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大肠杆菌o-抗原血清型鉴定研究进展

中国人兽共患病学报 2016年第10期32卷 928-933页

作者：刘璨颖张济培王丙云佛山科学技术学院佛山528231

大肠杆菌在一定条件下能引发宿主疾病,其表面o-抗原与毒力有关。o-抗原的化学组成和结构具有高度多样性,并且o-抗原血清型种类与大肠杆菌致病性有一定联系。因此,大肠杆菌o-抗原血清型鉴定对流行病学调查,防御和控制致病性大肠杆菌病有... 详细信息

大肠杆菌在一定条件下能引发宿主疾病,其表面o-抗原与毒力有关。o-抗原的化学组成和结构具有高度多样性,并且o-抗原血清型种类与大肠杆菌致病性有一定联系。因此,大肠杆菌o-抗原血清型鉴定对流行病学调查,防御和控制致病性大肠杆菌病有重要意义。传统的血清学分型方法耗时长、费用高、准确度不理想。随着科学技术的发展,研究者对大肠杆菌196种o-抗原基因簇进行了破译,比较分析了不同o-抗原基因簇序列,并针对基因簇中特异性DNA序列设计分子标记,运用PCR方法对o-抗原血清型进行分型,其中包括一般PCR、多重PCR、实时PCR、DNA芯片和微球悬浮列阵法。此外,还有rbf-限制性片段长度多态性分析法,磁性微球免疫分析法和基于全基因组序列预测法,这些方法丰富了o-抗原血清型鉴定方法,弥补了传统血清学分型方法的不足。本文概述了o-抗原合成基因簇序列和o-抗原血清型鉴定方法相关研究进展。

关键词：大肠杆菌 o-抗原血清型分型

大肠杆菌o96 o-抗原基因簇的破译和特异基因的鉴定

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南开大学学报（自然科学版） 2005年第2期38卷 54-59页

作者：夏秋雨王威韩巍青冯露王磊耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

大肠杆菌o96血清型的大肠杆菌近年来频繁地出现于分离到的致病菌株中,在发展中国家和发达国家均有发现,有造成爆发性流行的可能.本文利用鸟枪法对大肠杆菌(o96o-抗原基因族进行测序,序列全长9415bp,用生物信息学的方法进行序列分析,共发... 详细信息

大肠杆菌o96血清型的大肠杆菌近年来频繁地出现于分离到的致病菌株中,在发展中国家和发达国家均有发现,有造成爆发性流行的可能.本文利用鸟枪法对大肠杆菌(o96o-抗原基因族进行测序,序列全长9415bp,用生物信息学的方法进行序列分析,共发现7个基因,分别是:吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因(glf),o-抗原转运酶基因(wzx),o-抗原聚合酶基因(wzy)和糖基转移酶基因(4个).本文分析了大肠杆菌o96和K12(o16)的0-抗原基因族中吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因和o-抗原转运酶基因的进化关系,确定了吡喃型UDP-半乳糖变位酶的基序;用PCR的方法筛选出了2个针对大肠杆菌o96的特异基因,可以用于基因芯片或PCR方法快速检测大肠杆菌o96.

关键词：大肠杆菌 o-抗原特异基因基因簇糖基转移酶基因鉴定破译抗原基因发展中国家生物信息学聚合酶基因 PCR方法半乳糖致病菌株发达国家序列分析进化关系快速检测基因芯片血清型鸟枪法爆发性吡喃变位酶

表达肠出血性大肠杆菌o157 o-抗原重组减毒沙门菌的构建及其免疫效果评价

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中国预防兽医学报 2024年第12期46卷 1261-1269页

作者：陈歆丹张晓荟高宇杰王温馨葛同鑫宋厚辉韩月程昌勇浙江农林大学动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)o157 o-抗原的重组减毒鼠伤寒沙门菌,本研究以EHEC o157基因组为模板,采用PCR分3段扩增o157 o-抗原基因簇(galF~gnd),并采用同源重组技术将EHEC o157 o-抗原基因簇与含asd基因的pSL2161线性化片段重组... 详细信息

为构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)o157 o-抗原的重组减毒鼠伤寒沙门菌,本研究以EHEC o157基因组为模板,采用PCR分3段扩增o157 o-抗原基因簇(galF~gnd),并采用同源重组技术将EHEC o157 o-抗原基因簇与含asd基因的pSL2161线性化片段重组,构建表达EHEC o157 o-抗原的重组质粒pSL2161-o157并经PCR与测序鉴定正确后电转化4基因缺失沙门菌ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP,构建表达EHEC o157 o-抗原的重组减毒沙门菌o157-ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP,经PCR及测序鉴定。采用裂解法粗提野生型鼠伤寒沙门菌ATCC14028、EHEC o157与构建的重组减毒沙门菌种中的脂多糖(LPS),采用western blot鉴定上述3种菌中的LPS与EHEC o157 o-因子血清的反应性,并根据该重组菌与野生菌株ATCC14028的oD600nm值测定二者的体外生长能力。PCR与测序鉴定结果显示,重组减毒沙门菌正确构建。Western blot结果显示,重组减毒沙门菌和野生型EHEC o157的粗提LPS均能够与EHEC o157 o-因子血清反应,出现LPS特异性的梯状条带,ATCC14028株与o157 o-因子血清无反应条带。生长曲线结果显示,重组减毒沙门菌与ATCC14028株的生长速度无明显差异。表明EHEC o157 o-抗原基因簇在4基因缺失沙门菌中获得了表达,且该表达与4基因的缺失均不影响沙门菌的体外生长能力。采用首免-加强免疫策略对ICR小鼠分别口服免疫重组减毒沙门菌和4基因缺失沙门菌,二免后13 d采用间接ELISA检测各组小鼠血清中LPS的IgG抗体水平,利用荧光定量PCR(qPCR)检测各组小鼠脾细胞中细胞因子的转录水平。二免后14 d采用10 LD_(50)的EHEC o157攻毒,15 d内观察并记录各组小鼠的临床症状与死亡率,评估该重组菌株对免疫小鼠的保护效果。ELISA与q PCR结果显示,与阴性对照组和4基因缺失沙门菌免疫组相比,重组减毒沙门菌诱导小鼠产生的针对EHEC o157与ATCC14028 LPS的IgG抗体水平均极显著升高(Po157-ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP能够表达异源EHEC o157 o-抗原,可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答,并对小鼠提供一定的免疫保护力。这为重组减毒沙门菌用于免疫及预防肠出血性大肠杆菌o157的感染及开发大肠杆菌与沙门菌二联疫苗提供了科学参考依据。

关键词：减毒沙门菌疫苗递呈载体 o-抗原肠出血性大肠杆菌o157 免疫保护

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犊牛腹泻大肠埃希菌o-抗原血清型鉴定

中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 55-58页

作者：蔺旭光马德慧康桂英李佳怡牛天明刘锴内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000 内蒙古自治区肉牛疾病防控工程技术研究中心内蒙古通辽028000 通辽市扎鲁特旗园林管理局内蒙古通辽028000

目的对犊牛腹泻大肠埃希菌o-抗原血清型进行鉴定。方法收集内蒙古部分地区牛场患犊牛腹泻病的犊牛直肠内容物或粪便共165份,经细菌分离培养、动物致病性试验及16s RNA PCR检测,筛选出致病性大肠埃希菌,并进行o-抗原血清型鉴定。结果分... 详细信息

目的对犊牛腹泻大肠埃希菌o-抗原血清型进行鉴定。方法收集内蒙古部分地区牛场患犊牛腹泻病的犊牛直肠内容物或粪便共165份,经细菌分离培养、动物致病性试验及16s RNA PCR检测,筛选出致病性大肠埃希菌,并进行o-抗原血清型鉴定。结果分离的大肠埃希菌共165株,115株有致病性,除7株未能确定分型及3株自凝集外,其余105株鉴定为o-抗原血清型。结论大肠埃希菌o-抗原血清型鉴定对流行病学调查及疾病预防均有重要意义。

关键词：犊牛腹泻大肠埃希菌 o-抗原血清型流行病学调查

水稻条斑病细菌(Xanthomolias oryzae ***)Wzt基因参与LPS o-抗原合成和影响细菌致病性

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自然科学进展 2005年第10期15卷 1195-1203页

作者：龙菊英张佳环王金生南京农业大学农业部病虫监测重点开放实验室南京210095

ABC-转运系统将同质o-抗原多糖链从细胞质内膜转运到细胞周质空间合成脂多糖(LPS)。通过功能互补和亚克隆序列分析在X. oryzae pv. oryzicola的基因组文库中发现了一个Wzt基因, 该基因编码产物是运输o-抗原的ABC-转运系统的疏水组成部分... 详细信息

ABC-转运系统将同质o-抗原多糖链从细胞质内膜转运到细胞周质空间合成脂多糖(LPS)。通过功能互补和亚克隆序列分析在X. oryzae pv. oryzicola的基因组文库中发现了一个Wzt基因, 该基因编码产物是运输o-抗原的ABC-转运系统的疏水组成部分,为ATP-结合蛋白。为区别基因来源将该基因命名为Wzt_(Xooc). Wzt_(Xooc)编码一个35.9 ku的蛋白质。通过分析发现,Wzt_(Xooc)与数据库中的其他细菌包括水稻白叶枯病菌的ABC-转运系统的ATP结合蛋白质不同。在Wzt_(Xooc)序列中仅发现ATP-结合蛋白中4个保守基序的3个,没有发现ATP-结合位点Walker A(ATP/GTP binding site motif A)。通过基因插入突变得到Wzt_(Xooc)基因突变体Mwzt。LPS分析表明:由于该基因突变使o- 抗原链不能转运通过细胞质膜,不能形成完整的LPS分子,突变体菌落表面丧失了产生大量胞外多糖的能力;突变细菌不产生鞭毛,丧失了游动性和生物膜形成的能力。重要的是突变体在水稻上的繁殖能力和致病性明显下降,证明Wzt_(Xooc)基因与LPS合成及致病性有关。

关键词： Xanthomonas oryzae pv.oryzicola ABC转运系统LPS致病性水稻白叶枯病菌基因组文库 o-抗原 LPS 致病性细菌

山东省鸡源致病性大肠杆菌o-抗原混合血清型分析

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中国兽医学报 2017年第9期37卷 1676-1679页

作者：冯敏燕林树乾房玉波李桂明杨世发赵增成黄中利傅剑商晶宋敏训山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023 山东吴泰科技药业有限公司山东济南250023 山东省沂源县动物卫生监督所山东沂源256100

采用抗原抗体凝集反应,用常见的18种o因子血清测定从临床上分离鉴定的182株大肠杆菌的o抗原血清型。结果显示,山东地区鸡源大肠杆菌的优势血清型为o24,o15,o2,o127,o1,o18,o78,占检测菌株的41.21%,同时出现大量混合血清型,占检测菌株的2... 详细信息

采用抗原抗体凝集反应,用常见的18种o因子血清测定从临床上分离鉴定的182株大肠杆菌的o抗原血清型。结果显示,山东地区鸡源大肠杆菌的优势血清型为o24,o15,o2,o127,o1,o18,o78,占检测菌株的41.21%,同时出现大量混合血清型,占检测菌株的24.18%。这是国内首次报道检测到大量的大肠杆菌o因子混合血清型,印证了国外研究人员对o-AGC核苷酸序列研究的结果,有助于最终对o抗原血清型进行更加准确的分类以及大肠杆菌疫苗的研制。

关键词：大肠杆菌 o-抗原交叉反应混合血清型

Burkholderia ambifaria菌脂多糖相关o-抗原二糖重复片段及其寡聚体的合成研究

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Burkholderia ambifaria菌脂多糖相关O-抗原二糖重复片段及其寡聚...

作者：王东岳山东大学

学位级别：硕士

洋葱伯克霍尔德复合菌群（Burkholderia cepacia complex,Bcc）是由一组基因型不同而表型相似的细菌构成,并且可以广泛地存在于自然环境中,不仅能降解环境污染物还能感染植物和人体。其中,Bcc菌作为人体条件致病菌而广受关注。它可诱发... 详细信息

洋葱伯克霍尔德复合菌群（Burkholderia cepacia complex,Bcc）是由一组基因型不同而表型相似的细菌构成,并且可以广泛地存在于自然环境中,不仅能降解环境污染物还能感染植物和人体。其中,Bcc菌作为人体条件致病菌而广受关注。它可诱发易感人群（如肺部囊性纤维化患者或慢性肉芽肿病的患者）产生不可控的坏死性肺炎和败血症,通常具有较高的死亡率。此外,Bcc还具有较高的耐药性,以及不明确的致病机制,使人群感染后难以治愈。因此,我们需要寻找和发展新的治疗和预防方法,用于Bcc感染的治疗。研究发现,细菌脂多糖相关o-抗原可以作为用于疫苗开发的抗原靶标。但这类多糖抗原属于非T细胞依赖性抗原,只能与B细胞作用,引起一个短暂的、亲和力较低的IgM抗体应答,并且在整个免疫过程中没有T细胞的参与,不会形成免疫记忆,因此对于2岁以下儿童、老人以及免疫缺陷者的免疫保护效果差。人们发现多糖-蛋白缀合物疫苗能够很好地解决上述问题。该类疫苗一般由细菌表面多糖抗原与具有免疫原性的载体蛋白如破伤风类毒素、白喉类毒素等共价缀合而成,可以诱导机体产生高亲和力的IgG抗体,且通常具有免疫记忆。目前,已上市的多糖-蛋白缀合疫苗有肺炎球菌多糖结合疫苗、流感嗜血杆菌b型（Haeophilus infuenzaetype b,Hib）多糖结合疫苗、脑膜炎球菌多糖结合疫苗等。它们都已被证实可以产生免疫记忆:当同种抗原再次出现时,能快速应答生成高亲和力的IgG抗体,同时生成能够存活更长时间的记忆B细胞。Bcc脂多糖的o-抗原是理想的候选疫苗靶标之一,但是来自于细菌表面的o-抗原具有结构复杂、成分不均一、结构不明确的特点,因而限制了 Bcc疫苗的发展。近年来随着化学合成技术的完善,科学家们已经运用化学的方法来合成多种纯度较高、成分均一和结构明确的寡糖分子（包括o-抗原）。因此,化学合成法已经成为糖抗原获取的一条新途径。本论文内容主要介绍Burkholderia ambaria菌脂多糖的o-抗原二糖重复片段及其寡聚体的合成。本论文所获得的不同长度的寡糖片段可以与具有免疫活性的载体蛋白或者载体小分子链接形成相应的糖缀合物,为后续各种生物免疫学研究提供材料,并且用于Burkholderia ambaria糖类疫苗的研究。主要包括以下两章内容:第一章对洋葱伯克霍尔德复合菌群的概况及其致病因子的研究现状以及抗药性等进行了简要介绍。第二章是基于Burkholderiaambifaria菌19182脂多糖相关o-抗原的二糖重复片段的结构,合成了二糖、四糖与六糖三个目标分子。其o-抗原的二糖重复片段是由D-鼠李糖以及6-脱氧-D-阿卓糖组成的。在目标产物中既存在α构型糖苷键,也存在β构型糖苷键。鉴于6-脱氧-阿卓糖的β构型糖苷键相对难以合成,同时为了优化合成步骤和提高总收率,我们首先设计合成β构型的二糖模块4,而后通过采用[2+2]和[2+2+2]的合成策略以α键的链接方式来构建目标四糖和六糖产物。为了提高二糖模块4合成产率以及β构型的立体选择性,我们在合成时选用了不同的溶剂以及不同的单糖供体6,并且在所有供体的3-o-位引入苯甲酰基,从而借助远程邻基参与反应来提高β构型糖苷键的构建。二糖模块4,即可以与叠氮丙醇反应,脱掉苯甲酰基得到二糖受体20,也可以作为供体来构建目标四糖2和六糖3。在合成过程中,我们同时也制备了相应的β键链接的副产物四糖2a和六糖3a。本章涉及的所有中间体化合物和目标化合物都通过核磁与质谱对其结构进行了确证。

关键词：洋葱伯克霍尔德复合菌群脂多糖 o-抗原寡糖化学合成

异源o-抗原重组鼠伤寒沙门菌疫苗候选株的构建及其免疫效果评价

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异源O-抗原重组鼠伤寒沙门菌疫苗候选株的构建及其免疫效果评价

作者：代勤龙四川农业大学

学位级别：硕士

沙门菌能够引起多种动物的胃肠道疾病,其包含多种流行性血清型。o-抗原是沙门菌的保护性抗原,其特异性抗体能够有效地清除细菌的感染。本研究通过异源表达o-抗原的策略,构建了三株表达纽波特沙门菌o-抗原的重组鼠伤寒沙门菌疫苗株,并在... 详细信息

沙门菌能够引起多种动物的胃肠道疾病,其包含多种流行性血清型。o-抗原是沙门菌的保护性抗原,其特异性抗体能够有效地清除细菌的感染。本研究通过异源表达o-抗原的策略,构建了三株表达纽波特沙门菌o-抗原的重组鼠伤寒沙门菌疫苗株,并在小鼠模型上评估了这些重组疫苗株的免疫原性和免疫保护效果。1鼠伤寒沙门菌重组株的构建利用Gibson组装法构建表达纽波特沙门菌o-抗原基因簇部分基因(wzx-wbaR-wbaL-wbaQ-wzy-wbaW-wbaZ)的表达质粒pCZ11,将其导入三株鼠伤寒沙门菌突变株SLT19(Δasd)、SLT20(ΔasdΔrfbN)、SLT22(ΔasdΔrfbN?pagL::TaraC P rfbN)中,得到三株鼠伤寒沙门菌重组株SLT19(pCZ11)、SLT20(pCZ11)、SLT22(pCZ11)。银染和免疫印迹实验表明,SLT19(pCZ11)能够同时表达同源鼠伤寒沙门菌和异源纽坡特沙门菌o-抗原;SLT20(pCZ11)只表达异源o-抗原;阿拉伯糖存在时,SLT22(pCZ11)能够同时表达两种o-抗原,阿拉伯糖不存在时,只表达异源o-抗原。以上结果表明,本研究成功的构建了三株表达异源o-抗原的重组株。2鼠伤寒沙门菌重组株生物学特性研究生物学特性实验结果显示,相较于野生株,三株重组株的运动力和对多黏菌素B的敏感性显著降低,但仍表现了和野生株相当的定殖能力和毒力。以上结果表明,异源o-抗原的表达降低了细菌的泳动能力和对多黏菌素B的敏感性,但并没有改变细菌的定殖能力和毒力。3疫苗株的免疫原性及交叉保护力评价分别缺失三株重组株的毒力基因crp,获得三株鼠伤寒沙门菌疫苗株SLT25(pCZ11)、SLT26(pCZ11)、SLT27(pCZ11)。分别在第一周和第七周对小鼠进行初次免疫和加强免疫,ELISA结果显示,在免疫后第七周,三个免疫组均产生了高水平的针对同源、异源LPS的血清IgG应答,其中SLT26(pCZ11)组产生的异源LPS抗体应答最为显著。血清补体杀菌实验证实,三个免疫组血清均能有效地杀伤鼠伤寒沙门菌和纽波特沙门菌,其中SLT26(pCZ11)组针对纽波特沙门菌的杀菌效果最显著。在鼠伤寒沙门菌攻毒后,三个免疫组组织器官中的细菌载量均显著降低,且三个疫苗株均提供100%的同源保护率。在纽波特沙门菌攻毒后,三个免疫组的细菌载量均显著降低,其中SLT26(pCZ11)、SLT27(pCZ11)组的细菌清除效果优于SLT25(pCZ11)组。与之对应,SLT25(pCZ11)疫苗株仅提供50%的异源保护率,SLT26(pCZ11)和SLT27(pCZ11)疫苗株能够提供100%的异源保护率。以上结果表明,本研究构建的SLT26(pCZ11)和SLT27(pCZ11)疫苗株可以用于预防鼠伤寒沙门菌和纽波特沙门菌,同时也表明,o-抗原有能力激发机体清除细菌,表明异源表达o-抗原是开发沙门菌二价疫苗的有效策略。

关键词：鼠伤寒沙门菌纽坡特沙门菌 o-抗原生物学特性免疫原性保护力

类鼻疽伯克霍尔德菌o-抗原在其感染致病中的作用研究

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类鼻疽伯克霍尔德菌O-抗原在其感染致病中的作用研究

作者：李骁中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei,***）简称类鼻疽菌,属革兰阴性杆菌,能引起一种称为类鼻疽（Melioidosis）的人兽共患传染病,临床治疗困难,病死率高达到40%。鉴于类鼻疽菌致死率高,耐药性强,且目前尚缺乏有效的疫苗,WH... 详细信息

类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei,***）简称类鼻疽菌,属革兰阴性杆菌,能引起一种称为类鼻疽（Melioidosis）的人兽共患传染病,临床治疗困难,病死率高达到40%。鉴于类鼻疽菌致死率高,耐药性强,且目前尚缺乏有效的疫苗,WHo将其列为B类生物恐怖剂（美国CDC列入Ⅰ类生物恐怖病原）。类鼻疽属热带医学疾病,随着国际交流日趋频繁,尤其是在国家“一带一路”、海南自贸区和国际旅游岛开发的大战略背景下,加强类鼻疽防控迫在眉睫。作为一种胞内感染病原菌,有效逃逸宿主细胞免疫清除是类鼻疽菌成功入侵宿主细胞并实现胞内生存达到感染和致病目的关键。类鼻疽菌拥有庞大的基因组（7.2 Mb）,可编码多种毒力因子,包括荚膜多糖、脂多糖、鞭毛蛋白、外膜蛋白、黏附分子、群体感应系统和蛋白分泌系统等。脂多糖（Lipopolysaccharys,LPS）作为类鼻疽菌外膜的主要组成部分,是该菌重要的毒力因子和表面抗原,在其感染、致病、耐药和共生等方面发挥重要作用。基于LPS中o-抗原结构类型,可以将类鼻疽菌分为A、B和B三种血清型,其中临床致病菌株以血清型A为主。研究表明类鼻疽菌LPS表现出一种负调控宿主先天免疫应答的特性,能干扰巨噬细胞活化,有助于类鼻疽菌逃避宿主的先天防御系统。类鼻疽菌LPS由脂质A、核心寡糖及特异性o-抗原三部分组成,其中脂质A是LPS内毒素活性的根源,其结构高度保守,通过与Toll样受体及宿主免疫系统中其他分子相互作用来发挥活性,引起强烈的炎症反应,甚至引发致死性休克。而o-抗原作为LPS中结构高度特异的部分,可以被机体先天免疫系统识别,参与补体介导的免疫应答,这提示我们o-抗原可能在类鼻疽菌LPS介导的先天免疫逃逸中起着不可忽视的作用,但具体功能尚不清楚。因此,本课题拟从o-抗原的生物合成出发,重点探讨其与类鼻疽菌生物学特性和毒力的关系,以期为类鼻疽有效防治提供新的靶标和策略。【研究目的】探讨类鼻疽菌o-抗原在其感染致病中的作用。【研究方法】（1）采用序列同源比对、PCR扩增以及脂多糖结构表征,鉴定类鼻疽菌BPC006的血清型,同时系统分析保藏于本实验室的我国类鼻疽主要流行区域菌株血清型分布情况;（2）根据生物信息学预测参与类鼻疽菌o-抗原生物合成关键基因的功能,利用同源重组技术构建敲除株,并通过银染以及GC-MS分析其在o-抗原生物合成过程中的具体功能;（3）通过革兰染色、透射电镜观察细菌形态与细胞壁超微结构;绘制生长曲线观察野生株和敲除株体外生长差异;采用荧光探针NPN以及碳氢吸附实验分析敲除株外膜通透性和表面疏水性的改变;结晶紫染色和扫描电镜评价敲除株和野生株的生物膜形成能力;微量肉汤稀释法检测敲除株与野生株对以细胞壁为作用靶点的抗菌药物的敏感性差异;（4）构建类鼻疽菌感染小鼠巨噬细胞模型,通过单菌落计数观察敲除株和野生株黏附、入侵以及胞内生存能力;通过乳酸脱氢酶释放实验检测敲除株和野生株的细胞毒性;（5）构建类鼻疽菌感染小鼠模型,通过绘制小鼠生存曲线、统计感染小鼠脏器细菌载量、鲎试剂检测血清内毒素含量、炎症芯片分析血清炎症因子表达情况、病理切片HE染色观察小鼠脏器病变及炎症浸润情况,综合评价o-抗原对类鼻疽菌毒力的影响。【研究结果】（1）类鼻疽菌BPC006的o-抗原结构为A型;本实验室保藏的类鼻疽菌主要为血清型A,占比91.2%;（2）类鼻疽菌o-抗原合成基因簇中wbiI和wbiG预测为编码特异性糖基异构酶的基因,ΔwbiI和ΔwbiG敲除株的脂多糖结构缺乏o-抗原,且单糖组成分析中未检测到6-dexo-Tal,说明二者很可能在dTDP-L-Rha向dTDP-L-6d Tal的异构过程发挥重要功能;（3）o-抗原结构的缺失导致类鼻疽菌细胞形态发生改变,细胞壁结构破损,通透性以及表面疏水性增加,生物膜形成能力减弱,对以细胞壁结构为靶点的万古霉素和头孢他啶敏感性显著增强;（4）与野生株相比,敲除株ΔwbiI和ΔwbiG的细胞黏附和入侵能力增强,但随着感染时间延长,其胞内生存和复制能力减弱,细胞毒性增强;同时动物感染实验结果显示:敲除株感染组小鼠生存时间显著缩短,小鼠脾脏和肺脏中的细菌载量增多,血清内毒素含量显著高于野生株感染组、血清炎症因子（IL-6,IL-17,IL-12p70等）和趋化因子（TARC,MCP-5,RANTES等）大量表达、脏器组织严重病变,炎性细胞大量浸润,表明o-抗原结构的缺失导致类鼻疽菌毒力明显增强。【主要结论】（1）wbiI和wbiG可能通过介导dTDP-L-Rha向dTDP-L-6d Tal的异构,在类鼻疽菌o-抗原生物合成过程中发挥关键作用;（2）类鼻疽菌o-抗原的合成通路受阻导致其脂多糖结构不完整,进而引起类鼻疽菌生理结构和生物学功能发

关键词：类鼻疽菌脂多糖 o-抗原结构鉴定生物学功能致病性