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Ngn2调节Nrf2/HO-1对脑缺血模型大鼠脑微结构、角质细胞活性的影响

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中国组织工程研究 2023年第33期27卷 5298-5303页

作者：王明盛崔焕喜崔红凯裴观辉李道广闫海清张平新乡医学院第一附属医院神经介入科河南省卫辉市453100 新乡医学院第一附属医院神经内科河南省卫辉市453100

背景:研究显示,血红素氧化酶1(heme oxidase-1,ho-1)在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用;核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid2-related factor2,nrf2)能减轻脑缺血再灌注损伤,其作用是通过调控下游抗氧化蛋白实现的;推测nrf2/H... 详细信息

背景:研究显示,血红素氧化酶1(heme oxidase-1,ho-1)在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用;核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid2-related factor2,nrf2)能减轻脑缺血再灌注损伤,其作用是通过调控下游抗氧化蛋白实现的;推测Nrf2/HO-1在脑部疾病中均有一定的调控作用。目的:探究神经源素2(neurogenin 2,Ngn2)通过调节Nrf2/HO-1对脑缺血大鼠脑微结构、角质细胞活性的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠55只,随机取10只为健康组不进行干预;其余大鼠建立脑缺血模型,将建模成功的40只大鼠随机分为4组:其中模型组大鼠脑内注射生理盐水;Ngn2组大鼠脑内注射Ngn210 mg/kg;Nrf2/HO-1组脑内注射ho-1及nrf2激动剂莱菔硫烷各10 mg/kg;联合调节组脑内注射Ngn2并联合Nrf2/HO-1组用药,均连续给药3 d。分数各向异性图像观察脑微结构,苏木精-伊红染色观察脑组织的病理形态,TUNEL法检测神经胶质细胞凋亡,免疫印迹和PCR分别检测nrf2、ho-1的蛋白及mRNA表达。结果与结论:(1)与健康组比较,模型组大鼠脑组织中梗死灶周围皮质、梗死核心相对分数各向异性值表达较低(PNrf2/HO-1组上述表达升高(PNrf2/HO-1组(PNrf2/HO-1组损伤侧神经元好转,仍见神经细胞缺失紊乱及细胞黏附;联合调节组脑组织神经细胞坏死减轻,浸润改善;(3)与健康组比较,模型组大鼠神经胶质细胞凋亡较高(PNrf2/HO-1组神经胶质细胞凋亡降低(PNrf2/HO-1组(Pnrf2、ho-1的蛋白和mRNA表达较低(PNrf2/HO-1组Ngn2 mRNA及nrf2、ho-1的蛋白和mRNA表达升高(Pnrf2、ho-1的蛋白和m RNA表达高于Ngn2组及Nrf2/HO-1组(PNrf2/HO-1对脑缺血大鼠产生保护作用,其机制可能与改善脑微结构、角质细胞活性以及增强nrf2、ho-1表达等具有一定相关性。

关键词：脑缺血 Ngn2基因核因子E2相关因子2 血红素氧化酶1 Nrf2/HO-1 脑微结构角质细胞活性

P38γ通过Nrf2/HO-1信号通路调节四氯化碳诱导的急性肝损伤

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P38γ通过Nrf2/HO-1信号通路调节四氯化碳诱导的急性肝损伤

作者：王淑贤安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:急性肝损伤(ALI),又称急性肝衰竭(ALF),是指一类由各种原因所导致的严重肝损伤疾病,预后不良。轻度急性肝损伤可逐渐自愈,但也会转变成慢性肝损伤,进而引起肝纤维化、肝硬化或肝癌,而急性损伤极其严重时则可发展为急性肝衰竭,且死... 详细信息

目的:急性肝损伤(ALI),又称急性肝衰竭(ALF),是指一类由各种原因所导致的严重肝损伤疾病,预后不良。轻度急性肝损伤可逐渐自愈,但也会转变成慢性肝损伤,进而引起肝纤维化、肝硬化或肝癌,而急性损伤极其严重时则可发展为急性肝衰竭,且死亡率高。在外源性因素的长期作用下,机体短期暴露于大剂量的外源性物质中,可引起急性肝损伤。肝脏功能失调将导致消化、凝血和内分泌等多个系统失调,降低生命质量,严重时危及生命。目前急性肝损伤的治疗依然是临床医学中困扰已久的难题。细胞外信号调节激酶P38γ(又称SAPK3和MAPK12)是P38 MAPK家族的四种异构体之一,已被证明在癌症、心脏和神经变性中具有重要作用。P38γ在组织中具有特殊分布,主要在骨骼肌中表达,并影响肿瘤细胞的凋亡和转移。同时研究表明,P38γ在非酒精性脂肪肝患者的肝组织中高度表达,并且通过控制调节性中性粒细胞的浸润来调控发病进程。因此,P38γ极有可能在急性肝损伤中有着重要的调控作用。在本研究中,我们主要通过四氯化碳诱导急性肝损伤模型,并探讨P38γ对其的影响,以及在ho诱导的AML-12细胞中脂质代谢相关基因和氧化应激水平的影响。此外,还具体研究了P38γ调节急性肝损伤的具体通路机制。方法:本次实验分为体内实验和体外实验分别进行。体内实验:选取雄性C57BL/6J小鼠,小鼠周龄为8-10,并按正常组、CCl诱导模型组、AAV9对照组和AAV9-P38γ组四组随机分组进行,每组6-12只小鼠。除正常组注射相同量的橄榄油外,其他三组小鼠用橄榄油稀释的10%CCl进行腹腔注射,剂量为0.5 m L/kg,24 h内诱导小鼠发生急性肝损伤后将小鼠麻醉并处死,并采集其血液和肝脏。首先通过小动物成像、免疫荧光和RT-q PCR等实验验证成功构建模型,再通过H&E染色、免疫组化等实验对各组小鼠的肝组织做病理学检查从而检验其肝脏损伤程度。最后提取小鼠肝脏组织蛋白和RNA,通过Western blotting和RT-q PCR检测氧化应激(i NOS和NOX4)、炎症因子(TNF-α,IL-1β和IL-6)以及脂质代谢(FASN,ACOX-1,SREBP-1c和PPAR-α)相关基因的表达水平。体外实验:选用小鼠正常肝细胞(AML-12细胞),首先检测不同浓度ho刺激AML-12细胞不同时间后P38γ的表达从而确定刺激的最佳浓度和时间。最后向细胞内转染P38γ过表达质粒和P38γ-si RNA,通过Western blotting和RT-q PCR检测细胞内Nrf2/HO-1信号通路的变化及上述动物实验中所提的相关基因的表达水平,从而观察P38γ对急性肝损伤的具体调控机制。结果:体内实验结果:在CCl诱导的小鼠急性肝损伤模型中,炎症、脂质代谢和氧化应激相关蛋白表达发生明显病理变化,且P38γ的表达也明显上升。而在体内将P38γ沉默后,观察到能够有效改善小鼠肝脏的病理变化及炎症、脂质代谢和氧化应激相关的蛋白表达。体外实验结果:在ho刺激的AML-12细胞中,P38γ的表达明显上升。之后转染P38γ-si RNA能够减轻刺激诱导的炎症、脂质代谢和氧化应激相关的蛋白表达,而转染P38γ过表达质粒却会加重刺激诱导的炎症、脂质代谢和氧化应激。另一方面,在AML-12细胞中,P38γ的过表达和沉默都会影响Nrf2/HO-1信号通路,则表明P38γ可能通过调节Nrf2/HO-1信号通路,最终对急性肝损伤中氧化应激、脂质代谢和炎症反应造成一定的影响。结论:以上实验结果表明:P38γ能够通过Nrf2/HO-1信号通路调节CCl诱导的急性肝损伤。

关键词： P38γ CCl4 Nrf2/HO-1 AML-12 氧化应激

脂肪间充质细胞来源的外泌体通过Nrf2/HO-1抗氧化途径抵抗地塞米松诱导的成骨细胞凋亡

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脂肪间充质细胞来源的外泌体通过Nrf2/HO-1抗氧化途径抵抗地塞米...

作者：姚学韦皖南医学院

学位级别：硕士

目的:通过建立MC3T3-E1成骨细胞氧化损伤模型,观察并分析脂肪间充质细胞来源的外泌体(ADSCs-Exos)对地塞米松(Dex)诱导下成骨细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响,探讨ADSCs-Exos治疗骨质疏松症的分子机制。方法:5周龄的SD大鼠双侧腹股沟区... 详细信息

目的:通过建立MC3T3-E1成骨细胞氧化损伤模型,观察并分析脂肪间充质细胞来源的外泌体(ADSCs-Exos)对地塞米松(Dex)诱导下成骨细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响,探讨ADSCs-Exos治疗骨质疏松症的分子机制。方法:5周龄的SD大鼠双侧腹股沟区提取ADSCs,使用流式细胞术进行鉴定。从上清液中提取ADSCs-Exos,使用WB鉴定其表面蛋白标志物的表达,用NTA和TEM鉴定其形态和大小,用PKH-26染料进行细胞摄取试验。取成对数生长的MC3T3-E1细胞,构建Dex诱导的氧化应激模型。将MC3T3-E1细胞分为五组:PBS组、Exo(50μg/ml)组、Dex组、Dex+Exo(25μg/ml)和Dex+Exo(50μg/ml)。通过体外实验分析ADSCs-Exos对Dex诱导的成骨细胞中凋亡和氧化应激水平改变的影响。使用流式细胞术和荧光显微镜观察不同组细胞中活性氧(ROS)表达情况;荧光显微镜观察细胞中线粒体膜电位的变化。通过碱性磷酸酶(ALP)和茜素红(ARS)染色分别检测成骨活性和矿化能力。通过免疫荧光染色和免疫印迹法探索潜在的分子机制。此外,构建糖皮质激素诱导的骨质疏松(GIOP)模型,使用TUNEL染色、Micro-CT、HE染色、Masson染色、免疫组化和免疫荧光染色评估ADSCs-Exos对Dex诱导的骨质疏松症的影响。结果:ADSCs-Exos通过减轻MC3T3-E1细胞凋亡、氧化损伤、细胞内ROS生成和线粒体功能障碍,恢复了MC3T3-E1细胞的生存能力和成骨潜能。此外,在用ADSCs-Exos预处理后,在Dex刺激的成骨细胞中nrf2表达上调。抑制试验表明,沉默nrf2部分消除了ADSCs-Exos的保护作用。大鼠模型试验证实,ADSCs-Exos减轻了Dex诱导的氧化水平增加,恢复了股骨远端的骨量,并增加了骨组织中nrf2和成骨标志物的表达。结论:我们的结果表明,ADSCs-Exos通过调节Nrf2/HO-1的表达来减轻Dex诱导的细胞凋亡和氧化损伤,并阻止体内GIOP的发展。

关键词：脂肪间充质细胞来源的外泌体骨质疏松氧化应激凋亡 Nrf2/HO-1

Garcinia xanthochymus extract protects PC12 cells from H2O2-induced apoptosis through modulation of PI3K/AKT and Nrf2/HO-1 pathways

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Chinese Journal of Natural Medicines 2017年第11期15卷 825-833页

作者： XU Jing GAN Sheng LI Jun WAND De-Bing CHEN Yu HU Xin YANG Guang-Zhong Laboratory for Natural Products Chemistry School of Pharmaceutical Sciences South-Central University for NationalitiesWuhan 430074 China College of Chemistry and Material Sciences South Central University for Nationalities Wuhan 430074 China

The aim of the present study was to investigate the protective effects and underlying mechanisms of Garcinia xanthochymus, a perennial medicinal plant native to Yunnan, China, against H2 O2-induced oxidative damage in rat pheochromacytoma PC12 cells. Preincubation of PC12 cells with fruit Et OAc fraction(fruit-EFr., 12.5–50 μmol·L^(-1)) of G. xanthochymus for 24 h prior to H_2O_2 exposure markedly improved cell viability and increased the activities of antioxidant enzymes(superoxide dismutase, catalase, and heme oxygenase-1 [ho-1]), prevented lactate dehydrogenase release and lipid peroxidation malondialdehyde production, attenuated the decrease of matrix metalloproteinases(MMP), and scavenged reactive oxygen species(ROS). Fruit-EFr. also reduced BAX and cytochrome C expression and improved BCL-2 expression, thereby decreasing the ratio of BAX to BCL-2. Fruit-EFr. activated the nuclear translocation of nrf2 to increase ho-1 and induced the phosphorylation of AKT. Its cytoprotective effect was abolished by LY294002, a specific inhibitor of PI3 K. Taken together, the above findings suggested that fruit-EFr.of G. xanthochymus could enhance cellular antioxidant defense capacity, at least in part, through upregulating ho-1 expression and activating the PI3 K/AKT pathway and that it could suppress H_2O_2-induced oxidative damage via PI3 K/AKT and Nrf2/HO-1 signaling pathways.

关键词： Garcinia xanthochymus Oxidative stress PC12 PI3K/Akt pathway Nrf2/HO-1 signaling pathways

苦参水提物激活Nrf2/HO-1信号通路抑制炎症和氧化应激机制研究

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中草药 2020年第1期51卷 157-162页

作者：张丽华陈燕范莹盈陈灏文黄小玲汪锦才郭嘉亮佛山科学技术学院医药工程学院广东佛山528000 广东省第二人民医院广东广州5103172 暨南大学药学院广东广州510632

目的研究苦参水提物(WSF)抑制脂多糖(LPS)诱导大鼠巨噬细胞RAW264.7炎症和氧化应激的分子机制。方法采用CCK-8法检测WSF对RAW264.7细胞的最佳给药质量浓度;以LPS刺激RAW264.7细胞制备体外炎症模型,随机分为对照组、模型组、WSF组和WSF... 详细信息

目的研究苦参水提物(WSF)抑制脂多糖(LPS)诱导大鼠巨噬细胞RAW264.7炎症和氧化应激的分子机制。方法采用CCK-8法检测WSF对RAW264.7细胞的最佳给药质量浓度;以LPS刺激RAW264.7细胞制备体外炎症模型,随机分为对照组、模型组、WSF组和WSF对照组,流式细胞术检测活性氧(ROS)及一氧化氮(NO)水平,通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、核转录因子E2相关因子2(nrf2)和血红素加氧酶-1(ho-1)在分子水平上的变化;最后检测细胞培养上清中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10的含量。结果通过CCK-8实验确定WSF质量浓度为0.01 mg/mL对细胞无毒性。与对照组比较,LPS刺激能够显著地增加细胞中NO和ROS产生,IL-6和TNF-α水平也明显升高,iNOS和COX-2蛋白表达水平明显提高(Pnrf2和ho-1蛋白表达水平降低(P2蛋白表达水平显著降低(Pnrf2和ho-1蛋白表达水平和IL-10水平显著升高(PNrf2/HO-1通路在LPS诱导的RAW264.7细胞炎症和氧化应激反应中发挥保护效应。

关键词：苦参苦参水提物炎症氧化应激 Nrf2/HO-1

枸杞多糖通过激活Nrf2/HO-1通路调节H2O2诱导的ARPE-19细胞的氧化应激

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枸杞多糖通过激活Nrf2/HO-1通路调节H2O2诱导的ARPE-19细胞的氧化...

作者：梁冉大连医科大学

学位级别：硕士

目的采用过氧化氢(ho)刺激体外培养的人视网膜色素上皮细胞系(ARPE-19),探究枸杞多糖(LBP)对ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用。同时通过预实验筛选出可能与ARPE-19细胞氧化应激有关的细胞转录因子nrf2,探究其在氧化损伤的条件下转录因子N... 详细信息

目的采用过氧化氢(ho)刺激体外培养的人视网膜色素上皮细胞系(ARPE-19),探究枸杞多糖(LBP)对ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用。同时通过预实验筛选出可能与ARPE-19细胞氧化应激有关的细胞转录因子nrf2,探究其在氧化损伤的条件下转录因子nrf2的表达,明确了该转录因子的作用机制。进一步探究了在枸杞多糖的作用下转录因子nrf2的表达的调节对于ho-1的影响。通过对以上结果进行分析,明确了枸杞多糖与ARPE-19细胞氧化应激有关的作用轴,为视网膜细胞氧化损伤的治疗提供了新的思路。方法(1)选取人视网膜色素上皮细胞系(ARPE-19),采用ho刺激培养的ARPE-19细胞构建视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化损伤的模型。选取培养状态佳的ARPE-19细胞将其随机分成5组:空白组使用DMEM/F12培养基培养;ho组给予含有500μM ho的培养基刺激细胞2h来制造细胞的氧化损伤模型;枸杞多糖(LBP)组分别给予0.5、1、2 mg/ml LBP培养基孵育细胞24小时后,用含有500μM ho的培养基刺激细胞2h。将三组细胞经过以上处理后,进行后续实验。(2)本研究检测细胞活性来确定枸杞多糖以及过氧化氢的作用浓度;评估细胞内一类氧还原产物即活性氧(ROS)及细胞内丙二醛(MDA)等与氧化应激相关的代谢物水平,来对比在有无枸杞多糖预处理条件下,过氧化氢刺激ARPE-19细胞后细胞内氧化应激反应的程度;评估细胞内抗氧化酶体系中的重要成员即超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及过氧化物标志酶即过氧化氢酶(CAT)的表达情况以评估细胞抗氧化水平。此外,本实验也评估了细胞的凋亡蛋白表达水平,进而综合分析在氧化应激状态下,枸杞多糖的预处理对ARPE-19细胞的影响。(3)为探寻nrf2是否参与ARPE-19细胞的氧化应激调节,通过western blot评估通路蛋白Nrf2/HO-1的表达情况。使用质粒转染阻断nrf2通路表达后,再次检测nrf2的表达情况以及细胞活性的改变,从而检测Nrf2/HO-1的激活能否对RPE细胞的抗氧化水平提高有积极作用。结果(1)枸杞多糖能够减轻ARPE-19细胞的氧化损伤与正常培养的细胞相比,ho的刺激显著降低了ARPE-19细胞的存活率,细胞内ROS和MDA的表达明显增加。然而,枸杞多糖(0.5-2 mg/ml)的24小时预处理,减轻了ho对ARPE-19细胞的造成的氧化损伤,不仅提高了细胞活性,而且增加了细胞内抗氧化酶的表达,同时western blot的结果也表明,枸杞多糖的预处理使细胞内凋亡蛋白的表达减少,抑制凋亡的蛋白表达增加。(2)枸杞多糖保护ARPE-19细胞氧化损伤机制的验证Western blot结果表明,ho的处理增加了核nrf2蛋白的表达。与ho组相比,枸杞多糖的预处理能够进一步激活核nrf2蛋白的转录,且与LBP的剂量呈现正相关,并且其下游基因ho-1表现出与nrf2相似的表达趋势。而应用质粒转染阻断通路后,核nrf2蛋白的表达显著减少,质粒的干预进一步增强了ho诱导的细胞死亡,枸杞多糖对细胞的保护作用也随之消失。实验结果证实了枸杞多糖通过激活Nrf2/HO-1通路,减轻了RPE细胞的氧化损伤。结论枸杞多糖可以有效减轻ho诱导的RPE氧化损伤,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路调控减轻细胞凋亡有关。该研究为减轻RPE细胞的氧化损伤提供了新的思路和方向。

关键词：枸杞多糖人视网膜色素上皮细胞氧化应激凋亡 Nrf2/HO-1

温阳通脉方通过Nrf2/HO-1信号通路对H9C2心肌细胞氧化应激的保护作用

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温阳通脉方通过Nrf2/HO-1信号通路对H9C2心肌细胞氧化应激的保护...

作者：马艺华锦州医科大学

学位级别：硕士

目的基于nrf2/ho1信号通路探讨温阳通脉方含药血清保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后氧化应激损伤机制。方法实验一:制备大鼠的空白血清和温阳通脉方的含药血清,以H9c2心肌细胞为研究对象,将细胞分组:空白血清组(CON组),模型组(H/R组),... 详细信息

目的基于nrf2/ho1信号通路探讨温阳通脉方含药血清保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后氧化应激损伤机制。方法实验一:制备大鼠的空白血清和温阳通脉方的含药血清,以H9c2心肌细胞为研究对象,将细胞分组:空白血清组(CON组),模型组(H/R组),低、中、高剂量的温阳通脉方含药血清组(L组、M组、H组),用Co Cl2及新鲜培养基制备缺氧/复氧(H/R)模型后各组添加相应的血清。用CCK-8法检测5组细胞活性;比色法检测5组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量。DCFH-DA探针法检测细胞活性氧(ROS)的水平;Western Blot法检测低氧诱导因子(Hif-1α)、核因子NF-E2相关因子2(nrf2)、血红素加氧酶-1(ho-1)的蛋白表达;hoechst33342荧光染色法检测细胞凋亡率和形态学变化。实验二:基于实验一的结果,筛选出高剂量的温阳通脉方含药血清组保护作用最佳。将细胞分为空白血清组(CON组)、模型组(H/R组)、高剂量温阳通脉方含药血清组(H组)和ML385组(用5μM的ML385预处理12小时),缺氧/复氧后,CON组和H/R组添加空白血清,H组和ML385组添加高剂量血清孵育4小时。检测4组细胞活性、MDA、SOD、LDH含量、ROS水平,Hif-1α、nrf2、ho-1的蛋白表达、检测细胞凋亡情况(检测方法同实验一),同时检测nrf2核易位情况。统计学分析各指标变化情况,以分析阻断nrf2后ho1表达和心肌细胞氧化应激损伤指标的变化,以及细胞凋亡的变化。结果实验一:与CON组比较,H/R组细胞活性降低(Pnrf2、ho-1蛋白表达增加;H/R组核碎裂细胞增加,凋亡率增加(P0.05,M、H组Pnrf2(H组Pho-1蛋白表达(M、H组Pnrf2、ho-1、减少Hif-1α蛋白表达,与L、M组比较无统计学差异(P>0.05)。实验二:与CON组比较,H/R组细胞活性降低(Pnrf2、ho-1蛋白表达增加(Pnrf2表达增加(Pnrf2、ho-1蛋白表达(H组Pnrf2表达增加(Pnrf2后)不能改善细胞活性(P>0.05)。能减少MDA、LDH、ROS含量,减少Hif-1α表达;增加SOD含量。但nrf2、ho-1蛋白表达没有增加(P>0.05),凋亡率没有减少(P>0.05)。核nrf2表达没有增加(P>0.05)。与H组比较,ML385组在减少MDA、LDH、ROS、Hif-1α表达和增加SOD表达方面低于H组(PNrf2/HO-1通路蛋白表达及细使缺氧后的胞核内nrf2增加,改善细胞凋亡,其作用以高剂量作用较显著。经Nrf2/HO-1通路抑制后,温阳通脉方上调Nrf2/HO-1通路蛋白表达及核易位作用消失,其改善缺氧/复氧后H9c2细胞活性及细胞凋亡作用消失。温阳通脉方仍能降低细胞缺氧/复氧后的LDH、ROS以及MDA,改善低氧状态,但作用明显低于没有Nrf2/HO-1通路抑制的温阳通脉方高剂量组,差异有显著性。温阳通脉方能够保护缺氧/复氧后H9c2细胞过氧化损伤,参与保护心肌细胞凋亡,分子机制与Nrf2/HO-1通路相关。

关键词：心肌缺血再灌注损伤缺氧/复氧氧化应激 Nrf2/HO-1 温阳通脉方

黄芩素通过Nrf2/HO-1调控心肌铁死亡改善ISO诱导心肌损伤的作用

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黄芩素通过Nrf2/HO-1调控心肌铁死亡改善ISO诱导心肌损伤的作用

作者：宋丽宜春学院

学位级别：硕士

本研究探讨黄芩素(Baicalein,Bai)在心肌损伤情况下的逆转作用,激活核因子E2相关因子2(Nuclear factor rythroid-2-related factor 2,nrf2)/血红素氧合酶1(Heme oxygenase-1,ho-1)信号通路介导心肌铁死亡(Ferroptosis)来探讨Bai改善心肌损伤的分子机理,为心脏损伤的发病机制的认识拓宽思维,并为临床研究提供新的方向、新途径。目的:利用腹腔注射异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)建立心肌肥厚模型,通过腹腔注射Bai进行干预治疗,探讨Bai对心肌肥厚模型下心功能、炎症反应、纤维化的作用以及Bai通过Nrf2/HO-1信号通路调控心肌铁死亡影响心脏损伤的作用。方法:1、将小鼠随机分为4组(n=6),Con组(Con)、模型组(ISO)、Bai低剂量组(ISO+Bai-25)、Bai高剂量组(ISO+Bai-50),黄芩素干预治疗后,对小鼠进行超声心动图评估小鼠心功能;利用病理染色及MDA、CK-MB、LDH试剂盒评估心肌损伤情况及纤维化程度;运用WB检测肥大、纤维化、炎症相关蛋白的表达水平情况。2、将小鼠随机分为4组(n=6),Con组(Con)、黄芩素组(Con+Bai-50)、模型组(ISO)、Bai高剂量组(ISO+Bai-50)。黄芩素干预治疗后,对小鼠进行超声心动图评估小鼠心功能;利用病理染色及MDA、CK-MB、LDH试剂盒评估心肌损伤情况及纤维化程度;运用WB检测心肌肥大、纤维化、抗氧化、炎症以及铁死亡相关蛋白的表达水平情况。3、小鼠随机分为5组(n=6),Con组(Con)、模型组(ISO)、Bai高剂量组(ISO+Bai)、nrf2抑制剂组(ISO+Bai+ML385)、铁死亡激活剂组(ISO+Bai+Erastin)。按上述方法评估小鼠心脏功能、炎症变化、纤维化情况,另利用铁离子试剂盒检测心肌组织中铁离子的含量;免疫荧光评估nrf2入核情况;Elisa检测心肌组织中MDA、GSH、ROS的含量;WB检测nrf2、ho-1信号通路蛋白及铁死亡相关蛋白。结果:1、HE/Masson染色显示,与ISO相比,Bai组可以显著改善心肌损伤及心肌纤维的变化;心超显示,与ISO相比,Bai组HW/BW、IVSd、LVPWd、LVIDd有所改善;ISO组小鼠CK-MB、LDH含量显著升高,Bai组呈剂量依赖性下降;ISO组小鼠GSH活性显著下降,MDA含量增多,Bai组GSH呈浓度依赖升高,MDA含量降低。WB结果显示,与Con组相比,ISO组、Bai组SOD1、CAT表达下调,NF-κB、TNF-α、IL-6、p-Smad2、Collagen I、BNP表达上调(Pnrf2抑制剂(ML385)、铁死亡激活剂Erastin与Bai共同干预小鼠,结果显示加重Bai对心肌损伤的改善。与ISO+Bai组相比,ML38

关键词：黄芩素 Nrf2/HO-1 铁死亡心肌肥厚心肌损伤

培元定喘汤通过调控Nrf2/HO-1通路对哮喘小鼠气道炎症的影响

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培元定喘汤通过调控Nrf2/HO-1通路对哮喘小鼠气道炎症的影响

作者：张若琦黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:利用哮喘小鼠模型,观察培元定喘汤对哮喘小鼠气道炎症及Nrf2/HO-1通路的影响,探讨培元定喘汤对哮喘小鼠气道炎症的作用机制。方法:将32只雌性BALB/c小鼠随机分成4组,每组8只,分别为空白组、模型组、布地奈德组、培元定喘汤组。除... 详细信息

目的:利用哮喘小鼠模型,观察培元定喘汤对哮喘小鼠气道炎症及Nrf2/HO-1通路的影响,探讨培元定喘汤对哮喘小鼠气道炎症的作用机制。方法:将32只雌性BALB/c小鼠随机分成4组,每组8只,分别为空白组、模型组、布地奈德组、培元定喘汤组。除空白组外,其余3组以卵蛋白与氢氧化铝联合吸入法构建哮喘小鼠模型,在第21天,培元定喘汤组小鼠予培元定喘汤(18.75kg/g)灌胃,空白组、模型组给予生理盐水(0.1ml/10g)灌胃,布地奈德组给予布地奈德0.26mg/kg(0.9%生理盐水2mL+布地奈德雾化混悬液1 mg)雾化,每次雾化3 0min,持续4周,日1次。观察各组小鼠的一般状态,通过HE染色、PAS染色法观察各组小鼠肺组织的病理形态学变化;在显微镜下检测小鼠BALF中的EOS、Neu的计数,通过ELIS A法检测小鼠血清中IgE水平,用Western Blot法检测肺组织中nrf2、ho-1蛋白的表达。结果:1.HE染色:空白组小鼠肺组织无明显病理改变,模型组小鼠肺组织可见大量哮喘相关的炎性细胞浸润,平滑肌细胞增生,管腔狭窄,肺泡壁粘连;布地奈德组、培元定喘汤组的病理改变明显减轻,培元定喘汤组减轻更为明显。2.PAS染色:空白组小鼠肺组织PAS染色无明显哮喘相关改变,模型组小鼠肺组织可见杯状细胞增生异常明显,气道粘液分泌显著增多,布地奈德组与培元定喘汤组有少量杯状细胞增加,而培元定喘汤组减轻更为明显。3.BALF中的EOS、Neu计数:与空白组相比,模型组小鼠BALF中EOS、Neu的含量显著增加(P0.05)。4.ELISA法结果显示:与空白组相比,模型组小鼠血清中IgE的含量显著增加(P0.05)。5.Western Blot法结果显示:模型组小鼠肺组织中nrf2、ho-1蛋白表达水平明显高于空白组(Pnrf2、ho-1蛋白表达水平高于模型组(P0.05)。结论:1、培元定喘汤可以减轻哮喘小鼠的气道炎症细胞浸润、减轻气道粘液分泌。2、培元定喘汤可以降低哮喘小鼠BALF中EOS、Neu的数量及血清中IgE的水平。3、培元定喘汤能够上调nrf2活化程度,增加ho-1的表达。4、培元定喘汤对哮喘小鼠气道炎症的抑制作用可能是通过激活Nrf2/HO-1通路来实现的。

关键词：培元定喘汤支气管哮喘气道炎症支气管哮喘小鼠模型 Nrf2/HO-1