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oip5-as1通过调节miR-29b影响人滋养细胞迁移和侵袭功能的机制

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OIP5-AS1通过调节miR-29b影响人滋养细胞迁移和侵袭功能的机制

作者：田昊心郑州大学

学位级别：硕士

背景:子痫前期(pre-eclampsia,PE)是妊娠期20周以后出现的特发性高血压综合征,以高血压和蛋白尿为主要特征,尤其重度子痫前期(severe pre-eclampsia)可引起多种妊娠期并发症,对母婴健康和生命安全造成了极大的损害和影响。PE的病因和... 详细信息

背景:子痫前期(pre-eclampsia,PE)是妊娠期20周以后出现的特发性高血压综合征,以高血压和蛋白尿为主要特征,尤其重度子痫前期(severe pre-eclampsia)可引起多种妊娠期并发症,对母婴健康和生命安全造成了极大的损害和影响。PE的病因和发病机制尚不明确,但有研究认为,PE是一种以滋养细胞侵袭和迁移能力的缺陷所造成的子宫螺旋动脉重塑不足为其主要特征的胎盘源性疾病。然而,目前对于参与滋养细胞迁移和侵袭功能调控的潜在分子机制尚不明确。现有研究表明,虽然绝大多数的人类基因组被转录为蛋白,但只有2%具有编码功能。长链非编码核糖核酸(Long non-coding RNA,lncRNAs)最初被视为不具有特定功能的转录噪声,主要由聚合酶Ⅱ转录,长度>200个核苷酸,不存在开放阅读框(ORF)。然而近年来的研究认为,lncRNAs已成为新的基因调控和协调因子,其通过作为表观遗传调控因子、分子支架、分子信号或诱饵,下调或诱导蛋白编码基因的过表达。LncRNAs的作用模式之一是与microRNAs(miRNAs)的相互作用,这种机制被称为竞争内源性RNA(ceRNAs)。lncRNAs通过吸附存在互补序列的miRNAs,释放miRNAs靶向的mRNA,作为ceRNAs。lncRNA和miRNA与广泛的生物学、生理和病理过程相关,如妊娠相关疾病。Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(oip5-as1)位于15q15.1染色体上,是一种进化上保守的lncRNA,是斑马鱼转录本Cyrano的哺乳动物同源物,主要表达于细胞质中。据现有研究表明,oip5-as1是肿瘤生长和进展的关键调控因子:oip5-as1通过下调miR-129-5p使得其对SOX2(性别决定区Y-box2)靶向减少,进而抑制乳腺癌进展;在宫颈癌中,oip5-as1通过吸附miR-143-3p上调SMAD3和ITGA6的表达。然而,oip5-as1在PE发生发展中的作用并不明确。本研究初步分析显示,oip5-as1在滋养层细胞的化学缺氧模型中显著下调,而滋养细胞的缺氧模型是常见的体外PE模型;oip5-as1被发现包含一个保守的miR-29b结合位点;此外,在ITGB1(integrin β1)基因的3’-非编码区(3’-UTR)上发现了一个miR-29b结合位点。miR-29b和ITGB1被发现可能在滋养层细胞浸润、胎盘血管生成和促滋养细胞凋亡等PE的发病机制中起到关键作用。因此,本研究旨在探讨oip5-as1在滋养细胞迁移和侵袭功能中的作用及其可能的机制。并首次发现oip5-as1可能通过吸附miR-29b来上调ITGB1的表达,而miR-29b和ITGB1被认为是PE发病的关键基因。这些发现突出了oip5-as1在PE发病机制中的重要作用,并为该疾病的发展提供了新的前景。目的:1.探究oip5-as1、miR-29b和ITGB1在子痫前期患者胎盘组织中和正常胎盘组织中的表达差异;2.探究oip5-as1对滋养细胞迁移和侵袭能力的影响以及其分子生物学机制。实验方法:1.选取研究对象及采集标本:根据最新发布的《妊娠期高血压疾病诊治指南(2020)》对重度子痫前期的定义,从郑州大学第三附属医院生物样本库选取了正常孕妇和重度子痫前期组患者胎盘组织样本,分为重度子痫前期组(severe pre-eclampsia,SPE)和正常组(Normal),每组各 30 例样本。正常组为本院健康足月妊娠孕妇。为了避免分娩方式对研究结果可能造成的影响,例如经阴道分娩产生的感染等,本研究中SPE组和Normal组孕妇的分娩方式均为剖宫产。排除标准为:慢性高血压合并妊娠、妊娠期糖尿病、甲状腺功能减退、慢性肝炎、自身免疫性疾病、辅助生殖以及双胎妊娠等;2.使用 RT-qPCR 法检测oip5-as1、miR-29b 和 ITGB 1 在 SPE 组和 Normal组胎盘组织中的mRNA表达,并采用2-ΔΔCt相对定量法进行数据分析;3.使用Western blot法检测ITGB1在SPE组和Normal组胎盘组织中蛋白的相对表达量,然后用Image.J 1.53k图像处理软件进行定量分析;4.使用oip5-as1的小干扰RNA(si-oip5-as1)、miR-29b的模拟物和抑制物(hsa-miR-29b-mimic、hsa-miR-29b-inhibitor)及其各自的阴性对照(si-NC、mimic-NC 和 inhibitor-NC)转染滋养层细胞(HTR-8/SVneo),通过 RT-qPCR法检测转染效率;5.转染成功后,通过RT-qPCR法检测si-oip5-as1对下游基因miR-29b的影响,以及转染miR-29b mimic和inhibitor后对oip5-AS

关键词： oip5-as1 miR-29b ITGB1 子痫前期胎盘滋养细胞迁移侵袭

LncRNA oip5-as1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

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天津医药 2023年第2期51卷 131-138页

作者：杨娟张厚芬吴松陈莹罗华荣中国贵航集团三0二医院肾内、内分泌科 561000

目的探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA oip5-as1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA oip5-as1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、HG+si-NC组、HG+si-oip5-as1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-oip5-as1+inhibitor-NC组、HG+si-oip5-as1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA oip5-as1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和裂解的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验确认miR-25-3p与lncRNA oip5-as1和SOX4的靶向关系。结果与NG组相比,HG组细胞中lncRNA oip5-as1和SOX4 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-25-3p水平降低(P5);敲低lncRNA oip5-as1可显著下调SOX m RNA和蛋白水平,上调miR-25-3p水平,增加HK-2细胞活力和SOD、CAT活性以及Bcl-2蛋白水平,降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA、ROS水平、Bax蛋白水平及Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(P5);上调miR-25-3p表达与敲低lncRNA oip5-as1的作用一致;在敲低lncRNA oip5-as1的基础上,下调miR-25-3p可明显减弱lncRNA oip5-as1敲低对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用(P5)。双荧光素酶报告基因实验显示lncRNA oip5-as1和miR-25-3p,以及miR-25-3p和SOX4之间存在结合位点。结论 lncRNA oip5-as1可能通过miR-25-3p/SOX4轴促进高糖诱导的HK-2细胞损伤。

关键词：糖尿病肾病肾小管上皮细胞细胞凋亡细胞增殖 miR-25-3p oip5-as1 性别决定区Y框蛋白4

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H3K27乙酰化修饰促进lncRNA oip5-as1转录并通过上调TLR4诱导过敏性鼻炎鼻黏膜上皮细胞凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 419-427页

作者：谢勇佘志强李容华吴荣华王瑢刘继远广西中医药大学附属瑞康医院耳鼻咽喉头颈外科广西南宁530011

目的本研究旨在探讨组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)乙酰化修饰对长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA1(lncRNA oip5-as1)转录的促进作用,探讨其通过调控Toll样受体4(TLR4)对过敏性鼻炎(AR)中鼻黏膜上皮细胞(NEC)凋亡的影响。方法白细... 详细信息

目的本研究旨在探讨组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)乙酰化修饰对长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA1(lncRNA oip5-as1)转录的促进作用,探讨其通过调控Toll样受体4(TLR4)对过敏性鼻炎(AR)中鼻黏膜上皮细胞(NEC)凋亡的影响。方法白细胞介素13(IL-13)处理NEC以建立AR细胞模型。采用实时定量PCR检测oip5-as1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和体外细胞模型中的表达。ELISA检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、嗜酸性粒细胞趋化因子1(eotaxin-1)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的浓度。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法用于检测NEC的凋亡。双荧光素酶报告实验用于验证oip5-as1和TLR4的关系。染色质免疫沉淀(ChIP)实验分析用于验证oip5-as1启动子区组蛋白的H3K27乙酰化修饰。结果与健康对照和未处理的NEC相比,oip5-as1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和IL-13刺激的NEC中均表达升高。敲减oip5-as1可降低IL-13诱导的NEC的TLR4水平,而过表达oip5-as1可增加IL-13处理的NEC的TLR4水平。敲减oip5-as1可降低IL-13处理的NEC凋亡率及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC的分泌,而过表达TLR4可部分逆转敲减oip5-as1对NEC凋亡及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC表达的影响。此外,H3K27ac在oip5-as1的启动子区域显著富集,H3K27乙酰化可促进oip5-as1在IL-13诱导的NEC中的表达。结论H3K27乙酰化修饰促进oip5-as1转录并通过上调TLR4诱导AR中NEC凋亡。

关键词： H3K27 oip5-as1 TLR4 鼻黏膜上皮细胞(NEC)

敲除oip5-as1基因通过miR-7-5p/PARP1轴增强非小细胞肺癌细胞的化学敏感性

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临床与实验病理学杂志 2020年第9期36卷 1029-1035页

作者：靳彩玲赵树鹏姬颖华王荦楠杨军张清琴牛红蕊河南省新乡医学院第一附属医院肿瘤科卫辉453100 河南省新乡医学院第一附属医院神经外科卫辉453100

目的探讨oip5-as1基因对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞化学敏感性的作用及分子机制。方法采用CCK-8法检测正常肺细胞系BEAS-2B、肺癌细胞系A549和顺铂耐药肺癌细胞A549/DDP的半抑制浓度(IC50)值。应用RT-qPCR检测... 详细信息

目的探讨oip5-as1基因对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞化学敏感性的作用及分子机制。方法采用CCK-8法检测正常肺细胞系BEAS-2B、肺癌细胞系A549和顺铂耐药肺癌细胞A549/DDP的半抑制浓度(IC50)值。应用RT-qPCR检测oip5-as1、miR-7-5p和PARP1的表达水平。生物信息学检测oip5-as1、miR-7-5p和PARP1的靶向关系,用荧光素实验进一步验证。Western blot法检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成检测细胞生长情况。结果A549/DDP细胞中IC50值最高,且oip5-as1高表达,miR-7-5p低表达。miR-7-5p是oip5-as1的靶向调节基因之一,且为负调控关系。敲除oip5-as1抑制A549/DDP细胞的生长并增强化学敏感性,促进A549/DDP细胞凋亡。敲除oip5-as1下调PARP1可以增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。结论oip5-as1通过上调miR-7-5p或下调PARP1,增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。

关键词：肺肿瘤非小细胞肺癌 oip5-as1 miR-7-5p PARP1 化学敏感性

lncRNA oip5-as1在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达及对缺氧缺糖复供诱导的细胞凋亡的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2021年第4期50卷 454-460页

作者：林清江魏冠杨锦锋张国炳福建医科大学附属第二医院急诊科泉州362000

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)Opa相互作用蛋白5反义转录本1(oip5-as1)在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达及其对缺氧缺糖复供(OGD/R)诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法构建脑缺血再灌注大鼠模型,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测脑... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)Opa相互作用蛋白5反义转录本1(oip5-as1)在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达及其对缺氧缺糖复供(OGD/R)诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法构建脑缺血再灌注大鼠模型,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测脑组织中oip5-as1水平。PC12细胞分成Control组(空白对照)、OGD/R组(OGD/R处理)、Vector+OGD/R组(转染阴性对照载体,OGD/R处理)、oip5-as1+OGD/R组(转染oip5-as1过表达载体后以OGD/R处理)、oip5-as1+OGD/R+LY294002组[转染oip5-as1过表达载体,并以磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号抑制剂LY294002处理,之后进行OGD/R处理]。CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2、磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt蛋白水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平。结果脑缺血再灌注大鼠模型脑组织中oip5-as1表达水平降低。与Control组比较,OGD/R组PC12细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt降低,SOD活性降低,MDA和ROS水平升高(均P5)。与Vector+OGD/R组比较,oip5-as1+OGD/R组PC12细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt升高,SOD活性升高,MDA和ROS水平降低(均P5)。与oip5-as1+OGD/R组比较,oip5-as1+OGD/R+LY294002组PC12细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,SOD活性降低,MDA和ROS水平升高(均P5)。结论oip5-as1在脑缺血再灌注大鼠模型中表达下调,上调oip5-as1可抑制OGD/R诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤,其机制与激活PI3K/Akt信号通路有关。

关键词： oip5-as1 PI3K/Akt信号脑缺血再灌注细胞凋亡

长链非编码RNA oip5-as1促进结直肠癌细胞上皮-间质转化

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中国医科大学学报 2024年第10期53卷 877-881页

作者：孙健俞建康段妍西周建平中国医科大学附属第一医院胃肠外科/疝与腹壁外科沈阳110001

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)oip5-as1对结直肠癌转移的作用及其机制。方法采用实时定量PCR检测结直肠癌细胞系(SW480、HCT116、HT-29、Caco-2)中oip5-as1的表达,选择高表达细胞系进行表达沉默。结直肠癌细胞系随机转染对照序列(NC组... 详细信息

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)oip5-as1对结直肠癌转移的作用及其机制。方法采用实时定量PCR检测结直肠癌细胞系(SW480、HCT116、HT-29、Caco-2)中oip5-as1的表达,选择高表达细胞系进行表达沉默。结直肠癌细胞系随机转染对照序列(NC组)、干扰序列1(oip5-as1 siRNA1组)或干扰序列2(oip5-as1 siRNA2组)。用Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blotting检测oip5-as1对上皮-间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达的影响;免疫荧光分析oip5-as1对E-cadherin、N-cadherin蛋白表达和细胞定位的影响。结果与低侵袭性HT-29和Caco-2细胞相比,高侵袭性SW480和HCT116细胞中oip5-as1的表达显著增高(P5)。oip5-as1表达沉默后,SW480和HCT116细胞迁移能力减弱。与对照组相比,沉默oip5-as1后SW480和HCT116细胞中E-cadherin蛋白表达增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达减少。结论oip5-as1可能通过诱导结直肠癌细胞上皮-间质转化和迁移,促进结直肠癌的转移。

关键词：结直肠癌 oip5-as1 上皮-间质转化转移

oip5-as1和miR-410对胶质瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

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河北医药 2020年第18期42卷 2735-2739,2745页

作者：孙伟力孙建平王苑宇刘红江康天寇璐璐焦保华河北医科大学第二医院康复科石家庄市050000 河北医科大学第二医院神经外科石家庄市050000 河北省石家庄市第一医院儿科

目的通过建立oip5-as1 siRNA和miR-410抑制剂转染的U87细胞系,探讨oip5-as1和miR-410抑制剂对胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法通过Lipofectamine-2000转染人胶质细胞瘤细胞系U87细胞。将细胞分为5组:对照组(... 详细信息

目的通过建立oip5-as1 siRNA和miR-410抑制剂转染的U87细胞系,探讨oip5-as1和miR-410抑制剂对胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法通过Lipofectamine-2000转染人胶质细胞瘤细胞系U87细胞。将细胞分为5组:对照组(未转染细胞)、NC组(转染NC序列的细胞)、oip5-as1 siRNA组(转染oip5-as1 siRNA的细胞)、miR-410抑制剂组(转染miR-410抑制剂的细胞)、oip5-as1 siRNA+miR-410抑制剂(siRNA+inhibitor)组(转染oip5-as1 siRNA和miR-410抑制剂的细胞)。通过MTT法检测5组U87细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭力,Wound-healing实验检测细胞迁移。结果oip5-as1 siRNA组细胞增殖较对照组明显受到抑制(P5)。miR-410抑制剂组细胞增殖较对照组明显增强(P5)。与oip5-as1 siRNA组比较,siRNA+inhibitor组增殖显著增加(P5)。与对照组比较,oip5-as1 siRNA组G0/G1期的细胞比例显著增高,而S期的细胞比例降低,细胞凋亡率明显升高差异均有统计学意义(P5);在miR-410抑制剂组G0/G1期的细胞比例降低,S期的细胞比例显著升高,细胞凋亡率明显降低差异均有统计学意义(P5)。与oip5-as1 siRNA组比较,siRNA+inhibitor组G0/G1期细胞明显减少,S期细胞比例增加,凋亡率降低(P5)。各组G2期所占比例无显著差异。oip5-as1 siRNA组的侵袭细胞数量和划痕修复能力显著降低,而miR-410抑制剂组的侵袭细胞数量和划痕修复能力显著升高(P5)。siRNA+inhibitor组在这两个指标上均高于oip5-as1 siRNA组(P5)。结论沉默oip5-as1可抑制U87细胞的增殖、侵袭和迁移。下调oip5-as1表达可诱导U87细胞在G0/G1期停滞和凋亡。miR-410抑制剂可逆转oip5-as1 siRNA对U87细胞的生物学作用。

关键词： oip5-as1 胶质瘤 microRNA 细胞凋亡细胞侵袭

oip5-as1和miR-410在胶质瘤中应用

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疾病监测与控制 2020年第6期14卷 463-465,468页

作者：乔一丹陶菁何楠郑州大学附属儿童医院病理科河南郑州450000

目的:研究oip5-as1和miR-410在胶质瘤中应用。方法:选择2017-07~2019-03来我院治疗胶质瘤的病人,收集45例胶质瘤标本作为研究组,另选择21例脑组织标本作为参照组,观察两组oip5-as1和miR-410的表达情况。结果:研究组oip5-as1表达高于参照... 详细信息

目的:研究oip5-as1和miR-410在胶质瘤中应用。方法:选择2017-07~2019-03来我院治疗胶质瘤的病人,收集45例胶质瘤标本作为研究组,另选择21例脑组织标本作为参照组,观察两组oip5-as1和miR-410的表达情况。结果:研究组oip5-as1表达高于参照组(P5),miR-410表达低于参照组(P5);胶质瘤级别越高oip5-as1表达越高(P5),miR-410表达越低(P5);高级别胶质瘤组织中oip5-as1高于低级别胶质瘤(P5);高级别胶质瘤组织中miR-410低于低级别胶质瘤(P5);oip5-as1、miR-410呈负相关。结论:oip5-as1 siRNA能抑制胶质瘤细胞的侵袭性,而miR-410抑制剂能增加胶质瘤细胞的侵袭性,oip5-as1和miR-410呈负相关性,oip5-as1和miR-410可能影响胶质瘤的发生和发展。

关键词： oip5-as1 miR-410 胶质瘤中表达关系

oip5-as1在肿瘤中表达及调控作用的研究进展

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现代医学 2020年第7期48卷 911-915页

作者：赵俞乔王微娜胡增涛关沧海姜兴明哈尔滨医科大学附属第二医院黑龙江哈尔滨150086

长链非编码RNA(lncRNAs)是一类转录本长度大于200核苷酸但不编码蛋白质的非编码RNA,在诸多肿瘤的发生发展中发挥重要的调控作用。oip5-as1作为一种新发现的lncRNA,在肿瘤中呈现异常表达并调控其恶性生物学行为。作者就oip5-as1在肿瘤中... 详细信息

长链非编码RNA(lncRNAs)是一类转录本长度大于200核苷酸但不编码蛋白质的非编码RNA,在诸多肿瘤的发生发展中发挥重要的调控作用。oip5-as1作为一种新发现的lncRNA,在肿瘤中呈现异常表达并调控其恶性生物学行为。作者就oip5-as1在肿瘤中的表达及调控作用进行综述。

关键词：长链非编码RNA oip5-as1 肿瘤调控作用文献综述