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大鼠急性脊髓损伤后neurod的时空表达

解剖学杂志 2015年第4期38卷 434-437页

作者：王锋简国坚王玮福建医科大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系福州350108 福建医科大学基础医学院神经生物学研究中心福州350108

目的:探讨神经源性分化因子neurod在大鼠急性脊髓损伤过程中的表达及意义.方法:以改良Allen''s法建立急性脊髓损伤(SCI)大鼠模型,以假手术组为对照,应用免疫组织化学、半定量RT-PCR、免疫印迹分别检测脊髓损伤后不同时间点neurod的表达... 详细信息

目的:探讨神经源性分化因子neurod在大鼠急性脊髓损伤过程中的表达及意义.方法:以改良Allen''s法建立急性脊髓损伤(SCI)大鼠模型,以假手术组为对照,应用免疫组织化学、半定量RT-PCR、免疫印迹分别检测脊髓损伤后不同时间点neurod的表达变化.结果:neurod特异性表达于脊髓灰质,与对照组相比,急性脊髓损伤后3d,neurod mRNA的相对表达量明显增加,5d达到峰值,7d后回落;neurod的蛋白相对表达量则在急性脊髓损伤5d后明显升高,持续至第7天,14d明显回落.结论:急性脊髓损伤可上调neurod表达水平,提示neurod参与了急性脊髓损伤后的病理过程.

关键词：大鼠脊髓损伤 neurod

慢性复合应激对成年大鼠海马neurod表达的影响

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神经解剖学杂志 2009年第2期25卷 141-146页

作者：肖娟娟刘能保王秋桂张敏海周艳玲刘向前华中科技大学同济医学院组织与胚胎学教研室武汉430030 咸宁学院医学院组织与胚胎学教研室咸宁437100

本实验通过观察慢性复合应激对成年大鼠海马neurod表达的影响,探讨慢性复合应激与海马神经发生的关系。将成年雄性大鼠32只随机分为慢性复合应激组(简称应激组)和正常对照组(简称对照组)。应激组动物每天不规律交替暴露于四种复合应激原... 详细信息

本实验通过观察慢性复合应激对成年大鼠海马neurod表达的影响,探讨慢性复合应激与海马神经发生的关系。将成年雄性大鼠32只随机分为慢性复合应激组(简称应激组)和正常对照组(简称对照组)。应激组动物每天不规律交替暴露于四种复合应激原中,共持续6周。然后运用免疫组织化学染色、Western-blot和RT-PCR技术分别观察海马内neurod阳性神经元数量、neurod蛋白水平和核酸水平的变化。结果显示:慢性复合应激组动物海马齿状回neurod阳性神经元数量明显增多(Pneurod蛋白的表达明显增强(Pneurod mRNA水平明显上调(Pneurod阳性神经元数量增多和neurod表达水平升高,提示慢性复合应激可能促进大鼠海马的神经发生。

关键词：慢性复合应激海马 neurod 神经发生大鼠

顺铂致聋后大鼠耳蜗螺旋神经元neurod的表达

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中华耳科学杂志 2012年第2期10卷 241-245页

作者：王娟王亚菲蒋兴旺米文娟邱建华第四军医大学西京医院全军耳鼻咽喉头颈外科中心西安710032

目的检测神经分化因子neurod在大鼠耳蜗螺旋神经元顺铂损伤后的表达变化。方法通过免疫组织化学及Real-TimePCR技术,观察耳蜗螺旋神经元损伤1d、3d、5d后neurod的表达变化。正常成年SD大鼠32只随机分为对照组(生理盐水5ml/kg,1次/d,腹... 详细信息

目的检测神经分化因子neurod在大鼠耳蜗螺旋神经元顺铂损伤后的表达变化。方法通过免疫组织化学及Real-TimePCR技术,观察耳蜗螺旋神经元损伤1d、3d、5d后neurod的表达变化。正常成年SD大鼠32只随机分为对照组(生理盐水5ml/kg,1次/d,腹腔注射,连续5d),用药1d组(顺铂5mg/kg,腹腔注射),用药3d组(顺铂5mg/kg,1次/d,腹腔注射,连续3d),用药5d组(顺铂5mg/kg,1次/d,腹腔注射,连续5d),每组8只,建立顺铂耳毒性模型。采用Real-TimePCR、免疫组织化学染色检测不同时间螺旋神经元neurod的mRNA及蛋白表达变化。结果成功建立顺铂耳毒性大鼠模型,随着用药时间的延长,神经分化因子neurod在耳蜗螺旋神经元中呈动态变化。neurod的mRNA和蛋白表达在用药1d及3d组分别为2.17±0.39、1.15±0.20及7.02±0.69、2.42±0.40,与对照组及用药5d组比较具有统计学意义(P值neurod在用药1d后开始增加,3d后达到高峰,5d后下降;在用药早期有一过性表达增强,后期表达下降同时听力损失明显。表明neurod可能参与顺铂损伤螺旋神经元后的修复过程。

关键词： neurod 大鼠耳蜗螺旋神经元

neurod对短暂缺氧性脑损伤模型小鼠的学习记忆功能及其脑内神经干细胞分化作用的影响

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NeuroD对短暂缺氧性脑损伤模型小鼠的学习记忆功能及其脑内神经干...

作者：杜海燕福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】模拟新生儿出生窒息，建立新生小鼠短暂缺氧性脑损伤模型，研究缺氧对新生鼠认知功能的影响以及神经源性分化因子（neurod）侧脑室注射治疗后神经元再生情况，为新生儿围产期窒息所致的缺氧缺血性脑病的防治研究提供实验依... 详细信息

【目的】模拟新生儿出生窒息，建立新生小鼠短暂缺氧性脑损伤模型，研究缺氧对新生鼠认知功能的影响以及神经源性分化因子（neurod）侧脑室注射治疗后神经元再生情况，为新生儿围产期窒息所致的缺氧缺血性脑病的防治研究提供实验依据。【方法】 1．参照Grojean[9]的方法，新生5日龄（5d）小鼠短暂（10min）置于100%氮气环境中，建立出生窒息的模型。采用神经行为学观察、HE染色观察脑组织病理变化等方法，对动物模型进行评价。 2．动物（100只新生5d小鼠）随机分成对照组、缺氧组、缺氧后侧脑室给予neurod组、缺氧后侧脑室给予neurod Control组，采用RT-PCR检测neurod表达量的变化;第6d取材，采用快速冰冻切片的免疫荧光双标法检测BrdU与Doublecortin表达的变化。【结果】 1．缺氧过程新生小鼠均出现全身紫绀、四肢爬动、意识障碍等神经行为的异常。悬挂实验、悬崖逃避实验和Morris水迷宫实验发现，模型小鼠的智力下降和空间学习记忆功能减退。HE染色可见缺氧10min后海马区神经元损伤严重。 2．RT-PCR结果显示，脑组织中可见neurod mRNA表达，但各组间无明显差异。 3．免疫荧光结果显示，在大脑皮质区和海马齿状回可见neurod表达，但各组间无明显差异。【结论】 1．通过将新生小鼠短暂置于100%氮气环境中的方法，可建立与人类新生儿缺氧缺血性脑病相似的新生小鼠短暂缺氧性脑损伤模型。 2．短暂缺氧后侧脑室给予neurod后，未见明显的认知改善。

关键词： neurod 短暂缺氧神经干细胞神经再生

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neurod在神经细胞分化中的调控作用

医学分子生物学杂志 2008年第3期5卷 278-282页

作者：方洪波张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

神经分化因子(neurod)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,neurod的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游... 详细信息

神经分化因子(neurod)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,neurod的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游基因表达,进而调控细胞周期和神经细胞分化进程。这些研究为neurod参与细胞分化进程,糖尿病和其他神经性疾病的发生提供了依据。

关键词： neurod 胰腺全反式维甲酸

neurod慢病毒载体构建及在大鼠神经干细胞的过表达

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NeuroD慢病毒载体构建及在大鼠神经干细胞的过表达

作者：冯旭福建医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:在哺乳动物neurod在脑的发育中广泛表达而且是中枢神经系统形成所必须的,尤其是海马和小脑的颗粒细胞产生过程中尤为重要。神经祖细胞和放射状胶质细胞中都无neurod表达,而在有丝分裂后期细胞可以检测到其表达,并在变性... 详细信息

研究背景及目的:在哺乳动物neurod在脑的发育中广泛表达而且是中枢神经系统形成所必须的,尤其是海马和小脑的颗粒细胞产生过程中尤为重要。神经祖细胞和放射状胶质细胞中都无neurod表达,而在有丝分裂后期细胞可以检测到其表达,并在变性坏死后期神经系统再生的新生细胞neurod的表达量有所增高。本研究即构建neurod1慢病毒载体,观察并验证neurod1对大鼠神经干细胞的表达活性。方法:利用SD大鼠新生鼠脑cDNA模板,设计合成neurod的cds区引物序列,用PCR扩增出目的片段,凝胶回收纯化和双酶切,将neurod基因连接在慢病毒表达载体上,并与DH5a细菌同源重组,挑选阳性克隆,小提质粒行基因测序鉴定,大抽质粒后用Lipo2000转染293细胞,包装浓缩得到lv-neurod1和Lv-Green重组慢病毒;分离孕13-15 dSD大鼠胚胎脑NSCs,无血清培养基(DMEM/F12,含bFGF、EGF、B27等)条件下培养,免疫细胞化学法鉴定神经干细胞;慢病毒转染SD胎鼠神经干细胞,qPCR法检测neurod1的表达情况。结果:在本实验中,经检测我们成功地构建neurod1慢病毒表达载体;分离并鉴定了孕14-16天SD大鼠胎鼠脑NSCs,并在体外培养增殖;neurod1慢病毒转染神经干细胞后,能在神经干细胞中过量表达。结论:成功构建了大鼠脑源性neurod1慢病毒载体,成功转染神经干细胞,为进一步研究neurod1在神经干细胞分化中的信号通路和基因工程神经干细胞治疗研究奠定了基础。

关键词： neurod 慢病毒载体构建神经干细胞过表达

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电针对胎窘新生鼠脑neurod表达的影响

电针对胎窘新生鼠脑NeuroD表达的影响

作者：陈露福建医科大学

学位级别：硕士

目的采用延迟剖宫产术,获得胎窘新生鼠以模拟临床新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE),通过对最佳模型鼠实施电针干预,研究电针刺激对胎窘新生鼠脑中神经源性分化因子(Neuro D)即时表达的影响及长期的作用,探讨... 详细信息

目的采用延迟剖宫产术,获得胎窘新生鼠以模拟临床新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE),通过对最佳模型鼠实施电针干预,研究电针刺激对胎窘新生鼠脑中神经源性分化因子(Neuro D)即时表达的影响及长期的作用,探讨其在修复神经系统中的可能作用机制,为电针治疗在HIE疾病的临床应用提供基础实验依据。方法1.采用延迟剖宫产术,建立胎鼠宫内窘迫模型。利用异常行为辨别、冰冻切片HE染色及神经行为学实验(高架十字迷宫、旷场实验、Morris水迷宫)观察不同胎窘时间(10min、20min和30min)新生鼠的变化。2.胎窘新生鼠于第3日龄开始,每天接受持续15min的电针治疗,连续7d,利用神经元标记物Neu N和Neuro D进行免疫荧光染色,观察电针治疗结束后即Day9各组新生鼠脑Neuro D表达的情况。3.利用实时荧光定量PCR检测分析电针治疗后各组新生鼠Day16、Day22、Day35时Neuro D的表达变化;利用蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测电针治疗后各组新生鼠Day16、Day22、Day35时Neuro D的表达情况;利用免疫荧光双标(MAP-2与DAPI,Neu N与DAPI)、三标(Neuro D、MAP-2与DAPI,Neuro D、Neu N与DAPI)进一步观察电针治疗后的各组新生鼠Day22时Neuro D标记的荧光强度。结果1.随着胎鼠宫内窘迫时间的增加,新生鼠的异常神经行为表现越来越明显,胎窘30min时甚至发生抽搐、死亡。各项行为学试验(高架十字迷宫、旷场试验、Morris水迷宫)的结果表明,与空白对照组相比,伴随胎窘时间的延长,新生鼠的自发活动量逐渐减少,焦虑心理逐渐明显,学习与记忆能力发生改变。在胎窘10min与20min的实验鼠当中,其学习能力与空白对照组相比逐渐提高,但记忆能力保持不变,而胎窘30min组与空白对照组相比则表现为记忆能力与学习能力均下降。2.免疫荧光标记Neu N、Neuro D,激光共聚焦结果显示电针干预对各组不同胎窘时间的新生鼠治疗效果差异明显。电针刺激胎窘20min组新生鼠能够最大程度引起Neuro D的过表达,Neu N也表现出了相似的趋势,共同说明了电针治疗后具有分化成熟的新神经元的形成。3.实时荧光定量PCR与Western-blot结果检测,均表明胎窘20min+电针组Day16、Day22及Day35的Neuro D相对表达量始终维持最高,免疫荧光双标与三标Day22的结果也表现为相同趋势。认为,电针治疗能够刺激Neuro D高表达,引发NSCs分化为神经元,从而达到修复受损神经系统的目的。结论胎窘时间为20min的新生鼠接受电针治疗的效果最佳。电针干预通过刺激鼠脑中Neuro D基因转录翻译,进行高表达,以此诱导NSCs分化为神经元,参与受损神经组织修复和功能重建。电针干预的这种促进作用在治疗结束后一段时间仍然存在。

关键词：胎窘新生鼠百会穴电针 neurod 神经再生

大鼠neurod真核质粒表达载体的构建和鉴定

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大鼠NeuroD真核质粒表达载体的构建和鉴定

作者：杨腾福建医科大学

学位级别：硕士

研究背景和实验目的: neurod是一种bHLH(basic helix-loop-helix,碱性螺旋-环-螺旋)转录因子。在爪蟾的胚胎中,过表达外源neurod可以将外胚层中所有类型的细胞分化成为成熟的神经元。在胰岛素瘤细胞中,neurod可以结合并激活胰岛素启动子... 详细信息

研究背景和实验目的: neurod是一种bHLH(basic helix-loop-helix,碱性螺旋-环-螺旋)转录因子。在爪蟾的胚胎中,过表达外源neurod可以将外胚层中所有类型的细胞分化成为成熟的神经元。在胰岛素瘤细胞中,neurod可以结合并激活胰岛素启动子。neurod基因敲除的小鼠,位于早期分化中的胰腺内分泌细胞以及神经系统的某些品系的细胞死亡,结果导致胰腺中的胰岛细胞、小脑、海马结构及内耳感觉神经节细胞的缺失,产生糖尿病及包括共济失调、耳聋等神经系统方面的功能障碍。一系列功能获得和丧失的实验证实neurod调控不同组织中细胞的存活和分化。了解neurod作为转录因子在胰腺组织和神经系统的发育及其功能,为今后诊断和治疗相关的疾病提供有价值的帮助,我们拟重组大鼠neurod基因真核质粒表达载体。实验方法: 1.neurod cDNA克隆从新生大鼠小脑中提取总RNA,巢式PCR扩增得到neurod基因,回收并纯化;Ligation Mix连接酶连接pMD19-T载体,转化感受态细菌JM109后经蓝白筛选;小量抽提重组克隆质粒DNA,应用限制性内切酶NheI和XhoI酶切鉴定阳性克隆并对阳性重组质粒。 2.构建neurod基因真核质粒表达载体和序列分析用限制性内切酶NheI和XhoI对pMD19-T-neurod和pcDNA3.1A双酶切,分别回收纯化,以T4连接酶将二者连接,转化感受态DH5a。小量抽提重组质粒DNA,NheI和XhoI筛选鉴定重组质粒pcDNA3.1A-neurod并进行基因测序。结果: 1. neurod基因克隆RT-PCR扩增得到的cDNA为1kb,与GenBank中neurod cDNA的长度一致。neurod基因片段与克隆载体pMD19-T连接后转化,经蓝白筛选得到大量菌落,PCR扩增鉴定和双酶切鉴定得到阳性重组克隆pMD19-T-neurod。 2. neurod基因质粒表达载体构建双酶切重组质粒pMD19-T-neurod和pcDNA3.1A得到基因双粘片段连接后转化,得到大量菌落,通过双酶切鉴定得到阳性重组质粒pcDNA3.1A-neurod。序列分析结果与Genbank收录的大鼠neurod cDNA全长序列一致。结论: 本研究成功克隆了大鼠neurod cDNA;成功构建了pcDNA3.1-neurod重组表达质粒。

关键词： neurod bHLH 载体构建 RT-PCR pcDNA3.1

围产期短暂性缺氧neurod变化与神经再生相关性研究

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围产期短暂性缺氧NeuroD变化与神经再生相关性研究

作者：刘晓艳福建医科大学

学位级别：硕士

目的观察短暂性缺氧后鼠脑神经源性分化因子(Neurogenic differentiation, neurod)表达量的变化及其与神经系统再生的关系,探讨其在神经系统再生中的可能作用。方法通过RT-PCR检测短暂性缺氧后neurod mRNA表达量的变化。进而通过体... 详细信息

目的观察短暂性缺氧后鼠脑神经源性分化因子(Neurogenic differentiation, neurod)表达量的变化及其与神经系统再生的关系,探讨其在神经系统再生中的可能作用。方法通过RT-PCR检测短暂性缺氧后neurod mRNA表达量的变化。进而通过体外培养大鼠海马神经元,RT-PCR检测细胞缺氧后neurod mRNA表达量的变化,BrdU免疫组化检测缺氧后细胞增殖情况;通过“延迟剖宫产术”建立胎鼠宫内窘迫模型,对模型组动物进行神经行为学检测,原位杂交技术检测术后不同天数海马结构neurod mRNA表达量的变化。结果短暂性缺氧后neurod mRNA表达量增高,并且表达量随着缺氧时间的延长而不断增高。免疫荧光结果显示,在大脑皮质及皮质下区域neurod呈点状或条索状弥散分布,窘迫前后neurod表达量未见明显变化(P>0.05)。在尾壳核区域neurod的表达相对集中,窘迫后表达量明显增高。体外培养5d的海马神经元缺氧3h后RT-PCR检测到neurod mRNA表达量明显增高,BrdU免疫组化结果显示缺氧再培养后检测到BrdU阳性细胞,即有的神经元返回细胞周期,重新进行分裂增殖。在体通过“延迟剖宫产术”建立宫内窘迫模型。大鼠神经行为学检测结果表明,宫内窘迫10min组和对照组相比,大鼠的动作协调能力和学习能力统计学上未见明显差异,但模型组大鼠的重拾记忆能力有明显提高(Pneurod在P13、P20、P27天的表达量与对照组相比都有明显增高,且在P20天最明显。结论 1.在体动物实验证明短暂性缺氧后neurod表达量增高 2.体外培养海马神经元缺氧后neurod表达量增高,与之伴随的是有的神经元返回细胞周期,重新进行分裂增殖 3.海马齿状回颗粒下层和CA1区neurod表达量的变化与神经系统再生具有相关性以上表明,高表达的neurod可能参与了神经干细胞的分化,在神经系统再生过程中发挥了一定作用

关键词： neurod 短暂缺氧神经再生