-EGFP质粒,CVB感染4 h,观察IRF7细胞定位情况。CVB感染OL细胞2、4、12和24 h,IFN-αmRNA和miR-155表达水平显著增加,IFN-βmRNA表达水平在4、12和24 h显著增加;CVB感染ol/BDV细胞IFN-α和IFN-βmRNA表达水平除0 h均显著增加,但miR-155表达仅在12和24 h显著增加。CVB感染OL细胞和ol/BDV细胞4 h,IRF7绿色荧光蛋白由细胞浆转移至细胞核内。综上所述,CVB可诱导OL细胞和ol/BDV细胞I型IFN、miR-155的表达,促进IRF7入核,从而激活I型IFN信号转导途径。

关键词：柯萨奇病毒 OL细胞 ol/BDV细胞 I型IFN信号转导途径 microRNA-155

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

构建基于杆状病毒的BV-T7杂合表达体系及利用其在哺乳动物和禽类细胞中表达eGFP基因

引用

微生物学报 2012年第3期52卷 318-325页

作者：葛菁萍唐晓艳高冬妮宋姗姗鲁珊楼庄伟平文祥微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江大学生命科学学院哈尔滨150080

【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP),从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,结合T7表达系... 详细信息

【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP),从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,结合T7表达系统,通过对eGFP表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒,pFastBac-CMV-T7 RNAP重组杆状病毒为哺乳动物细胞启动子CMV调控的噬菌体T7 RNA聚合酶的cDNA;pFB-T7pro-IRES-GFP-T7ter重组杆状病毒为T7启动子控制的eGFP报告基因。将两支重组杆状病毒共同侵染哺乳动物ol(oligodendrocyte)细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞。【结果】两支重组杆状病毒利用T7启动子和T7 RNAP,在OL细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中成功表达eGFP报告基因,而且未引起细胞病变,但在鸡胚原代细胞中eGFP的表达相对弱于在OL细胞中的表达。在OL细胞中重组杆状病毒对细胞的转导效率为59.5%,在鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中转导效率分别为23.2%和33.1%。【结论】本研究构建的基于杆状病毒、T7RNA聚合酶、T7启动子(BV-T7)杂合表达体系能够在哺乳类细胞及禽类细胞中表达T7 RNAP,并利用T7RNAP继续高效而稳定地表达外源基因。这为难于体外操作的RNA病毒提供了有效的研究方法,并对新型基因工程疫苗的研制提供了一个高效而稳定的表达载体系统。

关键词：重组杆状病毒 T7RNA聚合酶/启动子 eGFP OL细胞鸡胚原代细胞

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体的构建及其初步验证

miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体的构建及其初步验证

引用

作者：王明菊重庆医科大学

学位级别：硕士

背景与目的：抑郁症是一类常见病，临床上主要表现为患者对日常活动和娱乐的兴趣减退、对前途悲观失望、容易焦虑、睡眠质量较差等，迄今，人们对抑郁症的发病原因以及发病机制还不是很清楚，但是可以肯定的是，其发病有生物、心理... 详细信息

背景与目的：抑郁症是一类常见病，临床上主要表现为患者对日常活动和娱乐的兴趣减退、对前途悲观失望、容易焦虑、睡眠质量较差等，迄今，人们对抑郁症的发病原因以及发病机制还不是很清楚，但是可以肯定的是，其发病有生物、心理以及社会环境等内外因素的参与。近年来，有研究提示miRNAs与精神疾病有关联，其可能在精神疾病的发生、发展中起着十分重要的角色。有研究发现miR-134的表达水平在BD躁狂相病人的血液中降低，然而miR-134的表达水平在癫痫持续状态（status epilepticus，SE）造模成功的大鼠模型中上升，并且在内侧颞叶癫痫（Mesial Temporal LobeEpilepsy，MTLE）病人中也同样检测到miR-134表达水平的升高。目前的研究主要是证实了miR-134异常表达与精神疾病有关，但是对精神疾病中miR-134的精细调控机制的研究还十分有限。如果想要更加深入地了解miR-134发挥的作用，我们需要建立细胞或动物模型，在细胞及动物水平检测其引起的病理生理改变。本课题的目的在于构建miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体，并且将构建好的质粒和慢病毒转染至ol（oligodendroglia，人类少突胶质瘤）细胞、SD大鼠海马神经元中，为研究抑郁症的分子机制提供有效的实验工具。方法： 1.用PCR的方法从OL细胞基因组中扩增含有miR-134基因的目的片段，并将miR-134基因的PCR产物和载体pEGFP-N1连接以构建pEGFP-miR-134载体，经酶切、测序证实之后采用Invitrogen公司的Lipofectamine LTX和Plus Reagents转染试剂盒将质粒瞬时转染至OL细胞中，提取总RNA,在基因水平检测miR-134在OL细胞中的表达变化。 2.取出生24h内的清洁级SD乳鼠，断头后分离提取海马神经元，采用无血清培养基培养神经元，为后期在海马神经元中进行的细胞活力实验、细胞凋亡实验及突触可塑性实验奠定良好基础。 3.构建Lenti-miR134-EX慢病毒表达载体，并包装、纯化慢病毒，经鉴定慢病毒包装成功后将其感染SD大鼠海马神经元，提取总RNA,在基因水平检测miR-134在海马神经元中的表达变化。结果： 1.从OL细胞基因组中成功扩增出含有miR-134基因的目的片段，并将其连接到载体pEGFP-N1，命名为pEGFP-miR-134，且转染OL细胞效果较好。 2.用简单的方法即可分离培养出高纯度（可达90%以上）的海马神经元。 3.成功包装了能够表达绿色荧光蛋白的慢病毒载体，命名为Lenti-miR134-EX。结论：本课题成功构建了miR-134真核质粒表达载体和慢病毒载体，并获得瞬时转染的OL细胞以及SD大鼠原代海马神经元，为深入研究miR-134在抑郁症的精细调控机制提供了有效的工具和平台。

关键词： miR-134 OL细胞海马神经元抑郁症

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：