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Quantitation of DNA by nuclease p1 digestion and UpLC-MS/MS to assess binding efficiency of pyrrolobenzodiazepine

Journal of pharmaceutical Analysis 2020年第3期10卷 247-252页

作者： Yong Ma Buyun Chen Donglu Zhang Drug Metabolism and Disposition Genentech1 DNA WaySouth San FranciscoCA94080USA

Accurate DNA quantitation is a prerequisite in many biomedical and pharmaceutical *** we established a new DNA quantitation method by nuclease p1 digestion and UpLC-MS/MS *** fragments can be efficiently hydrolyzed to single deoxyribonucleotides by nuclease p1 in a short *** decent stabilities of all the four deoxyribonucleotides were confirmed under different *** monophosphate(dAMp)was selected as the surrogate for DNA quantitation because dAMp showed the highest sensitivity among the four deoxyribonucleotides in the UpLC-MS/MS *** linear range in DNA quantitation by this method is 1.2-5000 ng/*** the validation,the inter-day and intra-day accuracies were within 90%-110%,and the inter-day and intra-day precision were acceptable(RSD10%).The validated method was successfully applied to quantitate DNA isolated from tumors and organs of a mouse xenograft *** to the quantitation methods using UV absorbance,the reported method provides an enhanced sensitivity,and it allows for the accurate quantitation of isolated DNA with contamination of RNA and ribonucleotide.

关键词： nuclease p1 UpLC-MS/MS DNA quantitation DNA alkylation pyrrolobenzodiazepine(pBD-Dimer)

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