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老年痴呆症相关基因nicastrin的转录调控(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第8期36卷 994-1002页

作者：杨眉蔡芳潘乾龙志高夏家辉夏昆张灼华医学遗传学国家重点实验室中南大学长沙410078 生物科学与技术学院中南大学长沙410078

APP蛋白经过降解,形成老年痴呆症患者脑内老年斑的主要成分.由PS(早老素),NCT,PEN-2和APH-14种膜蛋白组成的γ分泌酶催化该降解过程.为了了解人类nicastrin(NCT)基因的转录调控机制,确定了其在人脑中的转录起始位点以及其编码区上游大... 详细信息

APP蛋白经过降解,形成老年痴呆症患者脑内老年斑的主要成分.由PS(早老素),NCT,PEN-2和APH-14种膜蛋白组成的γ分泌酶催化该降解过程.为了了解人类nicastrin(NCT)基因的转录调控机制,确定了其在人脑中的转录起始位点以及其编码区上游大小不等片段的转录起始活性.EMSA分析证实NCT启动子区的4个AP-1结合位点和2个NFAT结合位点能够与相应的转录因子结合,能够改变转录因子调控能力的定点突变和PDTC诱导使得NCT启动子在HeLa细胞和大鼠皮质神经元中的启动活性都有所改变.以上结果说明:AP-1和NFAT确实参与了人类NCT基因的转录调控.

关键词：老年痴呆症 nicastrin 启动子转录调控 AP-1 NFAT

nicastrin启动子区多态性与散发阿尔茨海默病相关性研究

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中国神经精神疾病杂志 2009年第3期35卷 159-163页

作者：马中华丛琳王珊贾建平董秀敏首都医科大学宣武医院神经内科北京100053

目的探讨nicastrin(NCSTN)基因启动子区多态性与散发阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer s dis-ease,SAD)发病的关系及其机制。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和直接测序的方法对中国北方汉族359例SAD患者和331名正... 详细信息

目的探讨nicastrin(NCSTN)基因启动子区多态性与散发阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer s dis-ease,SAD)发病的关系及其机制。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和直接测序的方法对中国北方汉族359例SAD患者和331名正常对照者NCSTN基因启动子区单核苷酸多态性位点(SNP)进行筛查,基因分型后,进行病例对照-相关分析。构建三种不同基因型启动子质粒,通过双荧光报告基因系统检测不同启动子质粒的转录活性。结果①中国北方人群中的NCSTN基因启动子区ATG上游2245 bp范围内存在3个SNP:-1216C/A(rs2147471),-796T/G(rs10752637)和-436C/T(rs1324738);②-1216C/A和-796T/G的基因型频率在各自的SAD组和正常对照组中的分布差异有统计学意义;③三种启动子质粒的转录活性差异无统计。结论NCSTN启动子区SNP:-796T/G和-1216C/A,与SAD的发病具有相关性,但未发现这两个位点具有病理学功能。

关键词：阿尔茨海默病 nicastrin 启动子单核苷酸多态性位点

阿尔兹海默病相关基因nicastrin启动子的克隆和鉴定

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中南大学学报（医学版） 2006年第1期31卷 9-13页

作者：杨眉蔡芳王瑞山潘乾龙志高邓小云夏昆夏家辉张灼华中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410008

目的:克隆和鉴定与阿尔兹海默病发生有关的γ-分泌酶的组成蛋白之一n icastrin(NCT)基因的启动子,用于开展其转录调控机制的研究。方法:用PCR方法从人基因组DNA中分离NCT基因编码区上游大小约为1.8 kb的片段并以此为基础对启动子进行两... 详细信息

目的:克隆和鉴定与阿尔兹海默病发生有关的γ-分泌酶的组成蛋白之一n icastrin(NCT)基因的启动子,用于开展其转录调控机制的研究。方法:用PCR方法从人基因组DNA中分离NCT基因编码区上游大小约为1.8 kb的片段并以此为基础对启动子进行两端删除分析,分别扩增大小不等的片段,与pGL3-Enhancer荧光素酶报告基因载体质量组,通过瞬时转染Hela细胞,细胞裂解液进行双荧光素酶活性分析,分离NCT基因的启动子区。结果:NCT基因启动子的420 bp片段在Hela细胞中具有最强的启动活性,另237 bp片段为有活性的最小片段。结论:NCT启动子很可能位于翻译起始位点上游-432/-133处,其基础启动子位于-359/-90。

关键词：阿尔兹海默病 nicastrin 启动子

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nicastrin与THAP7的相互作用

Nicastrin与THAP7的相互作用

作者：易艳琼厦门大学

学位级别：硕士

阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease,AD）是一种渐进性神经退行性疾病,在AD患者脑内有两个明显的组织病理学特征:即细胞内神经原纤维缠结（Neurofibrillary Tangle,NFT）和细胞外的淀粉样斑（Senile Plaque,SP）。SPs中含有大量的β... 详细信息

阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease,AD）是一种渐进性神经退行性疾病,在AD患者脑内有两个明显的组织病理学特征:即细胞内神经原纤维缠结（Neurofibrillary Tangle,NFT）和细胞外的淀粉样斑（Senile Plaque,SP）。SPs中含有大量的β-淀粉样蛋白（beta-Amyloid protein,Aβ）。Aβ是淀粉样前体蛋白（APP）经过β-和γ-分泌酶连续切割产生的,而nicastrin（NCT）是γ-分泌酶复合体的重要组成成分之一。最近的研究表明它在γ-分泌酶的组装和成熟中扮演重要的角色,它调节γ-分泌酶复合体其他组分的稳定、转运等过程,同时它作为γ-分泌酶底物结合位点,赋予了γ-分泌酶广泛的底物特异性。为了进一步认识和了解NCT的生物学功能,以及它在阿尔茨海默症发病过程中的作用,我们实验室以NCT蛋白胞内端的686—709氨基酸为诱饵蛋白,通过酵母双杂交方法在人胎脑cDNA文库进行筛选,鉴定出一个在酵母中能够与NCT相互作用的蛋白,THAP7,其具有能够与染色质和组蛋白相结合,抑制基因转录的作用。在本课题中我们通过GST pull-down试验和免疫共沉淀实验证实NCT和THAP7在体外和哺乳动物细胞内都能发生相互作用。在293swedish细胞中过度表达THAP7能够使NCT的mRNA水平降低,但却引起NCT和γ-分泌酶其它组分的蛋白水平增加。而过度表达THAP7也可以使Aβ和sAPPα分泌都增加,同时使APPCTFs水平增加。我们在N2a/695细胞中也得到相似的结果。这些结果说明THAP7在调节NCT的过程中可能具有双重功能:在细胞核内,THAP7作为转录抑制因子参与了NCT的转录抑制;在细胞质内,THAP7和NCT相互作用并稳定了NCT,导致γ-分泌酶其它组分的蛋白水平增加,因此提高了γ-分泌酶的活性,产生更多的Aβ。这些研究提供了一个调节NCT和γ-分泌酶活性的靶点,并且阐明THAP7除了转录抑制以外还有其它的功能。

关键词：阿尔茨海默症 nicastrin Aβ THAP7

蛋白酶体抑制剂对神经细胞nicastrin表达的影响

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中国病理生理杂志 2010年第6期26卷 1085-1090页

作者：骆世芳龙志敏高宝兵汪克建贺桂琼重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学解剖教研室重庆400016

目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结... 详细信息

目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术、免疫荧光双标技术,检测蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT的蛋白表达变化。结果:Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性转染的NCT的表达显著增强,高度特异的蛋白酶体抑制剂lacta-cystin对NCT蛋白的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;放射性同位素脉冲示踪结果显示,蛋白酶体抑制剂可显著增强细胞内新合成的NCT蛋白的表达水平,其增强作用是通过阻止[35S]-NCT的蛋白降解来实现的;免疫荧光双标结果提示,NCT与泛素在细胞内共存。结论:神经细胞内NCT的降解由蛋白酶体途径介导;NCT在降解之前经泛素化修饰。

关键词： nicastrin 蛋白酶体抑制剂神经元

人源γ-分泌酶的重要亚基nicastrin蛋白表达与纯化

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基因组学与应用生物学 2015年第5期34卷 909-916页

作者：齐佩瑾吴更微生物代谢国家重点实验室上海交通大学生命科学技术学院上海200240

γ-分泌酶是具有天冬氨酸内切酶活性跨膜蛋白复合物,与阿尔茨海默症的病理特征的β-淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)生成有关。nicastrin(NCT)是Ⅰ型单次跨膜糖蛋白,具有709个氨基酸。它是γ-分泌酶的重要组分,具有募集和结合γ-分... 详细信息

γ-分泌酶是具有天冬氨酸内切酶活性跨膜蛋白复合物,与阿尔茨海默症的病理特征的β-淀粉样蛋白(amyloid proteinβ,Aβ)生成有关。nicastrin(NCT)是Ⅰ型单次跨膜糖蛋白,具有709个氨基酸。它是γ-分泌酶的重要组分,具有募集和结合γ-分泌酶底物的功能,参与γ-分泌酶的组装过程。本研究中,利用昆虫杆状病毒表达系统表达人源NCT全长和胞外结构域,得到了纯度较好的蛋白,用于晶体初筛。由于nicastrin自身高度糖基化,使用Endo H和PNGase F去糖基化酶进行体外脱糖基作用,使得蛋白均一度提高,纯化到较稳定的胞外结构域蛋白,为下一步对人源nicastrin蛋白进行结构生物学研究奠定了基础。

关键词： γ-分泌酶 nicastrin 蛋白表达纯化去糖基化

蛋白酶体抑制剂处理神经细胞系后nicastrin的表达变化及其与Aβ的关系

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基础医学与临床 2011年第5期31卷 475-479页

作者：龙志敏赵蕾骆世芳汪克建贺桂琼重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016 重庆医科大学解剖教研室重庆400016

目的探讨蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内nicastrin(NCT)的表达变化,及其与γ-分泌酶活性和Aβ生成的关系。方法运用亚细胞器分级分离技术、免疫共沉淀、Western blot和ELISA等检测神经细胞内NCT的表达及Aβ水平。结果正常情况下NCT主... 详细信息

目的探讨蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内nicastrin(NCT)的表达变化,及其与γ-分泌酶活性和Aβ生成的关系。方法运用亚细胞器分级分离技术、免疫共沉淀、Western blot和ELISA等检测神经细胞内NCT的表达及Aβ水平。结果正常情况下NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,极少量分布于溶酶体,蛋白酶体抑制剂Lac-tacystin处理后NCT水平升高(P<0.001),且细胞内增多的NCT也主要聚集在内质网和高尔基复合体;NCT与泛素在细胞内共存;NCT的蛋白降解不受PS的影响;NCT降解受阻可引起细胞内γ-分泌酶的底物C99、C83显著减少,而γ-分泌酶的产物Aβ40、Aβ42的生成显著增多(P<0.01)。结论 NCT的降解可通过泛素-蛋白酶体途径实现,蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT水平升高,且增多的NCT可促进APP的代谢及Aβ的生成。

关键词： nicastrin 蛋白酶体抑制剂泛素化修饰 γ-分泌酶 Aβ

老年性痴呆相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性分析

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中山大学学报（医学科学版） 2008年第1期29卷 5-9页

作者：李中丘东海刘红英方莹莹中山大学附属第一医院神经科广东广州510080

【目的】分析老年性痴呆(Alzheimer病)相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性(SNP),探讨其基因表达可能的分子调控机制。【方法】扩增nicastrin基因ATG上游约1.0kp启动子区DNA片段,与萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic进行重组... 详细信息

【目的】分析老年性痴呆(Alzheimer病)相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性(SNP),探讨其基因表达可能的分子调控机制。【方法】扩增nicastrin基因ATG上游约1.0kp启动子区DNA片段,与萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic进行重组质粒的克隆与鉴定,确立启动子区候选功能SNP及其相应位点结合的转录调节因子。应用Lipofectamine 2000对包含功能SNP的重组质粒进行CRL-2137细胞瞬时转染,双荧光素酶相对活性分析及电泳迁移率变动分析。【结果】nicastrin基因启动子区960 bp DNA片段内存在功能SNP_rs10752637-922 G→T,与其相应位点结合的转录因子为hepatic leukemia factor(HLF),SNP_rs10752637-922 T的序列结构对启动萤火虫荧光素酶报告基因的表达功能较SNP_rs10752637 -922 G的序列结构强(Pnicastrin基因核心启动子应该在960 bp DNA片段内,SNP_rs10752637-922 G→T可能是启动子区有功能位点突变,包含rs10752637-922 G/T的核苷酸序列结构可能通过与HLF在内的转录调节因子的作用来实现对nicastrin基因表达差异的调控。

关键词： Alzheimer病 nicastrin 启动子单核苷酸多态性电泳迁移率变动分析

溶酶体酶抑制剂对神经细胞内nicastrin表达水平的影响

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中国老年学杂志 2012年第14期32卷 2975-2978页

作者：彭雪华龙志敏骆世芳贺桂琼重庆医科大学儿童医院放射科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心

目的探讨溶酶体酶抑制剂对阿尔茨海默病(AD)相关蛋白nicastrin(NCT)表达的影响,以期明确NCT的蛋白降解是否与溶酶体途径有关。方法在用人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用溶酶体酶抑制剂处理NCT细胞株,并结合... 详细信息

目的探讨溶酶体酶抑制剂对阿尔茨海默病(AD)相关蛋白nicastrin(NCT)表达的影响,以期明确NCT的蛋白降解是否与溶酶体途径有关。方法在用人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用溶酶体酶抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western印迹、亚细胞器的分级分离、免疫荧光双标等技术,检测溶酶体酶抑制剂处理后神经细胞内NCT的表达变化。结果亚细胞器分级分离实验显示,正常情况下神经细胞内的NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,少量NCT分布于溶酶体。Western印迹结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性成熟NCT(mNCT)的表达显著增强,且溶酶体酶抑制剂氯喹对mNCT蛋白表达的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性,但溶酶体抑制剂对非成熟NCT(imNCT)的表达无影响;免疫荧光双标结果显示,溶酶体酶抑制剂处理后,细胞内NCT的表达增强,且增多的NCT主要聚集在溶酶体内。结论神经细胞内mNCT的降解与溶酶体途径有关。

关键词：溶酶体酶抑制剂 nicastrin 神经细胞蛋白降解