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桃红四物汤对大鼠血管吻合模型Notch3受体及VEC增殖影响的研究

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桃红四物汤对大鼠血管吻合模型Notch3受体及VEC增殖影响的研究

作者：彭志飞湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:以大鼠尾血管吻合模型为研究对象,用桃红四物汤干预模型组,观察桃红四物汤对大鼠尾血管吻合模型Notch3受体及血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）增殖的影响,从而阐释桃红四物汤促进大鼠尾血管吻合模型血管新生的机制... 详细信息

目的:以大鼠尾血管吻合模型为研究对象,用桃红四物汤干预模型组,观察桃红四物汤对大鼠尾血管吻合模型Notch3受体及血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）增殖的影响,从而阐释桃红四物汤促进大鼠尾血管吻合模型血管新生的机制。方法:将所有的40只SPF级实验大鼠,适应性喂养1周后,按照随机的方法分成4个组,分别是桃红四物汤组、生理盐水组、假手术组和空白对照组,每组10只。对桃红四物汤组和生理盐水组进行造模,假手术组切开显露血管后直接缝合,空白对照组不做处理,并于术后第2,5天两个时限,从每组各随机选取5只大鼠,对吻合区创面进行大体观察,然后采用脊椎脱臼法处死,然后切取血管吻合区血管,利用免疫组化检测notch3平均光密度的表达情况并观察免疫组化图,并对大鼠外周血分离、获取单个核细胞,进行体外细胞培养,并反复纯化后,利用MTT法检测VEC增殖情况。结果:1.桃红四物汤组血管吻合区Notch3受体平均光密度表达明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组（P＜0.05）,差异有统计学意义;2.桃红四物汤组VEC增殖明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组（P＜0.05）,差异有统计学意义。结论:1.桃红四物汤能上调大鼠血管吻合模型血管吻合区血管新生相关因子Notch3受体的表达从而促进血管新生;2.桃红四物汤能够促进大鼠血管吻合区血管内皮细胞的增殖,从而促进血管的成活及新生。

关键词：桃红四物汤血管吻合模型 notch信号通路 Notch3受体 VEC

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Notch3受体在非小细胞肺癌中的表达

湖北民族学院学报（医学版） 2019年第1期36卷 31-34页

作者：魏煜赵蕴伟李树民梁姗姗王春玲姚伟英佳木斯大学黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学附属第一医院黑龙江佳木斯154002 佳木斯中心医院黑龙江佳木斯154002

目的研究Notch3受体在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况,探讨Notch3受体与NSCLC发病的相关性。方法外科手术切除后由病理确诊为NSCLC 80例患者(临床病理资料完整,术前未经放、化疗及其他抗肿瘤治疗)的肺癌组织,40例正常肺组织(为癌... 详细信息

目的研究Notch3受体在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况,探讨Notch3受体与NSCLC发病的相关性。方法外科手术切除后由病理确诊为NSCLC 80例患者(临床病理资料完整,术前未经放、化疗及其他抗肿瘤治疗)的肺癌组织,40例正常肺组织(为癌旁距离肿块边缘5 cm以上、经病理HE染色证实为正常的肺组织),免疫组织化学SP法检测肺癌组织及癌旁正常肺组织中Notch3受体的表达。结果 NSCLC肺组织中Notch3受体水平明显高于对照组(χ~2=19.937,PNotch3受体水平与患者性别,年龄,组织类型(肺腺、鳞癌)无相关性(P>0. 05); TNMⅢ+Ⅳ期中Notch3受体水平阳性率为73.3%,TNMⅠ+Ⅱ期阳性率为44.0%,差异有统计学意义(χ~2=6. 519,PNotch3受体阳性表达率为84.2%,无淋巴结转移患者的阳性率为28.6%,差异有统计学意义(χ~2=24. 953,PNotch3受体的表达水平与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移密切相关,Notch3受体参与了NSCLC的发病及进展,对NSCLC患者的疾病进展及预后有重要意义;同时,阻断其表达有望成为NSCLC靶向治疗的新靶点。

关键词：非小细胞肺癌 Notch3受体 notch信号通路免疫组化

桃红四物汤对鼠血管吻合模型Notch3受体及VEC增殖影响的研究

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中国中医骨伤科杂志 2018年第3期26卷 1-4,9页

作者：彭志飞孙绍裘李益亮金成鹏陈希龙曾景奇曾祥晶冯海波湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第二附属医院

目的:观察桃红四物汤对大鼠尾血管吻合模型Notch3受体及血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cell,VEC)增殖的影响。方法:将40只实验大鼠适应性喂养1周后随机分为4组,即桃红四物汤组、生理盐水组、假手术组和空白对照组,每组10只。桃红... 详细信息

目的:观察桃红四物汤对大鼠尾血管吻合模型Notch3受体及血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cell,VEC)增殖的影响。方法:将40只实验大鼠适应性喂养1周后随机分为4组,即桃红四物汤组、生理盐水组、假手术组和空白对照组,每组10只。桃红四物汤组和生理盐水组造模后干预,假手术组切开显露血管后直接缝合,空白对照组不做处理,并于术后第2天和第5天两个时间点随机选取5只大鼠,采用脊椎脱臼法处死,切取血管吻合区血管,利用免疫组化检测notch3的表达情况,并对大鼠外周血分离、获取单个核细胞,进行体外细胞培养,反复纯化后利用MTT法检测VEC增殖情况。结果:桃红四物汤组血管吻合区notch3蛋白表达含量明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组,差异有统计学意义(PNotch3受体的表达,能够促进血管内皮细胞的增殖,从而促进血管的成活。

关键词：桃红四物汤血管吻合 notch信号通路 Notch3受体血管内皮细胞(VEC)

肺癌中TSG101蛋白与Notch3受体表达的相关性

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肺癌中TSG101蛋白与Notch3受体表达的相关性

作者：常家辉中国医科大学

学位级别：硕士

前言 TSG101（Tumor Susceptibility Gene101）蛋白近年被发现与多种肿瘤均有关,且常被检测出有异常剪切子存在,但其在肿瘤发生、发展中的作用尚未完全明确。可是此蛋白作为内吞分选通路的重要因子,可以影响多种蛋白的内吞降解。... 详细信息

前言 TSG101（Tumor Susceptibility Gene101）蛋白近年被发现与多种肿瘤均有关,且常被检测出有异常剪切子存在,但其在肿瘤发生、发展中的作用尚未完全明确。可是此蛋白作为内吞分选通路的重要因子,可以影响多种蛋白的内吞降解。一旦此通路异常,便会使内吞的囊泡受阻于运往溶酶体降解的途中,进而增加蛋白被异常激活或循环再利用的几率,造成细胞生长中的信号紊乱。而notch受体信号家族成员是利用此通路调节信号平衡的典型代表,正常情况下内吞分选过程参与调节他们在不同时间、不同空间下的信号平衡,确保细胞分化、增殖的正常进行。有文献报道果蝇中TSG101蛋白同源物的异常阻碍了notch受体的降解,进而信号表达增多,出现果蝇胚基的异常增殖。而在哺乳动物组织中notch受体有4种亚型,在人类许多肿瘤中均发现有不同亚型的异常表达,且常是在信号数量上的变化。而在肺组织中notch3亚型受体被证实是对肺组织分化、发育和损伤修复起突出作用的亚型。那么本研究旨在初步探讨肺癌中TSG101蛋白和Notch3受体的表达情况,及两者表达的可能相关性。材料与方法 1、材料收集65例肺癌组织（鳞癌38例,腺癌27例）,另外24例新鲜肺癌组织及26例新鲜癌旁正常肺组织取自中国医科大学附属第一临床医院。 6株肺癌细胞系（SK为肺鳞癌细胞系;BE1为肺巨细胞癌细胞系;460为肺大细胞癌细胞系;LTE和SPC为肺腺癌细胞系;446为肺小细胞癌细胞系）。 2、主要试剂和来源浓缩型鼠抗人T SG101蛋白单克隆抗体（sc-7964）,兔抗人Notch3受体多克隆抗体（sc-5593）均购自Santa Cruz公司。 3、方法（1）免疫组织化学技术蜡块标本切片后按照链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法（SP法）检测TSG101蛋白（1:200）和Notch3受体（1:200）表达。孔板爬片细胞固定、打孔后,按照SP法检测Notch3受体（1:200）表达。以磷酸缓冲液PBS代替一抗作为阴性对照。（2）Western blot技术总蛋白从生长到对数期收集的细胞及组织中提取。SDS-PAGE电泳,TSG101蛋白80 v恒压4℃湿转2 h,Notch3受体200 mA恒流4℃湿转500 min。TBS/0.3%Tween-20/5%小牛血清室温封闭2hrs,一抗（1:400）4℃孵育过夜,二抗37℃孵育2 h。Notch3受体内参β-actin在电泳后以切胶方式与Notch3受体所在部位分开转印。ECL显色,X线胶片曝光成像。（3）抗体封闭技术癌细胞状态良好时,传代3批次。无血清培养基1640饥饿8h后,分别不加抗体、加入与TSG101蛋白抗体同源的无关IgG作为对照,加入TSG101蛋白抗体,均孵育48 h。以Western Blot和免疫细胞化学方法检测抗体封闭TSG101蛋白功能后,Notch3受体表达情况。 4、统计学分析应用SPSS 13.0统计软件进行数据处理,采用x 2检验分析各组计数资料,采用Spearman等级相关分析TSG101蛋白与Notch3受体表达的关系,采用t检验分析Western blot图像灰度值,细胞组化积分光密度值,P＜0.05为差异有统计学意义。结果 1、免疫组织化学结果 TSG101蛋白表达主要定位于细胞浆,少量定位于细胞核。在正常肺组织中染色强于肺鳞癌和肺腺癌。Notch3受体主要定位于细胞膜、细胞浆、细胞核。在正常肺组织染色弱于肺鳞癌和肺腺癌。两者表达水平均与肺癌组织分化（P＜0.05）、淋巴结转移（P＜0.05）明显相关。TSG101蛋白表达与Notch3受体表达呈负相关（P＜0.05）。用TSG101蛋白抗体封闭SPC细胞中TSG101蛋白功能后Notch3受体的免疫细胞化学结果显示胞浆中Notch3受体染色有增强。 2、Western Blot结果 TSG101蛋白在癌组织及细胞系中的表达明显低于正常肺组织及细胞系,Notch3受体在癌组织及细胞系中的表达则明显高于正常。用TSG101蛋白抗体封闭腺癌细胞系SPC中TSG101蛋白功能后Notch3受体检测水平较对照组有增高。结论肺癌中TSG101蛋白表达下调,与Notch3受体检测水平的上升有相关性。

关键词：肺肿瘤 TSG101蛋白 Notch3受体内吞分选

TGF-β1通过TRAF6活化notch3信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭的研究

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中国癌症杂志 2018年第2期28卷 98-104页

作者：周韵娇王婧姝梁凡杨丽娜杨恭复旦大学附属上海市第五人民医院中心实验室上海200240 复旦大学附属上海市第五人民医院妇产科上海200240 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所上海200032

背景与目的:转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与notch3在卵巢肿瘤组织中的异常表达与扩增分别与肿瘤转移和患者的低生存率有关。尽管TGF-β1与notch3信号通路的交互作用促进多种肿瘤细胞的侵袭和转移,但其具体... 详细信息

背景与目的:转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与notch3在卵巢肿瘤组织中的异常表达与扩增分别与肿瘤转移和患者的低生存率有关。尽管TGF-β1与notch3信号通路的交互作用促进多种肿瘤细胞的侵袭和转移,但其具体机制尚存在争议。该研究通过体外细胞学实验,探究TGF-β1与notch3信号通路对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其可能的相互作用机制。方法:以上皮性卵巢癌细胞Hey A8和Hey为细胞模型,用ELISA检测培养上清液中TGF-β1的表达;分别用500 ng/mL TGF-β1中和抗体(对照组)、10 ng/mL TGF-β1、50μmol/L DAPT、10 ng/mL TGF-β1和50μmol/L DAPT、50μmol/L TRAF6多肽抑制剂、10 ng/mL TGF-β1和50μmol/L TRAF6多肽抑制剂处理细胞,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各处理组TGF-β1和notch3信号通路分子以及TRAF6蛋白表达水平的变化;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验和Transwell小室测定各处理组细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果:Hey A8和Hey细胞培养上清液中TGF-β1浓度随时间延长而明显增加;与对照组相比,TGF-β1处理组notch3-ICD、Hes1表达增加,notch3抑制剂DAPT与TGF-β1共同处理组notch3-ICD、Hes1表达水平无明显变化,TGF-β1明显促进细胞增殖、迁移和侵袭,notch3抑制剂DAPT削弱了TGF-β1对卵巢癌细胞的促增殖、迁移和侵袭能力,说明TGF-β1通过激活notch3信号通路促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;进一步研究发现,TGF-β1激活notch3信号通路的同时上调TRAF6表达,特异性抑制TRAF6能够抑制TGF-β1对notch3信号通路的激活作用。结论:TGF-β1可能通过TRAF6活化notch3信号通路,从而促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词： Notch3受体转化生长因子β1 肿瘤坏死因子受体相关因子6 卵巢癌迁移和侵袭

肺癌中TSG101蛋白与Notch3受体表达的相关性

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中国肺癌杂志 2009年第2期12卷 111-116页

作者：常家辉陆平蔡存伟李菲钟志永张道荣中国医科大学基础医学院病理学教研室沈阳110001 齐齐哈尔医学院附属五院大庆市龙南医院病理科大庆163453 辽宁省肿瘤医院病理科沈阳110042

背景与目的TSG101蛋白是内吞分选通路的重要因子,该通路的异常会减少果蝇中notch受体的降解,导致此受体信号对细胞分化、发育调节的紊乱。在哺乳动物中,notch受体家族中的3亚型与肺组织发育及肺癌发生密切相关。本实验的目的是初步探讨... 详细信息

背景与目的TSG101蛋白是内吞分选通路的重要因子,该通路的异常会减少果蝇中notch受体的降解,导致此受体信号对细胞分化、发育调节的紊乱。在哺乳动物中,notch受体家族中的3亚型与肺组织发育及肺癌发生密切相关。本实验的目的是初步探讨在人类肺癌中,TSG101蛋白与Notch3受体之间的表达是否也存在关联。方法分别采用Western blot和免疫组化SP法检测TSG101蛋白与Notch3受体在肺癌组织、细胞系中的表达,并应用抗体封闭TSG101蛋白功能后观察Notch3受体的表达变化。结果TSG101蛋白在肺癌中比正常肺组织表达减少,而Notch3受体在肺癌中比正常肺组织表达则增多,此变化均与肺癌的分化及淋巴结转移相关。当用抗体封闭肺癌细胞系中TSG101蛋白功能时,Notch3受体检测水平呈上升变化。结论肺癌中TSG101蛋白表达下调,与Notch3受体检测水平上升有相关性。

关键词：肺肿瘤 TSG101蛋白 Notch3受体内吞分选

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notch3在肿瘤发生发展中的作用

实用肿瘤学杂志 2014年第5期28卷 451-455页

作者：乔杰鲁才杰张庆余广东医学院附属医院肝胆外科实验室湛江524001 湛江市肝胆疾病重点实验室

notch信号通路是一个高度保守的信号通路，在脊椎动物发育过程中扮演重要角色。研究发现notch受体介导的信号通路在多种肿瘤中异常表达。近年来研究表明notch3与多种肿瘤的发生发展有着密切的联系，notch3在调控肿瘤细胞的凋亡、增殖和... 详细信息

notch信号通路是一个高度保守的信号通路，在脊椎动物发育过程中扮演重要角色。研究发现notch受体介导的信号通路在多种肿瘤中异常表达。近年来研究表明notch3与多种肿瘤的发生发展有着密切的联系，notch3在调控肿瘤细胞的凋亡、增殖和分化中起着重要作用，本文就notch3在各类常见肿瘤中的研究进展进行综述，重点探讨notch3异常表达与肿瘤形成、发展的分子机制，以期推动notch3作为药物作用靶点的研究。

关键词： Notch3受体肿瘤作用机制

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notch3的表达与乳腺癌发生发展的关系

中华乳腺病杂志（电子版） 2012年第6期6卷 47-50页

作者：陈春发豆晓伟张国君汕头大学医学院附属肿瘤医院乳腺中心广东汕头515041 汕头大学医学院肿瘤研究中心

notch受体家族是一类高度保守的I-型跨膜糖蛋白，除了调节细胞的分化、增殖、自我更新和生存外，在决定细胞命运中起着重要的作用。notch3基因是在哺乳动物中发现的第三个notch家族成员，因此命名为notch3基因，起初描述是表达在增殖的... 详细信息

notch受体家族是一类高度保守的I-型跨膜糖蛋白，除了调节细胞的分化、增殖、自我更新和生存外，在决定细胞命运中起着重要的作用。notch3基因是在哺乳动物中发现的第三个notch家族成员，因此命名为notch3基因，起初描述是表达在增殖的神经上皮细胞上，

关键词：乳腺肿瘤糖蛋白类 Notch3受体 notch3信号通路