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红藻氨酸致癫痫持续状态大鼠海马neuropilin-2 mRNA及其蛋白表达的研究

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中风与神经疾病杂志 2010年第10期27卷 882-885页

作者：邓晓清郑金瓯余璐陈子蓉广西南宁市第八人民医院神经内科广西南宁530001 广西医科大学第一附属医院神经内科广西南宁530021

目的研究轴索导向分子NPN-2mRNA及其蛋白对癫痫持续状态(SE)后大鼠海马内神经纤维外向性生长和突触重建中的调控作用。方法采用侧脑室内注射红藻氨酸(KA)制作TLE大鼠模型,用Nissl染色、原位杂交和免疫组织化学的方法,分别检测致SE后1d... 详细信息

目的研究轴索导向分子NPN-2mRNA及其蛋白对癫痫持续状态(SE)后大鼠海马内神经纤维外向性生长和突触重建中的调控作用。方法采用侧脑室内注射红藻氨酸(KA)制作TLE大鼠模型,用Nissl染色、原位杂交和免疫组织化学的方法,分别检测致SE后1d、1w、2w、3w、4w大鼠海马齿状回(DG)、CA1区、CA3区、门区神经元丢失程度以及NPN-2mRNA及其蛋白的表达。结果 KA致SE后1d开始出现神经元丢失,至4w神经元丢失明显增多。KA致SE后1d,NPN-2mRNA及其蛋白在DG和CA1区表达明显下降,持续至3w(P0.05);NPN-2mRNA及其蛋白在门区、CA3区表达实验组与对照组无明显差别(P>0.05)。结论 KA致SE后,海马DG及CA1区神经元下调NPN-2mRNA及其蛋白的表达,促进DG及CA1区神经纤维外向性生长和突触的重建。

关键词：红藻氨酸癫痫持续状态海马 neuropilin-2

microRNA-486-5p通过下调neuropilin-2的表达抑制结肠癌的生长及淋巴结转移

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microRNA-486-5p通过下调neuropilin-2的表达抑制结肠癌的生长及...

作者：张冉冉滨州医学院

学位级别：硕士

目的:既往体外细胞实验证明miRNA-486-5p可以抑制结肠癌细胞SW620的增殖、迁移能力并加速其凋亡。本实验旨在通过体内实验进一步证明miRNA-486-5p对人结肠癌细胞系SW620裸鼠皮下移植瘤生长及微淋巴管生成的影响并探讨其可能的作用机制... 详细信息

目的:既往体外细胞实验证明miRNA-486-5p可以抑制结肠癌细胞SW620的增殖、迁移能力并加速其凋亡。本实验旨在通过体内实验进一步证明miRNA-486-5p对人结肠癌细胞系SW620裸鼠皮下移植瘤生长及微淋巴管生成的影响并探讨其可能的作用机制。方法:将15只裸鼠按简单随机法分为3组,实验组(miRNA-486-5p组)、阴性对照组(NC组)、空白对照组(Blank组),每组5只,分别于皮下接种SW620细胞,待成瘤后miRNA-486-5p组、NC组、Blank组每3天分别于瘤周注射miRNA-486-5p过表达质粒、空白质粒载体及等量PBS缓冲液。观察裸鼠一般情况及比较各组裸鼠皮下瘤体的体积及重量。接种21天后取出皮下瘤组织,用免疫组织化学染色法比较各组移植瘤中neuropilin-2 (NRP2)蛋白的分布及微淋巴管生成情况。用Western-blot法分析比较NRP2的表达情况。结果:miRNA-486-5p组瘤体生长速度明显低于NC组与Blank组;取材时miRNA-486-5p组裸鼠皮下种植瘤的体积为(0.32±0.12) cm3, NC组为(0.77±0.31) cm3, Blank 组为(0.82 ±0.18) cm3;miRNA-486-5p 组瘤体体积显著小于其他两组瘤体体积(P = 0.006 20 ± 0.84),miRNA-486-5p 组移植瘤中 NRP2的表达量较另外两组下降(P=0.00020裸鼠皮下移植瘤的生长速度及重量可明显受到抑制,微淋巴管密度明显较少,其作用可能是通过下调NRP2的表达实现的,miRNA-486-5p有望成为结肠癌治疗的新靶点。

关键词： miRNA-486-5p 结肠癌 neuropilin-2 肿瘤生长淋巴管

靶向neuropilin-2单克隆抗体对胰腺癌细胞株PANC-1生物学功能的影响及其分子机制的探究

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靶向Neuropilin-2单克隆抗体对胰腺癌细胞株PANC-1生物学功能的影...

作者：周宗浪安徽医科大学

学位级别：硕士

目的胰腺癌是常见的恶性消化道实体肿瘤之一,其起病隐匿,预后差,致死率高且易转移及复发等特点,严重威胁着全球人类的健康安全。手术治疗在胰腺癌的治疗策略中处于重要地位,外科手术治疗是目前公认的最佳治疗方法,然而由于胰腺癌起病隐... 详细信息

目的胰腺癌是常见的恶性消化道实体肿瘤之一,其起病隐匿,预后差,致死率高且易转移及复发等特点,严重威胁着全球人类的健康安全。手术治疗在胰腺癌的治疗策略中处于重要地位,外科手术治疗是目前公认的最佳治疗方法,然而由于胰腺癌起病隐匿的特点,仅有少部分患者可从手术治疗中受益。传统的放化疗在胰腺癌的治疗中也扮演着重要作用,然而传统的放化疗手段存在抗肿瘤效果不显著、特异性差、毒副作用大等缺点限制了其进一步临床使用。分子靶向治疗近年来在胰腺癌治疗中逐渐兴起并发挥着重要作用,具有广阔的研究及应用前景,因此开发更多的胰腺癌治疗靶点具有重要意义,近年来研究人员研究发现神经纤毛蛋白(neuropilins,NRPs)包括NRP-1和NRP-2,可以作为多种信号分子的共受体形式在在肿瘤血管生成、增殖、转移等过程中发挥着重要的作用。研究表明NRP-2在胰腺癌组织中高表达,并且其表达高低与胰腺癌患者预后有着密切关系。因此,NRP-2有望成为胰腺癌靶向治疗中新的治疗靶点。本课题旨在研究本实验室制备的靶向NRP-2单克隆抗体(NRP-2 mAb)观察其对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、粘附及凋亡的影响并探究其潜在的分子机制,以期能为以NRP-2 mAb作为胰腺癌新型分子靶向治疗的临床应用提供理论依据。方法1.利用杂交瘤技术制备NRP-2 mAb,随后用蛋白层析柱纯化收集得到的NRP-2mAb;凝胶电泳检测纯化后的抗体的纯度;ELISA及BCA蛋白测定法测定制备纯化后的抗体效价及浓度。之后,利用细胞免疫荧光技术观察NRP-2 mAb与胰腺癌细胞株PANC-1及MIA-PACA-2表面的NRP-2蛋白结合能力。2.利用GEPIA网站分析胰腺癌组织和正常胰腺组织的NRP-2表达差异,并进行kaplan-miere分析NRP-2与胰腺癌患者预后的关系;利用Linked Omics网站分析了NRP-2 mRNA与胰腺癌患者组织类型、患者总体生存率以及病理分期的关系;The Human Protein Atlas网站用来分析正常胰腺组织与肿瘤组织中NRP-2蛋白表达差异。3.利用CCK-8试验以及集落形成抑制实验检测NRP-2 mAb对胰腺癌细胞株PANC-1增殖能力的影响;利用Transwell实验观察NRP-2 mAb对PANC-1细胞迁移、侵袭的影响;粘附实验观察单克隆抗体能否抑制PANC-1粘附能力;流式细胞术检测不同作用浓度的抗体对胰腺癌细胞株PANC-1凋亡的影响;4.利用JC-1试验来探究NRP-2 mAb是否通过改变胰腺癌细胞株线粒体表面的膜电位来诱导胰腺癌细胞株PANC-1发生凋亡,并且利用Western Blotting技术检测不同浓度的NRP-2 mAb处理后,胰腺癌细胞株PANC-1凋亡相关蛋白(Caspase-3、Caspase-8、Bax、Bcl-2)和增殖、迁移、侵袭、粘附相关蛋白(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR)的表达情况。结果1.本实验中利用杂交瘤技术制备的NRP-2 mAb纯度为90.7%,效价约4×10,蛋白浓度为4.2 mg/m L。并且细胞免疫荧光实验表明NRP-2 mAb可以特异性结合胰腺癌细胞株PANC-1及MIA-PACA-2表面的NRP-2蛋白。***网站分析表明NRP-2蛋白及NRP-2 mRNA在胰腺癌的表达水平高于其在正常组织的表达量;NRP-2蛋白高表达患者的无病生存率均低于NRP-2蛋白低表达患者。Linked Omics网站分析表明NRP-2 mRNA与胰腺癌组织学类型、患者总体生存率存在相关性而与病理分期无关。The Human Protein Atlas数据库分析表明NRP-2蛋白在胰腺癌组织中的表达量显著高于正常组织中的表达。***-8及集落形成抑制实验表明NRP-2 mAb可以有效抑制胰腺癌细胞株增殖能力,并且呈剂量依赖性;Transwell实验结果表明NRP-2 mAb可以抑制胰腺癌细胞迁移、侵袭且同样随着抗体作用浓度的提高抑制效果逐渐增强;粘附实验结果表明NRP-2 mAb可以显著抑制胰腺癌细胞株PANC-1的粘附作用且同样随着抗体作用浓度的提高,抑制效果增强;流式细胞术表明NRP-2 mAb可以促进PANC-1凋亡的产生。***-1实验结果表明NRP-2 mAb可以改变胰腺癌细胞株PANC-1中线粒体膜电位,且呈现剂量依赖性;Western Blotting实验结果表明NRP-2 mAb可以降低胰腺癌细胞株PANC-1中Bcl-2蛋白表达量,同时增加Caspase-8、Caspase-3和Bax蛋白表达量。其它生物学功能分子机制结果表明NRP-2 mAb可以抑制PI3K、AKT及mTOR蛋白发生磷酸化。结论1.本课题组成功制备了具有高纯度、高效价的NR

关键词：胰腺癌 neuropilin-2 单克隆抗体生物学特性分子机制

shRNA沉默neuropilin-2对HCT-116结肠癌细胞裸鼠移植瘤的研究

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shRNA沉默Neuropilin-2对HCT-116结肠癌细胞裸鼠移植瘤的研究

作者：刘宇航华北理工大学

学位级别：硕士

目的通过体内实验探讨慢病毒介导RNA干扰技术（RNA interference,RNAi）沉默神经纤毛蛋白-2（neuropilin-2,NRP-2）对HCT-116结肠癌细胞裸鼠移植瘤的影响。方法采用携带红色荧光蛋白（Red fluorescent protein,RFP）及抗嘌呤霉素（Purom... 详细信息

目的通过体内实验探讨慢病毒介导RNA干扰技术（RNA interference,RNAi）沉默神经纤毛蛋白-2（neuropilin-2,NRP-2）对HCT-116结肠癌细胞裸鼠移植瘤的影响。方法采用携带红色荧光蛋白（Red fluorescent protein,RFP）及抗嘌呤霉素（Puromycin）特性的重组慢病毒介导将NRP-2-sh RNA转入到常规培养的HCT-116结肠癌细胞,荧光显微镜观测RFP的表达以判断转染效率。选择转染效率达到90%的HCT-116细胞种植于裸鼠皮下,建立裸鼠移植瘤模型:将30只裸鼠采用随机数表法分为三组,每组10只,空白对照组种植无处理的HCT-116细胞,阴性对照组种植转染nonsense-sh NC的HCT-116细胞,实验组种植转染NRP-2-sh RNA的HCT-116细胞。观察各组裸鼠移植瘤体积的变化。接种28d后处死裸鼠取出肿瘤组织,HE染色观察肿瘤组织的形态学特点,免疫组化法检测瘤组织中NRP-2的表达及微淋巴管和微血管的表达,q PCR检测NRP-2 m RNA的表达,Western blot对NRP-2的蛋白表达进行分析。结果1细胞实验:将感染复数（Multiplicity of infection,MOI）=60确定为Y18556、Y18557、Y18558组细胞感染的最佳MOI值,MOI=40确定为NC组细胞感染最佳MOI值。Puromycin浓度为10μg/ml,确定为最佳浓度。通过q PCR、Western blot确定Y18557组慢病毒转染后NRP-2的敲除效率最高,选择Y18557组进行后续裸鼠移植瘤模型构建。2裸鼠实验:根据预实验转染HCT-116细胞,以浓度为10μg/m L的Puromycin筛选细胞2周后,皮下种瘤,7d后接种部位可触及明显肿瘤结节,裸鼠全部造模成功,成瘤率100%。实验组瘤体明显小于空白对照组和阴性对照组,空白对照组和阴性对照组移植瘤持续快速生长,而实验组瘤体则明显生长缓慢。各个测量节点,实验组和空白对照组、阴性对照组相比移植瘤体积明显减小,差异具有统计学意义（P0.05）。接种28d后处死裸鼠,空白对照组（control）移植瘤最终体积为853.90±10.43mm,阴性对照组（NC）移植瘤最终体积为851.80±9.45mm,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤（最终体积为190.60±9.18 mm）抑制率最高分别为79.77%、80.41%。HE染色镜下观察,瘤组织呈中低分化腺癌特征:间质与实质分界清楚,癌细胞较大,呈圆形或椭圆形,异型性明显,细胞核核大、深染,形态大小不一,可见病理性核分裂象。空白对照组与阴性对照组相比无明显差异,实验组与其他两组相比可见大片坏死区域。免疫组化结果显示:与空白对照组及阴性对照组相比,实验组移植瘤组织中NRP-2蛋白的表达量、微淋巴管及微血管计数均显著减少,其差异均有统计学意义（P2在HCT-116结肠癌细胞裸鼠移植瘤组织中高表达,与空白对照组和阴性对照组（NC）相比,实验组（NRP-2-sh RNA）NRP-2 m RNA的相对表达量显著降低（P0.05）。Western blot结果显示NRP-2在HCT-116结肠癌细胞裸鼠移植瘤组织中高表达,空白对照组与阴性对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）,与空白对照组和阴性对照组（NC）相比,实验组（NRP-2-sh RNA）NRP-2的相对表达量显著降低（P2的表达后人结肠癌HCT-116裸鼠移植瘤的生长、肿瘤组织微血管和微淋巴管的形成均受到了显著抑制。图27幅;表17个;参129篇。

关键词： neuropilin-2 HCT-116 裸鼠慢病毒转染靶向治疗

靶向抑制neuropilin-2对小鼠淋巴管瘤的作用及其机制

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哈尔滨医科大学学报 2016年第5期50卷 411-416页

作者：唐先玲宫剑英杜玲玲关立南孙峻峰葛红岩刘平哈尔滨医科大学附属第一医院眼科医院黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第一医院心内科黑龙江哈尔滨150001

目的探讨抑制neuropilin-2(NP2)功能对小鼠淋巴管瘤的作用及其机制。方法建立不完全弗氏佐剂诱导的小鼠淋巴管瘤模型,将靶向抑制NP2的人工合成RNAi腺病毒载体注射至小鼠腹腔内。采用免疫荧光技术检测NP2表达下调后对小鼠淋巴管瘤新生血... 详细信息

目的探讨抑制neuropilin-2(NP2)功能对小鼠淋巴管瘤的作用及其机制。方法建立不完全弗氏佐剂诱导的小鼠淋巴管瘤模型,将靶向抑制NP2的人工合成RNAi腺病毒载体注射至小鼠腹腔内。采用免疫荧光技术检测NP2表达下调后对小鼠淋巴管瘤新生血管、新生淋巴管及肿瘤生长的影响。将靶向抑制NP2的RNAi腺病毒载体感染小鼠淋巴管内皮细胞后,通过免疫印迹方法检测ERK1/2、p38磷酸化水平的变化。结果小鼠腹腔内注射NP2 RNAi腺病毒载体后明显抑制了淋巴管瘤的生长和淋巴管的数量,但肿瘤新生血管的数量并无明显改变。另外,靶向抑制NP2的功能后,小鼠淋巴管内皮细胞ERK 1/2的磷酸化表达水平明显下降,而p38的磷酸化表达水平不变。结论抑制NP2功能后能够抑制不完全弗氏佐剂诱导的小鼠新生淋巴管瘤生成。

关键词：淋巴管瘤新生淋巴管内皮细胞 neuropilin-2

子宫内膜异位症患者血清neuropilin-1、neuropilin-2与病情及不孕关系

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中国计划生育学杂志 2022年第1期30卷 135-138页

作者：郭艳樊素珍林雁秦梦洁郑州大学第三附属医院 450000 郑州市妇幼保健院

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)患者外周血清中neuropilin-1(NRP-1)、neuropilin-2(NRP-2)与病情程度和合并不孕的关系。方法:选择2016年1月-2017年7月在本院住院的EMs患者104例为EMs组,健康体检育龄女性104例为对照组。采用美国生殖协... 详细信息

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)患者外周血清中neuropilin-1(NRP-1)、neuropilin-2(NRP-2)与病情程度和合并不孕的关系。方法:选择2016年1月-2017年7月在本院住院的EMs患者104例为EMs组,健康体检育龄女性104例为对照组。采用美国生殖协会分期标准(R-AFS)将EMs患者分为Ⅰ期(24例)、Ⅱ期(22例)、Ⅲ期(30例)和Ⅳ期(28例),合并不孕症组(45例)和非不孕症组(59例)。采用酶联免疫吸附测定法检测血清NRP-1、NRP-2水平,受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估诊断EMs合并不孕价值,采用多因素logistic回归分析EMs合并不孕的相关因素。结果:EMs组与对照组年龄、糖尿病、高血压、家族肿瘤史比较未见差异(P>0.05)。EMs组血清NRP-1、NRP-2水平高于对照组,且随着EMs病情加重水平增加,EMs合并不孕症患者水平高于非合并不孕者(均P2预测EMs合并不孕症的ROC曲线下面积分别为0.82(95%CI:0.74~0.92)和0.72(95%CI:0.63~0.81),最佳截点值27.02μg/L和22.84μg/L,此时诊断EMs合并不孕症的灵敏度分别为81.3%和70.3%,特异度分别为81.7%和71.1%。NRP-1>27.02μg/L、NRP-2>22.84μg/L是EMs合并不孕症的危险因素(P2异常升高且与患者病情和不孕呈正相关,二者对EMs合并不孕有一定预测价值。

关键词：子宫内膜异位症不孕症血清学 neuropilin-1 neuropilin-2 预测影响因素

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基于蛋白芯片技术研究参苈加颗粒对慢性心衰大鼠心肌neuropilin-2表达的影响

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西部中医药 2017年第9期30卷 15-18页

作者：周雪明张淼王科军袁颍超陈飞孙许涛李富震姜德友黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040

目的:应用蛋白芯片技术筛选并探讨参苈加颗粒对心力衰竭大鼠心肌neuropilin-2表达的影响。方法:将70只清洁级雄性Wi st ar大鼠随机抽取空白组15只,其余用阿霉素造模,将造模成功大鼠随机分为模型组和治疗组,分别给予参苈加颗粒和生理盐... 详细信息

目的:应用蛋白芯片技术筛选并探讨参苈加颗粒对心力衰竭大鼠心肌neuropilin-2表达的影响。方法:将70只清洁级雄性Wi st ar大鼠随机抽取空白组15只,其余用阿霉素造模,将造模成功大鼠随机分为模型组和治疗组,分别给予参苈加颗粒和生理盐水灌胃每日1次,28天后取大鼠左心室组织,用于HE染色和蛋白芯片分析。结果:HE染色显示空白组大鼠心肌正常;模型组大鼠心肌纤维增粗、紊乱,间质增生,少量炎症细胞浸润;治疗组大鼠心肌排列较整齐,间质无明显增生,未见炎症细胞浸润。蛋白芯片可见neuropilin-2存在差异性表达,与空白组相比,neuropilin-2在模型组的表达下调;与模型组比较,neuropilin-2在参苈加治疗组的表达上调;其余2组比较无表达差异。结论:参苈加颗粒可通过调节心肌neuropilin-2的表达改善心肌纤维化和心肌细胞凋亡,对慢性心衰大鼠心脏起保护作用。

关键词：心力衰竭蛋白芯片 neuropilin-2 参苈加颗粒

神经毡蛋白neuropilin-2相关信号通路研究进展

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临床医学进展 2023年第1期13卷 501-508页

作者：杨晓帆潘浩杨光路内蒙古医科大学内蒙古呼和浩特

神经毡蛋白2 (neuropilin-2, Npn-2)是Npn家族中重要成员之一,在神经系统中,Npn-2最初被认为是脑信号蛋白(Semaphorins, Sema)家族的受体,参与诱导轴突生长锥的塌陷,但随后研究发现,Npn-2也是血管内皮生长因子(VEGF)的受体,而血管内皮... 详细信息

神经毡蛋白2 (neuropilin-2, Npn-2)是Npn家族中重要成员之一,在神经系统中,Npn-2最初被认为是脑信号蛋白(Semaphorins, Sema)家族的受体,参与诱导轴突生长锥的塌陷,但随后研究发现,Npn-2也是血管内皮生长因子(VEGF)的受体,而血管内皮生长因子(VEGF)对神经元有营养作用,促进轴突的生长和迁移。此外,Npn-2还在其他疾病的发生发展中有突出作用,成为靶向治疗的热点。这篇综述着重于对近年Npn-2介导的信号通路进行一个系统的总结,其中一些神经系统外的信号通路可能给Npn-2在癫痫等神经系统疾病研究中提供思路和借鉴。

关键词： neuropilin-2 Sema3F VEGF 信号通路神经系统肿瘤

RNA干扰神经纤毛蛋白-2基因对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响

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中华医学杂志 2020年第48期100卷 3879-3883页

作者：丁冠一徐卫国郭尚詹琪琪杨鑫贾纯亮华北理工大学附属医院肿瘤外科唐山063000 唐山市人民医院胃肠外科唐山063000

目的探讨应用RNAi技术降低神经纤毛蛋白-2(NRP-2)表达后对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响。方法通过脂质体lip2000分别将NRP2-siRNA和NControl-siRNA转染入HCT-8中作为转染组和阴性对照组,加入磷酸盐缓冲液作为空白对照组,通过实时荧... 详细信息

目的探讨应用RNAi技术降低神经纤毛蛋白-2(NRP-2)表达后对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响。方法通过脂质体lip2000分别将NRP2-siRNA和NControl-siRNA转染入HCT-8中作为转染组和阴性对照组,加入磷酸盐缓冲液作为空白对照组,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法验证转染效果,采用细胞计数试剂盒(CCK)法、平板克隆实验和Ki-67蛋白染色实验检测3组细胞的增殖情况,吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)荧光染色实验检测3组细胞的凋亡情况。结果RT-qPCR和Western印迹法结果表明转染组细胞NRP-2 mRNA相对表达量和NRP-2蛋白含量降低(0.46±0.05比0.99±0.05和1.00±0.06,1.04±0.06比1.73±0.09和1.65±0.11)(均P24 h为0.53±0.04比0.82±0.07和0.87±0.07,48 h为0.54±0.05比1.00±0.09和1.17±0.05,72 h为0.75±0.05比1.31±0.13和1.50±0.03,96 h为1.05±0.04比1.46±0.09和1.86±0.06)(均P245.33±19.14和300.33±14.01,P22比8.36±0.09和8.70±0.21,P2表达可使结肠癌细胞HCT-8的增殖能力下降,凋亡能力上升。

关键词：结肠肿瘤 neuropilin-2 细胞增殖细胞凋亡