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LRR1在病理性视网膜新生血管形成中的作用研究

LRR1在病理性视网膜新生血管形成中的作用研究

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作者：黄楠南京医科大学

学位级别：硕士

目的:通过观察沉默LRR1基因的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在体外培养条件下的生长情况,研究LRR1对HUVEC细胞增殖、运动与分化的影响。通过观察干扰眼部LRR1表达对氧诱导(oir)模型小鼠以及糖尿病视网膜病变(DR)模型小鼠新生血管形成情况的影... 详细信息

目的:通过观察沉默LRR1基因的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在体外培养条件下的生长情况,研究LRR1对HUVEC细胞增殖、运动与分化的影响。通过观察干扰眼部LRR1表达对氧诱导(oir)模型小鼠以及糖尿病视网膜病变(DR)模型小鼠新生血管形成情况的影响,研究LRR1在小鼠视网膜病理性新生血管发育中发挥的作用。病理性新生血管形成往往被认为是由血管生成因子与抑制因子之间动态平衡发生紊乱引起的,本文旨在通过探讨LRR1在视网膜病理性新生血管形成过程中的作用,寻求新的血管生成抑制途径。方法:(1)离体实验:选取HUVEC细胞,使用sh RNA慢病毒对其进行转染,将其分为三组:正常对照组(C)、阴性病毒转染组(sh-Ctrl)、阳性病毒转染组(sh-LRR1)。通过Real-time PCR分别对三组HUVEC中LRR1的表达情况进行检测,随后采用EDU实验检测各组细胞增殖情况,利用Transwell以及划痕实验分析细胞迁移侵袭能力,运用小管形成实验(tube formation)评估细胞的血管生成能力。(2)在体实验:分别进行了氧诱导视网膜病变(oir)模型与糖尿病视网膜病变(DR)模型的建立。将小鼠随机分为4组:正常对照组(不进行造模处理)、oir/DR对照组、oir/DR阴性病毒处理组以及oir/DR阳性病毒处理组。oir/DR组小鼠采用玻璃体腔内注射分别给予DMEM、阴性病毒(sh-Ctrl)稀释液及阳性病毒(sh-LRR1)稀释液处理,并于成模后进行Evans blue染色及定量、i B4染色等实验,通过比较各组小鼠视网膜的增生、渗漏等情况评估LRR1对新生血管形成发挥的作用。结果:(1)离体实验:慢病毒转染后,阳性病毒转染组(sh-LRR1)中LRR1表达量明显下降,而在阴性病毒转染组(sh-Ctrl)中其表达无明显改变,表明sh-LRR1成功干扰了LRR1基因的表达。与对照组细胞相比,沉默LRR1基因的HUVEC的增殖能力无明显变化,细胞迁移和小管形成均有明显增多。(2)在体实验:通过对正常对照组、成模对照组、sh-Ctrl成模组以及shLRR1成模组小鼠的比较,发现在眼部干扰LRR1基因表达使DR模型中视网膜新血管生成及血管渗漏更加严重;与此相符的是沉默眼部LRR1也能增加oir模型中病理性新生血管的形成,甚至造成了视网膜与玻璃体的粘连。结论:本研究结果显示LRR1对血管内皮细胞的迁移能力和成管能力存在明显作用,而对其增殖能力无明显影响,沉默LRR1使视网膜病理性新生血管形成进一步加重。以上结果表明LRR1可能参与抑制视网膜病理性新生血管形成。

关键词： LRR1 oir DR 病理性视网膜新生血管形成

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