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作者：宁小毅广西医科大学

学位级别：硕士

目的：外周血造血干细胞移植（PBSCT）目前被广泛用于治疗各种类型的血液系统疾病及遗传性疾病。而移植前能够成功将造血干细胞（HSC）从骨髓动员到周血，才能采集到足够的HSC，这是PBSCT治疗成功的前提，但如何让干细胞更有效地动员并... 详细信息

目的：外周血造血干细胞移植（PBSCT）目前被广泛用于治疗各种类型的血液系统疾病及遗传性疾病。而移植前能够成功将造血干细胞（HSC）从骨髓动员到周血，才能采集到足够的HSC，这是PBSCT治疗成功的前提，但如何让干细胞更有效地动员并发挥作用仍然是干细胞治疗的难点。骨髓中的骨髓龛微环境的改变在干细胞动员中的作用目前整被认识和研究。其中成骨细胞是HSC龛中最主要组成成分,如果通过调控骨髓龛中成骨细胞的数量和功能,则可能可以破坏HSC的稳定状态促使干细胞的动员。我们的研究以干细胞动员的成骨细胞为研究对象，观测在干细胞动员的过程中成骨细胞数量变化，通过成骨细胞特异性物质骨钙素(ocn)和促血管生成素-1（Ang1）、基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的变化评估成骨细胞的功能，最后通过大剂量甲状旁腺激素(PTH)抑制成骨细胞，探讨干细胞动员的分子机制。方法：本研究选取雌性C57BL/6小鼠作为实验研究对象，通过注射干细胞动员剂粒细胞集落刺激因子(G-CSF)使小鼠产生干细胞动员，然后采用实时荧光定量PCR、ELISA、骨髓免疫组化等实验方法检测动员后0、3、5天的小鼠骨髓和周血标本，检测成骨细胞特异性基质ocn、Ang1、SDF-1在动员前后的变化，最后应用流式细胞术测量通过大剂量PTH抑制骨髓成骨细胞后小鼠外周血干细胞动员的变化。借以探讨成骨细胞在G-CSF介导的HSC动员过程中的作用及其机制。结果：1.应用干细胞动员及G-CSF可导致小鼠骨髓成骨细胞数量和活性减少：小鼠成骨细胞在干细胞G-CSF动员过程中的HE染色形态学改变可以看到动员前骨髓呈卵圆形连续性沿骨皮质排列，动员效应产生后细胞形态逐渐变为梭形且数量稀疏、变少。ocn免疫组化中也呈现出跟HE染色一致性的改变。通过计数发现，正常小鼠每个骨表面成骨细胞数量(OB.N/B.s)分别为:14.83士0.23(动员前)和6.78士0.17(动员后第5天)(p＜0.01)。动员3天和5天成骨细胞活性明显下降，成骨细胞特异性基因ocn在动员过程中的0、3、5天分别为63.01±10.76、35.40±6.06和17.57±1.97，动员第3、5天ocn相对表达量显著低于动员前（n=5，p＜0.01）。2.G-CSF动员后骨髓SDF-1、Ang1表达变化：Ang1基因相对表达量在动员前、动员第3天、动员第5天分别为4.28±1.30、2.28±0.39和1.27±0.34，动员第5天Ang1相对表达量显著低于动员前（n=5，p=0.015）。SDF-1基因相对表达量在动员前、动员第3天、动员第5天分别为4.41±1.56、1.37±0.54和0.96±0.28，动员第3、5天Ang1相对表达量显著低于动员前（n=5，P＜0.01），SDF-1基因相对表达量动员后也显著低于动员前（n=5，p＜0.01）。骨髓标本的ELISA实验中Ang1蛋白结果显示动员0天、动员3天和5天Ang1蛋白水平分别为11.89±1.62ng/m1、2.29±0.92ng/m1、0.62±0.17ng/ml，动员前比较动员第3、5天有显著性差异（n=5，P＜0.01）。3.G-CSF动员后外周血ocn、Ang1蛋白水平变化：外周血ocn蛋白表达在动员过程表达量下降，在动员过程中的0、3、5天分别为21.13±3.14ng/m1,10.76±2.18ng/m1,10.32±1.78ng/ml，动员前比较动员第5天有显著性差异（n=5，P＜0.01）。外周血Ang1蛋白结果显示动员0天、动员3天和5天Ang1蛋白水平分别为2242.4±625.07ng/m1、1283.3±584.75ng/m1、966.6±299.06ng/ml，动员前比较动员第5天有显著性差异（n=5，P=0.020）。4.G-CSF联合PTH进行干细胞动员后外周血LSK细胞的水平变化：大剂量PTH抑制成骨细胞龛后小鼠外周血干细胞动员后0、3、5天外周血干细胞的百分比量分别由原来的0.54±0.11%、2.20±0.34%和2.83±0.37%升高为1.70±0.46%、3.19±0.43%和4.32±0.49（%n=5，各天数相比P<0.01）。结论：在干细胞动员过程中成骨细胞数量和功能的下降导致了动员的发生。成骨细胞可能可以作为干细胞动员的作用靶点来加强动员效率。

关键词：干细胞动员成骨细胞 ocn G-CSF Ang1 SDF-1

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BMSCs联合髓芯减压对犬股骨头内CD34和ocn表达的影响

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上海畜牧兽医通讯 2019年第6期 14-19页

作者：贺闪闪曾皓然冯雪倩熊骏仪马林凤苟金花唐静陶瑞罗军蔡彬郑淇月郑小波西南大学动物科学学院重庆荣昌402460 天津农学院动物科学与动物医学学院 300380

本试验通过免疫组化方法检测CD34和ocn的表达情况,初步探讨BM SCs联合髓芯减压治疗犬早期股骨头坏死的可能机制.随机挑选6条健康试验犬为正常组(A组),再选取建立犬早期股骨头坏死模型的18条试验犬随机分为3组,即模型空白治疗组(B组)、... 详细信息

本试验通过免疫组化方法检测CD34和ocn的表达情况,初步探讨BM SCs联合髓芯减压治疗犬早期股骨头坏死的可能机制.随机挑选6条健康试验犬为正常组(A组),再选取建立犬早期股骨头坏死模型的18条试验犬随机分为3组,即模型空白治疗组(B组)、髓芯减压术组(C组)、BM SCs联合髓芯减压组(D组);在行髓芯减压术后第2周和第4周后,通过免疫组织化学方法比较4组试验犬股骨头内CD34和ocn的积分光密度值(IOD).B组CD34的IOD在术后2周和4周与A组比较均极显著降低(Pocn的IOD在术后2周和4周与A组比较均极显著降低(Pocn的IOD值在术后第4周与正常组和髓芯减压组比较均极显著升高(Pocn的表达,推测该方法可能通过恢复造血组织和重建骨质来治疗犬早期股骨头坏死.

关键词：犬早期股骨头坏死 BMSCs CD34 ocn

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下颌单颗后牙即刻种植负载后种植体周围龈沟液TNF-α、IL-1β、TGFα及ocn的变化及意义

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四川医学 2018年第8期39卷 904-908页

作者：任小华韩红娟吴浩电子科技大学附属医院.四川省人民医院口腔科四川成都610072

目的本研究旨在研究下颌单颗后牙进行即刻种植负载后种植体周围龈沟液中TNF-α,IL-1β,TGFα,ocn的变化及意义,以期从分子水平比较种植体植入后周围组织随时间发生的微观变化。方法本研究共纳入40名患者(男22例,女18例),共植入40枚种植... 详细信息

目的本研究旨在研究下颌单颗后牙进行即刻种植负载后种植体周围龈沟液中TNF-α,IL-1β,TGFα,ocn的变化及意义,以期从分子水平比较种植体植入后周围组织随时间发生的微观变化。方法本研究共纳入40名患者(男22例,女18例),共植入40枚种植体,植入3d后对种植体进行负载,采集7、15、30、60、90d种植体周围龈沟液,并采用酶联免疫吸附法对其进行分析。结果 TNF-α、IL-1β在7d时高表达(Pocn逐渐增高,15d后释放加快(Pocn在60d后水平皆趋于稳定(P> 0.05)。结论 60d后种植体周围龈沟液中TNF-α,IL-1β,TGFα,ocn的浓度趋于平稳,表明机体已适应前期的负载,提示即刻负载相比于延期负载,在不影响种植体骨结合的情况下,可以缩短患者永久冠修复的时间。

关键词：种植体周围龈沟液 TNF-α IL-1β TGFα ocn

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上海进展：从SCN到ocn

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世界宽带网络 2007年第11期14卷 8-8页

4年前的8月，本刊曾经开辟过栏目“数字电视在上海”，引起读者的极大兴趣。该系列文章比较系统地介绍了正式收费运营后的上海数字电视业务情况,包括当时比较关注的机顶盒规范、监测管理平台、CA加密、节目管理和交互应用等。这对于当... 详细信息

4年前的8月，本刊曾经开辟过栏目“数字电视在上海”，引起读者的极大兴趣。该系列文章比较系统地介绍了正式收费运营后的上海数字电视业务情况,包括当时比较关注的机顶盒规范、监测管理平台、CA加密、节目管理和交互应用等。这对于当时正在进行数字电视业务的各地运营商给予了很大的经验支持。

关键词：上海 ocn SCN 数字电视业务管理平台交互应用节目管理运营商

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Force10 ocn框架助力数据中心释放潜力

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通讯世界 2011年第6期17卷 51-51页

Force10网络公司日前宣布推出其“开放式云网络框架”（Open Cloud Networking，ocn），该框架为基于开放式架构、开放式自动化和开放式生态系统的云数据中心及传统数据中心提供了新的愿景。Force10 ocn框架的推出为数据中心的建设、扩... 详细信息

Force10网络公司日前宣布推出其“开放式云网络框架”（Open Cloud Networking，ocn），该框架为基于开放式架构、开放式自动化和开放式生态系统的云数据中心及传统数据中心提供了新的愿景。Force10 ocn框架的推出为数据中心的建设、扩展以及管理提供了全新的途径，通过采用新一代集中式和分布式核心交换机、柜顶式开放式云交换机以及自动化软件，为下一代数据中心提供了更加强大的新性能。

关键词：数据中心网络框架 ocn Force10网络公司开放式架构核心交换机自动化软件生态系统

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Recombinant amelogenin regulates the bioactivity of mouse cementoblasts in vitro

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International Journal of Oral Science 2018年第2期10卷 117-126页

作者： Sema S.Hakki S.Buket Bozkurt Emre Türkay Michel Dard Nuhan Purali Werner Gotz Department of Periodontology Faculty of DentistrySelcuk University Research Center of Dental Faculty Selcuk University Department of Orthodontics Oral Biology LaboratoryFaculty of DentistryUniversity of Bonn Department of Periodontology and Implant Dentistry College of DentistryNew York University Department of Biophysics Faculty of MedicineHacettepe University

Amelogenin（AMG） is a cell adhesion molecule that has an important role in the mineralization of enamel and regulates events during dental development and root formation. The purpose of the present study was to investigate the effects of recombinant human AMG（rhAMG） on mineralized tissue-associated genes in cementoblasts. Immortalized mouse cementoblasts（OCCM-30）were treated with different concentrations（0.1, 1, 10, 100, 1 000, 10 000, 100 000 ng · mL^-1） of recombinant human AMG（rhAMG）and analyzed for proliferation, mineralization and mRNA expression of bone sialoprotein（BSP）, osteocalcin（ocn）, collagen type I（COL I）, osteopontin（OPN）, runt-related transcription factor 2（Runx2）, cementum attachment protein（CAP）, and alkaline phosphatase（ALP） genes using quantitative RT-PCR. The dose response of rhAMG was evaluated using a real-time cell *** RNA was isolated on day 3, and cell mineralization was assessed using von Kossa staining on day 8. COL I, OPN and lysosomalassociated membrane protein-1（LAMP-1）, which is a cell surface binding site for amelogenin, were evaluated using immunocytochemistry. F-actin bundles were imaged using confocal microscopy. rhAMG at a concentration of 100 000 ng · mL^-1 increased cell proliferation after 72 h compared to the other concentrations and the untreated control group. rhAMG（100 000 ng · mL^-1） upregulated BSP and ocn mRNA expression levels eightfold and fivefold, respectively. rhAMG at a concentration of 100 000 ng · mL^-1 remarkably enhanced LAMP-1 staining in cementoblasts. Increased numbers of mineralized nodules were observed at concentrations of 10 000 and 100 000 ng · mL^-1 rhAMG. The present data suggest that rhAMG is a potent regulator of gene expression in cementoblasts and support the potential application of rhAMG in therapies aimed at fast regeneration of damaged periodontal tissue.

关键词： AMG Recombinant amelogenin regulates the bioactivity of mouse cementoblasts in vitro ocn

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果蝇ocnus和Dany基因协同影响精子发生的研究

果蝇Ocnus和Dany基因协同影响精子发生的研究

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作者：乔俊雪华中师范大学

学位级别：硕士

果蝇(Drosophila melanogaster)作为一种模式生物,在遗传学、发育生物学、神经生物学及分子生物学领域都做出了重要的贡献。果蝇的基因操作简便易行,而且大约75%的人类基因都可以在果蝇中找到同源基因,近几年来,果蝇被越来越多地用于研... 详细信息

果蝇(Drosophila melanogaster)作为一种模式生物,在遗传学、发育生物学、神经生物学及分子生物学领域都做出了重要的贡献。果蝇的基因操作简便易行,而且大约75%的人类基因都可以在果蝇中找到同源基因,近几年来,果蝇被越来越多地用于研究人类遗传病的发病机制和药物筛选。本课题组前期研究表明,ocnus(ocn)或distal antenna-young(dany)基因敲降之后均导致果蝇精巢发育异常,二者敲降还引起一些相同的精巢高表达或特异表达的基因表达量下调。这提示,ocn和dany基因可能在精子发生中协同起作用,但具体的作用机制还需进一步探究。为了探究ocn和dany基因过量表达后是否对精子发生产生影响,我们选用nosGal4驱动ocn和dany在雄蝇性腺中过表达,检测后代的胚胎孵化率,并采用免疫组化、qRT-PCR等技术检测精子发生过程和相关基因的表达情况。结果显示,ocn或dany基因在精巢过表达的雄蝇与正常雌蝇交配后,子代孵化率分别达到了 62.44±4.49%和69.08±0.80%,精巢虽然形态有点异常,但储精囊中有成熟的精子。ocn和dany基因过量表达对一些减数分裂抑制基因的表达没有影响,但是使精巢高表达或特异性表达基因的表达水平上调。这些结果表明,ocn和dany基因过表达虽然会使精巢形态发生异常,但是生殖细胞可以继续发育,能够产生正常的精子,进行受精,使胚胎发育。为了探究ocn和dany是否存在相互作用,我们采用qRT-PCR、Western blot等技术分别检测了敲降组和过表达组中ocn和dany的表达情况。结果显示,在转录水平,ocn过表达使dany上调,dany过表达引起ocn上调;在翻译水平,ocn敲降使Dany表达量极显著下调,ocn在dany敲降精巢中表达量极显著降低,在过表达组中也显示类似的结果,这些结果表明,ocn和dany在转录、翻译水平存在相互调控。为了探究ocn和Dany是否存在蛋白相互作用,我们在果蝇S2细胞中表达荧光标记的ocn和Dany蛋白观察定位,并采用酵母双杂交法进行点对点验证。结果显示,ocn和Dany均在细胞核中出现荧光信号,表明二者可以共定位于细胞核中。酵母双杂交结果显示,ocn和Dany存在相互作用。这些结果表明ocn和Dany可能在细胞核中存在相互作用。为了进一步探究ocn和dany基因是否可以相互作用,我们选用遗传学方法得到杂交后代,检测了后代的胚胎孵化率,取其精巢分别做了免疫组化染色和表达量的检测。结果显示,相对于dany敲降导致雄性不育(子代胚胎孵化率为0)而言,dany敲降同时ocn过表达(nosGal4>dany-hp,UAS-ocn)雄蝇部分可育,与正常雌蝇交配后胚胎孵化率为45.77±3.35%,且dany基因的表达(转录和翻译)水平得到显著恢复(pocn基因的过量表达可以部分挽救dany基因敲降引起的雄性不育。我们还用UASt-dany品系(由于杂交筛选的原因没法用前面的dany过表达品系)做了dany过表达能否挽救ocn敲降引起的雄性生殖缺陷的实验。结果发现,UASt-dany不能挽救ocn敲降引起的雄性生殖缺陷表型,进一步研究发现,UASt-dany品系不能在nosGal4驱动下实现过量表达。因此dany过表达能否挽救ocn敲降引起的雄性低育性表型,有待更换果蝇品系做进一步的验证。本研究中,我们发现,ocn和dany基因过表达后对精子发生没有严重影响,精巢能够产生成熟的、能繁育后代的精子。ocn和dany基因的表达均能对下游精巢高表达或特异性表达基因起调控作用,ocn和Dany蛋白均在细胞核中表达,酵母双杂交结果表明二者存在相互作用。ocn基因的过表达可以部分挽救dany基因敲降引起的雄性不育。这些结果表明,ocn和dany作为精巢特异性表达基因,能够相互调控,在果蝇的精子发生中发挥重要的作用。本研究不仅希望在精子发生过程中发现一条新的调控途径,加深对生殖细胞发生调控机制和受精过程的认识,而且由于果蝇中的许多基因都能在人类中找到同源基因,因此本研究还可为人类精子发生相关疾病的研究提供有价值的线索和启示,具有重要的理论意义和潜在应用价值。

关键词：果蝇 ocn dany 雄性生殖酵母双杂交

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Science China Life Sciences 2015年第4期 367-367页

Figure S1 Serum osteocalcin levels of wild-type mice were untouched after high Pi/Ca diet *** of RD WT(n=7)and HPD WT(n=14)was collected and isolated after 5 weeks of phosphorus and calcium *** ocn levels were *** are... 详细信息

关键词： life link Supporting Information Figure WT ocn RNAi

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P2X7受体对牙周膜干细胞成骨分化的作用

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中国组织工程研究 2015年第6期19卷 861-867页

作者：孙亚男魏建敏孙薇武俊杰吴礼安解放军第四军医大学口腔医院儿童口腔科军事口腔医学国家重点实验室陕西省西安市710032

背景:研究影响牙周膜干细胞成骨分化的相关离子通道。目的:初步观察P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用。方法:分离培养人牙周膜干细胞,分为4组,分别添加成骨诱导液和100 nmol/L三磷酸腺苷、成骨诱导液、100 nmol/L三磷酸腺苷及... 详细信息

背景:研究影响牙周膜干细胞成骨分化的相关离子通道。目的:初步观察P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用。方法:分离培养人牙周膜干细胞,分为4组,分别添加成骨诱导液和100 nmol/L三磷酸腺苷、成骨诱导液、100 nmol/L三磷酸腺苷及普通培养基培养,于成骨诱导7,14 d,利用茜素红染色检测成骨效果,q RT-PCR,Western blot检测ocn、Runx2以及P2X7受体的表达。结果与结论:茜素红染色显示成骨诱导液+三磷酸腺苷组牙周膜干细胞的成骨效果在7 d时显著好于成骨诱导液组,但在14 d时成骨诱导液组成骨效果显著好于成骨诱导液+三磷酸腺苷组(Pocn mR NA的表达达到峰值,而14 d时明显降低(P<0.05)。成骨诱导7 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体mR NA的表达量明显高于三磷酸腺苷组(P<0.05),成骨诱导液组和对照组未见P2X7受体mR NA的表达,成骨诱导14 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组表达量下降,明显低于三磷酸腺苷组,差异有显著性意义(P<0.05)。Western blot结果显示,成骨诱导7 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体的表达达到峰值,高于三磷酸腺苷组,而成骨诱导液组表达量低,对照组几乎没有表达;成骨诱导14 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体的表达比7 d时明显下降,而三磷酸腺苷组P2X7受体的表达比7 d时有所增加。结果表明外源性三磷酸腺苷可在牙周膜干细胞成骨诱导前7 d明显提高成骨效果,但在7 d后,抑制成骨诱导效果,三磷酸腺苷可以激活牙周膜干细胞P2X7受体表达,且P2X7受体的表达与牙周膜干细胞的成骨效果正相关。

关键词：干细胞牙周膜受体,嘌呤能P2X7 腺苷三磷酸诱导牙周膜干细胞培养成骨分化 P2X7受体 RUNX2 ocn 国家自然科学基金

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Osteocalcin overexpression enhanced the endothelial progenitor cell function through PI3K/eNOS signaling pathway

Osteocalcin overexpression enhanced the endothelial progenit...

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第十一届海峡两岸心血管科学研讨会、2017年全国心脑血管药理学术会议、中国卒中学会第一次新药研讨会

作者： Yi Ming Li Jing Liu Huirong Capital Medical University Xuanwu Hospital of Capital Medical University

BACKGROUND:Osteocalcin(ocn) is a calcium-binding protein secreted by osteoblast,playing an important role in the regulation of bone *** studies have shown that some of the circulating endothelial progenitor cells(EPCs) expressed ocn and participated in vascular *** found that the percentage of ocn+EPCs in EPCs from peripheral blood were increased in

关键词： Osteocalcin overexpression enhanced the endothelial progenitor cell function through PI3K/eNOS signaling pathway ocn

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