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低氧条件下共培养体系中肺动脉内皮细胞经notch1/jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖

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中国老年学杂志 2011年第4期31卷 603-606页

作者：夏世金汪海东张晓丽吴学玲王洵复旦大学附属华东医院上海市老年医学研究所上海200040 复旦大学附属华东医院内分泌科复旦大学附属华东医院肾内科复旦大学附属中山医院呼吸科

目的探讨低氧条件下细胞共培养体系中肺动脉内皮细胞经由notch1/jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖。方法建立Transwell共培养体系,将肺动脉内皮细胞(PAEC)和平滑肌细胞(PASMC)分别接种于下室和上室,PAEC经DAPT(notch信号阻断... 详细信息

目的探讨低氧条件下细胞共培养体系中肺动脉内皮细胞经由notch1/jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖。方法建立Transwell共培养体系,将肺动脉内皮细胞(PAEC)和平滑肌细胞(PASMC)分别接种于下室和上室,PAEC经DAPT(notch信号阻断剂)或(和)S iR-NA-jagged1预处理后,与PASMC共同置入自动常压缺氧孵箱进行低氧处理。根据PAEC是否行DAPT、jagged1小RNA干扰预处理进行实验分组:常氧时PAEC与PASMC共培养对照组(N)、低氧时PAEC与PASMC共培养组(H1)、低氧时DAPT(终浓度10μmol/L)预处理PAEC与PASMC共培养组(H2)、低氧时S iRNA-jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H3)、低氧时DAPT加S iRNA-jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H4)。用3H-TdR掺入法检测PAEC和PASMC增殖情况,RT-PCR检测PAEC中notch1、jagged1 mRNA表达水平。结果低氧时各组PAEC和PASMC的3H-TdR掺入量明显高于常氧共培养对照组(均Pnotch1、jagged1单阻断和双阻断使低氧条件下PAEC和PASMC增殖细胞数明显减少。低氧时PAEC与PASMC共培养组PAEC中notch1、jagged1 mRNA表达水平明显高于常氧共培养组(均Pjagged1单独、或者两者共同预处理PAEC,再在低氧条件下与PASMC共培养,DAPT使PAEC中notch1 mRNA表达水平明显下降,S iRNA-jagged1使jagged1 mRNA表达水平显著降低,DAPT和S iRNA-jagged1共同使notch1、jagged1 mRNA表达水平同时明显下调,与H1组比较差异有统计学意义(Pnotch1/jagged1信号通路介导,低氧导致PAEC和PASMC异常增殖、低氧性肺动脉内皮细胞调控低氧性肺动脉平滑肌细胞的异常增殖。

关键词：低氧肺内皮细胞平滑肌细胞增殖 notch1/jagged1信号通路共培养

丹参酮ⅡA联合DAPT对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化过程中notch1/jagged1信号通路的影响

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丹参酮ⅡA联合DAPT对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化过程中...

作者：陈莎莎遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:研究丹参酮IIA联合DAPT对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化标志物E-cadherin、Snail、N-cadherin、FN的表达及notch1/jagged1信号通路传导的影响,证实丹参酮IIA联合DAPT抗肾间质纤维化的协同效应,为中西分子药物配伍... 详细信息

目的:研究丹参酮IIA联合DAPT对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化标志物E-cadherin、Snail、N-cadherin、FN的表达及notch1/jagged1信号通路传导的影响,证实丹参酮IIA联合DAPT抗肾间质纤维化的协同效应,为中西分子药物配伍抗肾间质纤维化提供理论依据。方法:（1）CCK-8法检测丹参酮IIA及其联合DAPT对细胞活性的影响,筛选最佳药物浓度;（2）将HK-2细胞随机分为五组:正常组（无特殊处理）、模型组（TGF-β110 ng/ml）、丹参酮IIA组（TGF-β1 10 ng/ml+Tanshinone IIA 5μmol/L）、DAPT组（TGF-β1 10 ng/ml+DAPT 10μmol/L）、丹参酮IIA+DAPT组（TGF-β1 10 ng/ml+Tanshinone IIA 5μmol/L+DAPT 10μmol/L）,显微镜下观察各组细胞的形态变化;（3）细胞免疫荧光检测五组细胞中EMT相关指标E-cadherin、N-cadherin、FN及通道蛋白notch1、jagged1的定位及表达;（4）RT-q PCR、Western bolt技术分别检测五组细胞中E-cadherin、Snail、N-cadherin、FN、notch1及jagged1 m RNA及蛋白的表达情况。结果:（1）CCK-8法筛选出丹参酮IIA组及丹参酮IIA+DAPT组中丹参酮IIA最佳药物浓度均为5μmol/L;（2）显微镜下观察:正常组HK-2细胞呈鹅卵石样贴壁生长,典型上皮样细胞形态;模型组细胞形态呈典型长梭形,大小不一,与成纤维细胞相似,数量较多,排列紧密;丹参酮IIA组、DAPT组、丹参酮IIA+DAPT组长梭形细胞明显减少,形态上接近正常组,密度均匀。（3）细胞免疫荧光结果显示:E-cadherin、N-cadherin、notch1及jagged1在HK-2细胞胞膜上表达,FN在HK-2细胞胞质中表达;与正常组比较,模型组E-cadherin表达降低（P＜0.05）,FN、N-cadherin、notch1及jagged1表达增加（P＜0.05）;与模型组相比,各干预组E-cadherin表达不同程度增加（P＜0.05）,N-cadherin、FN、notch1及jagged1表达不同程度降低（P＜0.05）;（4）RT-q PCR与Western bolt结果显示:TGF-β1诱导的HK-2模型组细胞E-cadherin m RNA及蛋白的相对表达较正常组降低（P＜0.05）;各干预组HK-2细胞E-cadherin m RNA及蛋白的相对表达较模型组升高（P＜0.05）;各干预组间比较,丹参酮IIA+DAPT组E-cadherin m RNA及蛋白的相对表达明显高于丹参酮IIA组（P＜0.05）,与DAPT组无明显差异（P＞0.05）;（5）RT-q PCR与Western bolt结果显示:TGF-β1诱导的HK-2模型组细胞Snail、N-cadherin、FN m RNA及蛋白的相对表达较正常组升高（P＜0.05）;各干预组HK-2细胞Snail、N-cadherin、FN m RNA及蛋白的相对表达较模型组降低（P＜0.05）;各干预组间比较,丹参酮IIA+DAPT组Snail、N-cadherin、FN m RNA及蛋白的相对表达明显低于丹参酮IIA组及DAPT组（P＜0.05）;（6）RT-q PCR与Western bolt结果显示:正常组HK-2细胞notch1、jagged1 m RNA及蛋白呈低表达,模型组HK-2细胞notch1、jagged1 m RNA及蛋白的相对表达较正常组升高（P＜0.05）;各干预组HK-2细胞notch1、jagged1 m RNA及蛋白的相对表达较模型组降低（P＜0.05）;各干预组间比较,丹参酮IIA+DAPT组notch1 m RNA及蛋白的相对表达低于丹参酮IIA组（P＜0.05）,与DAPT组无明显差异（P＞0.05）,丹参酮IIA+DAPT组jagged1 m RNA及蛋白的相对表达低于丹参酮IIA组及DAPT组（P＜0.05）。结论:丹参酮IIA联合DAPT用药可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞Snail、N-cadherin及FN蛋白的表达,降低notch通道配体jagged1 m RNA及蛋白表达,且疗效优于单一用药组。丹参酮IIA联合DAPT用药还可上调TGF-β1诱导的HK-2细胞E-cadherin m RNA及蛋白的表达,降低通道蛋白notch1 m RNA及蛋白表达,且疗效优于丹参酮IIA组。可见,丹参酮IIA联合DAPT用药可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间质转分化,其机制可能与其能协同干预notch1/jagged1信号通路的传导有关。

关键词：丹参酮IIA DAPT 上皮间质转分化 notch1/jagged1信号通路肾间质纤维化

丹参酮ⅡA配伍DAPT对肾纤维化过程中notch1/jagged1信号通路的干预作用

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丹参酮ⅡA配伍DAPT对肾纤维化过程中Notch1/Jagged1信号通路的干...

作者：徐静雅遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:研究丹参酮ⅡA与DAPT配伍对UUO大鼠肾组织与白蛋白诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)等蛋白以及notch1/jagged1信号途径的干预作用,证实丹参酮ⅡA配伍DAPT防治肾纤维化的疗效机制,... 详细信息

目的:研究丹参酮ⅡA与DAPT配伍对UUO大鼠肾组织与白蛋白诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)等蛋白以及notch1/jagged1信号途径的干预作用,证实丹参酮ⅡA配伍DAPT防治肾纤维化的疗效机制,为中西药物组分配伍走向临床提供理论基础和实验依据。方法:1.40只雄性SD大鼠采用单纯随机抽样分组方法分为5组,即正常组、模型组、丹参酮ⅡA组、γ-分泌酶抑制剂(DAPT)组、丹参酮ⅡA配伍DAPT组(简称丹参酮ⅡA+DAPT组)。造模后给予相应药物干预14 d。检测大鼠肾小管功能指标:尿微量白蛋白(UMA)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的含量,观察肾组织病理。免疫组织化学方法(IHC)检测α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原(ColⅠ)的变化。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测notch 1 mRNA、jagged 1 mRNA的表达情况。免疫印迹法(WB)检测notch 1、jagged 1、α-SMA、TGF-β、CTGF的蛋白表达。2.HK-2细胞传代培养同步化后同样分为以上五组,除正常组外均给予过量人血清白蛋白(HSA)造模处理,且3个给药干预组予相应药物干预48 h后采取细胞免疫荧光检测notch 1、jagged 1、α-SMA、TGF-β及CTGF蛋白的定位表达;WB检测:notch 1、jagged 1、α-SMA、TGF-β及CTGF蛋白表达。结果:1.各组大鼠肾小管功能检测结果:与正常组比较,模型组尿NAG与UMA含量均显著升高(P0.05)。2.各组大鼠肾脏病理结果:模型组肾脏组织呈肾小管萎缩,小管间质明显增宽,Masson染色可见大量胶原纤维弥漫分布。各用药干预组均较模型组病理有所改善,且HE与Masson评分显著降低(Pnotch 1和jagged 1mRNA相对表达显著升高(Pnotch 1和jagged 1mRNA相对表达显著降低(Pjagged 1mRNA的相对表达低于丹参酮IIA组(P0.05)。丹参酮IIA+DAPT组大鼠肾组织notch 1mRNA相对表达较丹参酮IIA与DAPT组显著降低(Pnotch 1、jagged 1、α-SMA、TGF-β及CTGF蛋白相对表达量显著升高(Pnotch 1、jagged 1、α-SMA、TGF-β及CTGF蛋白相对表达量显著降低(Pnotch 1、α-SMA、TGF-β蛋白相对表达量较丹参酮IIA与DAPT组显著降低(P信号为蓝色,而notch 1、jagged 1、α-SMA、TGF-β、CTGF阳性表达的荧光信号为红色。notch 1、jagged 1、α-SMA、CTGF在各组细胞胞浆区域可见不同程度红色荧光,TGF-β在各组细胞胞核区域可见不同程度红色荧光,说明notch 1、jagged 1、α-SMA、CTGF主要表达在HK-2细胞的胞浆,TGF-β主要表达在HK-2细胞的胞核。7.Western blot检测HK-2细胞结果:与正常组比较,模型组细胞notch 1、jagged 1、α-SMA、TGF-β、CTGF蛋白相对表达量显著升高(Pnotch1、jagged 1、α-SMA、TGF-β、CTGF蛋白相对表达量显著降低(Pnotch 1、α-SMA、TGF-β、CTGF蛋白相对表达量显著低于丹参酮IIA与DAPT组(Pjagged 1的相对表达量无显著性差异(P>0.05)。结论:丹参酮IIA、DAPT及其配伍用药可以减轻UUO大鼠肾组织损害,保护肾小管功能,延缓肾纤维化进程。该机制可能与其降低肾组织α-SMA、ColⅠ表达,减少胶原蛋白的合成;抑制相关纤维化分子TGF-β、CTG

关键词：丹参酮ⅡA DAPT notch1/jagged1信号通路肾纤维化

加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织notch1/jagged-1信号通路的影响

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中国中医基础医学杂志 2015年第11期21卷 1401-1403,1440页

作者：黄仁发梁群卿黄国东向少伟黄海燕胡维龙韵吴金玉广西中医药大学附属瑞康医院肾内科南宁530011 广西中医药大学附属瑞康医院健康体检中心南宁530011 广西中医药大学第一附属医院肾内科南宁530023

目的:观察加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织notch1、jagged1蛋白表达的影响。方法:健康成年SD大鼠90只,按随机数字表法分为假手术组、模型组、中药组3组。假手术组和模型组给予生理盐水(2 ml/只/d)灌胃,中药组给予加味六... 详细信息

目的:观察加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织notch1、jagged1蛋白表达的影响。方法:健康成年SD大鼠90只,按随机数字表法分为假手术组、模型组、中药组3组。假手术组和模型组给予生理盐水(2 ml/只/d)灌胃,中药组给予加味六味地黄汤组灌胃(2 ml/d)。HE染色和Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织notch1、jagged1蛋白的表达。结果:假手术组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠出现肾间质纤维化,中药组大鼠小管间质病变减轻。与假手术组相同时间点相比较,模型组大鼠小管间质半定量评分、notch1、jagged1蛋白表达均显著增高,差异有统计学意义;与模型组大鼠相同时间点相比较,加味六味地黄汤显著降低小管间质半定量评分、notch1、jagged1蛋白表达。结论:加味六味地黄汤可能通过阻断notch1/jagged1信号通路的活化,发挥抗肾间质纤维化作用。

关键词：单侧输尿管梗阻肾间质纤维化加味六味地黄汤 notch1/jagged1信号通路

基于"多重打击"理论建立SD大鼠认知功能障碍模型及相关机制研究

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中华实用儿科临床杂志 2022年第13期37卷 1011-1016页

作者：段博阳王月杨李刘乐崔珍珍余莉唐久来吴德安徽医科大学第四附属医院儿科合肥230000 安徽医科大学第一附属医院儿科合肥230000 病原生物学安徽重点实验室合肥230000

目的通过脑发育早期脂多糖(LPS)重复刺激,建立SD大鼠认知障碍模型,探讨炎症反应介导下的"多重打击"对其组织学、行为学的影响及相关的分子机制。方法本研究的实验设计类型为成组设计。通过腹腔注射LPS构建SD大鼠"多重打击"认知障碍模型,... 详细信息

目的通过脑发育早期脂多糖(LPS)重复刺激,建立SD大鼠认知障碍模型,探讨炎症反应介导下的"多重打击"对其组织学、行为学的影响及相关的分子机制。方法本研究的实验设计类型为成组设计。通过腹腔注射LPS构建SD大鼠"多重打击"认知障碍模型,将24只孕鼠按照随机数字表法分为对照组、LPS1组、LPS2组、LPS3组,每组6只。对照组孕18 d孕鼠和20日龄仔鼠均腹腔注射9 g/L盐水;LPS1组孕18 d孕鼠腹腔注射9 g/L盐水;LPS2组孕18 d孕鼠腹腔注射0.05 mg/kg LPS;LPS3组孕18 d孕鼠注射0.1 mg/kg LPS。LPS1~3组仔鼠均在20日龄时腹腔注射1 mg/kg LPS。通过前肢悬吊、网格和水迷宫等行为学实验,对仔鼠运动和认知功能进行整体评估。组织学和蛋白免疫印迹(WB)实验检测仔鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、notch1和jagged1的相对表达量。采用单因素方差分析进行多组数据之间比较,采用独立样本t检验进行2组数据之间比较。结果1.行为学实验:与对照组比较,LPS1~3组仔鼠的前肢悬吊时间递减[(34.81±5.66)s、(22.47±4.35)s、(13.20±4.25)s比(43.88±4.85)s],网格实验中足踏空次数递增(16.13±2.90、20.75±3.10、25.13±4.45比9.00±2.72),差异均有统计学意义(F=69.77、35.59,均Pnotch1、jagged1蛋白的相对表达量显著增加(Pnotch1/jagged1通路上调有关。

关键词：脑组织脂多糖认知障碍星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白 notch1/jagged1信号通路 SD大鼠

抑制notch1/jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞“归巢”并改善哮喘

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南方医科大学学报 2021年第10期41卷 1464-1472页

作者：王坤朱慧志杨磊徐晴雯任冯春刘向国新安医学教育部重点实验室安徽合肥230031 徽学研究中心安徽中医药大学分中心安徽合肥230031 安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012

目的观察间充质干细胞(BMSCs)归巢调节哮喘Th1/Th2“漂移”与notch1/jagged1通路的关系。方法20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组:正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、BMSCs移植组(BMSCs)、BMSC+notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建... 详细信息

目的观察间充质干细胞(BMSCs)归巢调节哮喘Th1/Th2“漂移”与notch1/jagged1通路的关系。方法20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组:正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、BMSCs移植组(BMSCs)、BMSC+notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型,尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学,酶联免疫吸附法检测肺组织白介素(IL)-5、IL-13、IFN-γ,RT-PCR法检测肺组织notch1、jagged1基因表达,免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达,免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、notch1、jagged1蛋白表达。结果与NC组比较,MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低,IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高,notch1、jagged1mRNA和蛋白表达升高(Pnotch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高,BMSCs组notch1、jagged1蛋白表达降低,BMSCs+notch抑制剂组IL-5、IL-13、notch1、jagged1mRNA和蛋白降低(Pnotch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高,IL-13、notch1mRNA表达降低(Pnotch1/jagged1通路可能参与其过程。

关键词：哮喘骨髓间充质干细胞归巢 Th1/Th2“漂移” notch1/jagged1信号通路