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激活骨髓基质细胞notch信号体外促进小鼠成骨作用

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第12期38卷 1097-1103页

作者：刘忻钰罗岑涂小林重庆医科大学生命科学研究院重庆400016

目的探究体外激活骨髓基质细胞(BMSC)缺刻基因(notch)信号对成骨分化的影响。方法使用Cre重组腺病毒(Ad-Cre)以及对照腺病毒(Ad-GFP),分别感染notch1-NICD^(flox/flox)小鼠BMSC,分为Ad-Cre组和Ad-GFP组。Western blot法检测notch1-NICD蛋白表达水平;碱性磷酸酶(ALP)染色及生化定量检测早期成骨分化水平,茜素红S染色及矿化定量检测晚期钙盐沉积水平;实时荧光定量PCR检测notch靶基因发状分裂增强子1(Hes1)、含YRPW基序的bHLH转录因子Hes相关家族1(Hey1)、Hey2、HeyL、成骨标志基因ALP、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨转化因子(Osx)、骨钙素(Ocn)以及促血管生成因子血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达。结果Ad-Cre成功激活notch1-NICD^(flox/flox)小鼠BMSC中的notch信号;Ad-Cre组的ALP活性相较Ad-GFP组明显升高,晚期钙盐沉积水平明显升高;ALP、RUNX2、Osx、Ocn和VEGF、HIF-1α的表达显著增加。结论体外激活小鼠BMSC的notch信号显著促进成骨分化。

关键词：骨髓基质细胞(BMSC) notch信号成骨分化

激活notch信号通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

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科学通报 2004年第6期49卷 554-557页

作者：鲁茁壮吴祖泽张群伟王华贾向旭段海峰王立生军事医学科学院放射医学研究所北京100850

notch是影响细胞分化的重要信号通路之一. RT-PCR检测到人骨髓来源的间充质干细胞(MSC)表达notch1, 其配体Jagged1及下游分子DTX1, 表明notch信号可能调节MSC的增殖分化. notch1胞内区(ICN)是notch蛋白的活性形式, 通过载体介导将ICN转... 详细信息

notch是影响细胞分化的重要信号通路之一. RT-PCR检测到人骨髓来源的间充质干细胞(MSC)表达notch1, 其配体Jagged1及下游分子DTX1, 表明notch信号可能调节MSC的增殖分化. notch1胞内区(ICN)是notch蛋白的活性形式, 通过载体介导将ICN转染细胞就可以在没有配体存在的情况下激活notch信号. 我们克隆了ICN基因, 构建了携带ICN的逆转录病毒载体, 感染MSC后用地塞米松(DEX)诱导其向成骨细胞分化. 转染ICN激活notch信号的MSC较对照细胞在分化过程中碱性磷酸酶活力升高, 钙的沉积增加, 表明notch信号有促进MSC向成骨细胞分化的作用.

关键词： notch信号骨髓间充质干细胞成骨细胞地塞米松细胞分化

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞notch信号通路的影响

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中华实验外科杂志 2008年第7期25卷 929-931页

作者：邓刚余建华叶章群胡志全罗钰填王志华华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科武汉430030 湖北省武警总医院泌尿外科

目的观察姜黄素（Curcumin，Cur）对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3体外生长及notch信号通路的影响。方法应用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术、透射电镜、RT-PCR法观察了6．25、12．5、25．0、50．0txanol／L浓度姜黄索对PC3细胞生长及N... 详细信息

目的观察姜黄素（Curcumin，Cur）对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3体外生长及notch信号通路的影响。方法应用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术、透射电镜、RT-PCR法观察了6．25、12．5、25．0、50．0txanol／L浓度姜黄索对PC3细胞生长及notchl mRNA和蛋白，Jaggedl、HeslmRNA表达的影响。结果姜黄素以剂量和时间依赖性方式抑制PC3细胞的生长（F6.25=17．840，F12．5=20．479，％=99．091，F50=8．40，F24=1081．70，F48=51．495，F72=155．24，P均〈0．01）；诱导G2／M期停滞（Fs=1708．20，FG2／M=1580．40，P均〈0．01）；促进凋亡（F=208．23，P〈0．01）；随着Cur梯度浓度引起notchl、HeslmRNA分别增高（F=4．872，P〈0．05；F=29．562，P〈0．01），notchl蛋白表达升高（F=4．579，P〈0．05），Jaggedl mRNA的表达下降（F=74．160，P〈0．01）。结论姜黄素能上调notchl、Hesl，下调Jaggedl的表达，激活notch信号通路，是其发挥抗前列腺癌的机制之一。

关键词：前列腺癌姜黄素 notch信号脱噬作用

Micro-RNA与notch信号调控肺炎克雷伯菌感染肺泡上皮细胞自噬的作用研究

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中国病原生物学杂志 2021年第12期16卷 1393-1397,1403页

作者：师志云尹晓丽侯晓慧王良方张玉英李刚王文陶佳李莎莎贾伟宁夏医科大学总医院医学实验中心银川宁夏750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学临床医学院

目的探讨Micro-RNA与notch信号调控肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬在肺炎克雷伯菌感染的作用机制。方法构建体外肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞(ACEII)A549细胞模型,荧光定量PCR筛选表达变化显著的micro-RNAs;... 详细信息

目的探讨Micro-RNA与notch信号调控肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬在肺炎克雷伯菌感染的作用机制。方法构建体外肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞(ACEII)A549细胞模型,荧光定量PCR筛选表达变化显著的micro-RNAs;在感染0、24、48、72 h用自噬抑制剂(3-MA)和自噬诱导剂雷帕霉素(Rapa)分别作用于A549细胞,荧光定量PCR检测micro-RNA表达的动态变化。构建A549细胞miR-144 mimics转染模型,Western blot检测notch1的蛋白表达,显微镜观察菌落变化情况。结果与Control组相比,KPN组细胞中miR-125a、miR-144、miR-155、miR-146a、miR-9的表达水平均显著升高(均Pnotch1的蛋白表达水平显著升高(Pnotch1的蛋白表达水平显著降低(Pnotch1蛋白表达水平相比KPN组显著降低(Pnotch信号在调控肺炎克雷伯菌感染肺泡II型上皮细胞发生细胞自噬中发挥重要作用。

关键词：肺炎克雷伯菌肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬 Micro-RNA notch信号

体外激活骨细胞notch信号对骨髓基质细胞成骨分化的影响

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第三军医大学学报 2020年第9期42卷 891-898页

作者：谢映春涂小林重庆医科大学生命科学研究院骨发育与再生平台重庆400016

目的探究体外激活骨细胞notch信号对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化的影响。方法设置Cre重组腺病毒(Ad-Cre)及对照腺病毒GFP(Ad-GFP),分别转染Rosanotch小鼠骨细胞后与野生C57BL/6小鼠BMSCs共培养为Ad-Cre组及Ad-GFP组,设置仅BMSCs为Blank组。碱性磷酸酶染色及生化定量测定碱性磷酸酶(ALP);qPCR检测转染后骨细胞notch信号靶基因及共培养产物成骨相关标志物、notch信号配体及成血管相关标志物,茜素红染色检测成骨诱导21 d钙盐沉积水平。结果Ad-Cre成功激活Rosanotch小鼠骨细胞notch信号,ALP染色及生化定量结果显示Ad-Cre组ALP表达相较Ad-GFP组及Blank组显著降低(Pnotch配体Dll4 mRNA转录水平相较Ad-GFP组及Blank组显著降低(Pnotch信号抑制骨髓基质细胞成骨分化。

关键词：骨细胞 notch信号骨髓基质细胞成骨分化

阻断notch信号通路促骨髓间质干细胞体外分化为胰岛样细胞

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中华肾脏病杂志 2014年第8期30卷 619-626页

作者：张一婷尹爱平李利利孙吉平西安交通大学医学院第一附属医院肾病中心肾内科 710061 西安交通大学医院

目的通过notch信号途径抑制剂DAPT构建notch信号敲除模型，探讨notch信号通路在骨髓问质干细胞（BMSCs）体外分化为胰岛样细胞中的作用。方法体外分离培养BMSCs并鉴定，体外诱导其分化。用ν-分泌酶特异性抑制剂DAPT阻断notch信号通路... 详细信息

目的通过notch信号途径抑制剂DAPT构建notch信号敲除模型，探讨notch信号通路在骨髓问质干细胞（BMSCs）体外分化为胰岛样细胞中的作用。方法体外分离培养BMSCs并鉴定，体外诱导其分化。用ν-分泌酶特异性抑制剂DAPT阻断notch信号通路。采用双硫腙（DTZ）染色法鉴定胰岛细胞；间接免疫荧光染色，RT—PCR和Western印迹等方法检测诱导后细胞的胰岛素、胰高血糖素、胰十二指肠同源框1基因（Pdx-1）和神经元素3（Ngn3）的表达。ELISA法检测细胞葡萄糖刺激后分泌胰岛素水平。结果（1）BMSCs鉴定：间接免疫荧光染色结果显示：BMSCs表达CD59和CD90抗原，体外可表达神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）等神经细胞标记物，证实其具多向分化潜能。（2）MTr结果显示：ν-分泌酶抑制剂（DAPT）可抑制BMSCs增殖，其效应有时间和剂量依赖性。并以剂量和时间依赖性方式抑制notch信号通路靶基因Hcsl的表达。用1、5、20μmol DAPT处理96h后细胞的Hesl表达分别为对照组的92．06％、71．40％、46．89％，提示其对notch信号通路阻断率分别达到7．94％、28．6％和53．11％（均P＜0．05）。（3）间接免疫荧光结果显示：DAPT阻断组的胰岛素和胰高血糖素阳性细胞百分比较对照组明显增多[分别为（74．03±3．96）％比（36．49±3．24）％；（64．81±4．37）％比（37．50±3．69）％，均P＜0．051。提示阻断notch信号通路后BMSCs体外分化效率增加。（4）RT-PCR和Western印迹结果提示：BSMCs诱导14d后可以检测到胰岛素、胰高血糖素表达，DAPT阻断后上述蛋白表达上调；BMSCs诱导早期（7d）即表达Pdx-1和Ngn3，14d后达到高峰，之后逐渐下降。DAPT阻断后Pdx-1和Ngn3的表达增加。（5）ELISA结果显示：诱导后细胞对葡萄糖刺激有分泌胰岛素反应，DAPT阻断后诱导细胞的反应更好。结论大鼠BMSCs体外可分化为胰岛样细胞；阻断notch信号通路可通过改变胰腺关键转录因子的表达而增强BMSCs体外分化能力。

关键词：间质干细胞骨髓胰岛 notch信号

快速老化小鼠胸腺细胞分化与notch信号相关基因表达关系的研究

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中国免疫学杂志 2005年第12期21卷 905-909页

作者：毕明刚周文霞齐春会张永祥军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的研究快速老化小鼠(Senescence-accelerated mice,SAM)增龄过程中胸腺T细胞亚群的变化与notch1、Prese-nilin1、2(PS1、2)、HES1等notch信号转导通路相关基因mRNA表达变化及这两种变化的关系。方法选择出生后1～8周龄SAM,采用流式细... 详细信息

目的研究快速老化小鼠(Senescence-accelerated mice,SAM)增龄过程中胸腺T细胞亚群的变化与notch1、Prese-nilin1、2(PS1、2)、HES1等notch信号转导通路相关基因mRNA表达变化及这两种变化的关系。方法选择出生后1～8周龄SAM,采用流式细胞技术检测胸腺细胞亚群变化、用荧光实时定量PCR的方法检测notch1、PS1、PS2、HES1基因mRNA表达的动态变化。结果SAM出生1～2周,胸腺中CD4+CD8+细胞所占比例较高,4周龄后逐渐降低,各周龄SAMP8与SAMR1之间无显著性差异;在CD4+CD8-细胞比例上,SAM呈增龄性增加,1～6周龄的SAMP8与SAMR1之间无显著性差异,8周龄的SAMP8低于SAMR1;在CD4-CD8+细胞比例上,SAM呈增龄性增加,4周龄后的SAMP8均明显高于SAMR1;notch1、PS2、HES1基因mR-NA表达量呈增龄性增加,各周龄SAMP8的notch1基因表达水平高于SAMR1,4周龄后SAMP8的PS2、HES1基因表达水平高于SAMR1;PS1基因mRNA表达量呈增龄性降低,4周龄后的SAMP8低于SAMR1。结论notch1、PS2、HES1的表达与胸腺CD4-CD8+细胞的分化呈正相关,PS1表达与胸腺CD4-CD8+细胞的分化呈负相关。

关键词：胸腺细胞分化 notch信号快速老化小鼠表达关系相关基因 CD8^+细胞基因mRNA表达 notch1 mRNA表达量 SAMP8

脊髓损伤后notch信号对神经再生的研究现状

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中国康复医学杂志 2016年第4期31卷 485-488页

作者：李灵玲周达岸辽宁医学院辽宁省锦州市121000 辽宁医学院附属第三医院

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后首先表现为脊髓组织及结构直接被破坏,继而在损伤局部发生缺血、缺氧、创伤后炎症反应、细胞凋亡等一系列变化,致使神经元变性坏死、神经胶质细胞修复功能被抑制、损伤部位相连的远端轴突出现慢性... 详细信息

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后首先表现为脊髓组织及结构直接被破坏,继而在损伤局部发生缺血、缺氧、创伤后炎症反应、细胞凋亡等一系列变化,致使神经元变性坏死、神经胶质细胞修复功能被抑制、损伤部位相连的远端轴突出现慢性脱髓鞘改变,进而导致神经功能障碍。且脊髓损伤后的炎性环境使损伤区域聚集大量胶质细胞,并分泌过多的细胞外基质,从而形成瘢痕组织,

关键词： notch信号脊髓损伤神经再生慢性脱髓鞘胶质细胞神经干细胞分泌过多脊髓组织细胞外基质变性坏死

阻断notch信号对疫苗增强性免疫病理的作用

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中国病原生物学杂志 2017年第3期12卷 214-218页

作者：李宏勇韩艳娟田新利林玲辉刘建勋曾瑞红邢台医学高等专科学校河北邢台054000 河北医科大学免疫学教研室

目的探讨阻断notch信号对FI-RSV疫苗增强性免疫病理的调节作用。方法制备加入佐剂Al(OH)3的FI-RSV疫苗,肌注免疫C57BL/6小鼠2次,检测抗体;攻毒后,检测各组体重变化,并作肺组织切片及染色检查和细胞因子转录表达检测。结果免疫前各组血清... 详细信息

目的探讨阻断notch信号对FI-RSV疫苗增强性免疫病理的调节作用。方法制备加入佐剂Al(OH)3的FI-RSV疫苗,肌注免疫C57BL/6小鼠2次,检测抗体;攻毒后,检测各组体重变化,并作肺组织切片及染色检查和细胞因子转录表达检测。结果免疫前各组血清IgG抗体水平无显著差异;免疫后,FI-RSV+Al(OH)_3组体重下降显著;病理切片PAS染色显示FI-RSV+Al(OH)_3和FI-RSV+Al(OH)_3+L-685,458组的粘液分泌均较明显,病理切片HE染色显示FI-RSV+Al(OH)_3和FI-RSV+Al(OH)_3+L-685,458组肺部均显示大量炎症细胞浸润,炎症反应较强,FI-RSV+Al(OH)_3组炎症反应倾向于肺泡壁,FI-RSV+Al(OH)_3+L-685,458组炎症反应倾向于气管壁和血管周;FIRSV+Al(OH)_3组肺组织RSV-N基因的表达量与FI-RSV+Al(OH)_3+L-685,458组比较差异无统计学意义(P>0.05),FI-RSV+Al(OH)_3组的IFN-γ、TNF-α、T-bet、IL-17、ROR-γt基因的表达量显著高于其他两组(Pnotch信号阻断后诱发的Th2型优势应答及以气管壁和血管周反应的炎症反应更强。

关键词：呼吸道合胞病毒 notch信号佐剂疫苗