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nogo receptor expression in microglia/macrophages during experimental autoimmune encephalomyelitis progression

Neural Regeneration Research 2018年第5期13卷 896-907页

作者： Amani A.Alrehaili Jae Young Lee Maha M.Bakhuraysah Min Joung Kim Pei-Mun Aui Kylie A.Magee Steven Petratos Department of Neuroscience Central Clinical School Monash University Department of Clinical Laboratories College of Applied Medical Sciences Taif University Toolgen Inc. Gasan Digital-Ro

Myelin-associated inhibitory factors within the central nervous system（CNS） are considered to be one of the main obstacles for axonal regeneration following disease or injury. The nogo receptor 1（NgR1） has been well documented to play a key role in limiting axonal regrowth in the injured and diseased mammalian CNS. However, the role of nogo receptor in immune cell activation during CNS inflammation is yet to be mechanistically elucidated. Microglia/macrophages are immune cells that are regarded as pathogenic contributors to inflammatory demyelinating lesions in multiple sclerosis（MS）. In this study, the animal model of MS, experimental autoimmune encephalomyelitis（EAE） was induced in ngr1^＋/＋ and ngr1^–/– female mice following injection with the myelin oligodendrocyte glycoprotein（MOG_（35–55）） peptide. A fatemap analysis of microglia/macrophages was performed throughout spinal cord sections of EAE-induced mice at clinical scores of 0, 1, 2 and 3, respectively（increasing locomotor disability） from both genotypes, using the CD11 b and Iba1 cell markers. Western immunoblotting using lysates from isolated spinal cord microglia/macrophages, along with immunohistochemistry and flow cytometric analysis, was performed to demonstrate the expression of nogo receptor and its two homologs during EAE progression. Myelin protein engulfment during EAE progression in ngr1^＋/＋ and ngr1^–/– mice was demonstrated by western immunblotting of lysates from isolated spinal cord microglia/macrophages, detecting levels of nogo-A and MOG. The numbers of M1 and M2 microglia/macrophage phenotypes present in the spinal cords of EAE-induced ngr1^＋/＋ and ngr1^–/– mice, were assessed by flow cytometric analysis using CD38 and Erg-2 markers. A significant difference in microglia/macrophage numbers between ngr1^＋/＋ and ngr1^–/– mice was identified during the progression of the clinical symptoms of EAE, in the white versus gray matter regions of the spinal cord. This difference was unrelated to the expression of Ng R on these macrophage/microglial

关键词： microglia experimental autoimmune encephalomyelitis nogo receptor myelin-associated inhibitory factors （MAIFs） nogo a neural regeneration

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甘露醇对骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆模型大鼠行为学及nogo蛋白表达影响

甘露醇对骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆模型大鼠行为学及Nogo蛋...

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作者：阳玉群广西医科大学

学位级别：硕士

第一章血管性痴呆大鼠模型的制备 [目的]探讨制备理想VD动物模型的方法,为进行BMSCs移植制备模型。 [方法]使用Morris水迷宫对实验大鼠进行初筛,以剔除在95%参考值范围以外的SD大鼠,将筛选出的实验鼠根据随机原则分为假手术组(10只)和... 详细信息

第一章血管性痴呆大鼠模型的制备 [目的]探讨制备理想VD动物模型的方法,为进行BMSCs移植制备模型。 [方法]使用Morris水迷宫对实验大鼠进行初筛,以剔除在95%参考值范围以外的SD大鼠,将筛选出的实验鼠根据随机原则分为假手术组(10只)和模型组(77只)。模型组采用改良二血管结扎法(间隔三天分次结扎双侧颈总动脉)制备VD大鼠模型,假手术组实施同样的手术操作,但是不结扎双侧颈总动脉,同等条件笼养4周后,再次行水迷宫实验,以测定两组大鼠的空间学习记忆能力变化,筛选出造模成功的VD大鼠。 [结果]90只大鼠经水迷宫实验初筛后剔除3只,纳入实验87只大鼠随机分成假手术组(10只)和模型组(77只)。造模前,两组的逃避潜伏期和平台象限滞留时间差异没有统计学意义(P>0.05),造模后,两组的逃避潜伏期和平台象限滞留时间差异有统计学意义(Pnogo蛋白及其受体表达量的变化,探讨甘露醇对静脉移植BMSCs治疗VD大鼠模型疗效的影响及机制。 [方法]造模成功的VD大鼠随机分为五组,①模型对照组8只(不进行任何处理),②甘露醇组10只(尾静脉注射37℃、20%甘露醇溶液,1.5g/kg),③培养基组10只(尾静脉注射1m工无血清低糖培养基),④BMSCs组13只(尾静脉注射细胞浓度为1×106个/ml的第三代BMSCs)⑤甘露醇预处理BMSCs组14只(尾静脉注射37℃、20%甘露醇溶液,1.5g/kg,10-20min后,注射细胞浓度为1×108个/m1的第三代BMSCs),此外设立假手术组9只。同等条件下笼养4周后,行水迷宫实验检测各组大鼠的空间学习记忆能力,使用免疫组化检测各组大鼠海马CA1区的nogo a蛋白及其受体表达水平的变化。 [结果]BMSCs组与模型对照组、甘露醇组、培养基组比较,逃避潜伏期缩短,平台象限滞留时间延长,差异具有统计学意义(P0.05),两组的平台象限滞留时间比较,差异也没有统计学意义(P>0.05)。 BMSCs组海马CA1区nogo a蛋白及其受体免疫组化阳性产物比模型对照组、甘露醇组、培养基组表达量少,染色浅;甘露醇预处理BMSCs组的nogo a蛋白及其受体染色不但比模型对照组、甘露醇组、培养基组浅,而且也比BMSCs组浅,阳性产物也较少,但染色的深度及面积超过假手术组。 [结论]尾静脉注射移植第三代BMSCs能够改善VD大鼠的空间学习记忆能力。经过甘露醇预处理后再行尾静脉注射移植BMSCs使VD大鼠的空间学习记忆能力改善效果优于单独注射BMSCs的VD

关键词：血管性痴呆动物模型大鼠骨髓间充质干细胞培养鉴定干细胞甘露醇 nogo a nogo蛋白受体

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nogo a在少突胶质细胞瘤中的表达及意义

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目的探讨 nogo a 蛋白免疫标记少突胶质细胞瘤的可行性。方法收集25例少突胶质细胞瘤(包括少突胶质细胞瘤 WHOⅡ级10例, WHOⅢ级7例,混合型少突星形细胞瘤8例)的石蜡标本,选取5例星形细胞瘤及3例中枢神经细胞瘤的石蜡标本作为分析参照,采用免疫组化方法检测 nogo a 蛋白、GFAP 及 Syn 三种指标在上述各肿瘤中的表达。结果 nogo a 蛋白在17/17例“纯”少突胶质细胞瘤中均呈广泛的强阳性表达,在8/8例混合型少突星形细胞瘤中呈局灶阳性表达,在5例星形细胞瘤中呈阴性表达,在3例中枢神经细胞瘤中只呈现点状表达;GFAP 在8/17“纯”少突胶质细胞瘤中呈散在的灶状和点状阳性表达,在8/8例混合型少突星形细胞瘤中呈局灶阳性表达,在5/5 例星形细胞瘤中呈阳性表达;Syn 在5/17“纯”少突胶质细胞瘤中只呈现点状阳性表达,8例混合型少突星形细胞瘤中仅有2例出现点状表达,5例星形细胞瘤呈阴性表达,而在3例中枢神经细胞瘤中呈现弥漫阳性。结论 nogo a 蛋白可以将少突胶质细胞瘤成分特异性地标记出来,具有作为少突胶质细胞瘤有效标记物的潜在价值。

关键词： nogo a GRAP Syn 少突胶质细胞瘤

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