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大鼠面神经损伤后neun的表达变化

大鼠面神经损伤后NeuN的表达变化

作者：王宝凤华中科技大学

学位级别：硕士

目的研究面神经损伤修复过程中面运动神经元的神经元特异性核蛋白﹙neurons protein,neun﹚的表达变化。方法成年大鼠面神经断伤吻合后1、3、8、14、30天时,观察面部运动情况,同时用尼氏染色计数面运动神经元的数目及免疫组织化学技术... 详细信息

目的研究面神经损伤修复过程中面运动神经元的神经元特异性核蛋白﹙neurons protein,neun﹚的表达变化。方法成年大鼠面神经断伤吻合后1、3、8、14、30天时,观察面部运动情况,同时用尼氏染色计数面运动神经元的数目及免疫组织化学技术、免疫荧光技术以及western-blot技术观察轴突损伤后neun的表达变化。结果面神经损伤修复的过程中面部运动逐渐恢复,但难以恢复正常,伴有联带运动。neun的表达手术组术侧与健侧相比从第1天就开始下降、第3天持续降低,第8天降至最低,14天后逐渐恢复,30天无统计学差异﹙p>0.05﹚,其中损伤后的第8天与其他时间点相比差异有统计学意义﹙pneun的表达却发生变化,但至损伤后的30天又可恢复正常,表明单纯用neun的抗体虽不能用于计数全部的面运动神经元,但却可能反映损伤后面运动神经元活性,提示它们活性可能降低,但并未丢失或死亡。

关键词： neun 面神经损伤面运动神经元大鼠

人胚胎脊髓发育中Nestin，neun，GFAP的表达变化及凋亡细胞的检测

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人胚胎脊髓发育中Nestin，NeuN，GFAP的表达变化及凋亡细胞的检测

作者：高燕昆明医学院

学位级别：硕士

[目的]探讨人胚胎脊髓发育过程中神经干细胞、神经元、星形胶质细胞的发育变化和规律以及细胞凋亡的变化。 [方法]采用免疫组织化学方法检测神经干细胞、神经元、星形胶质细胞的标记蛋白Nestin,neun,GFAP在3w～8m人胚胎脊髓中的表达及变... 详细信息

[目的]探讨人胚胎脊髓发育过程中神经干细胞、神经元、星形胶质细胞的发育变化和规律以及细胞凋亡的变化。 [方法]采用免疫组织化学方法检测神经干细胞、神经元、星形胶质细胞的标记蛋白Nestin,neun,GFAP在3w～8m人胚胎脊髓中的表达及变化;应用TUNEL法检测3w～8m人胚胎脊髓中的原位凋亡细胞。 [结果]***染色结果:Nestin在整个人胚胎脊髓发育过程中均可见到,3w即可在神经管见到阳性细胞;5w～6w,阳性细胞在神经上皮背侧较腹侧多,套层、边缘层中阳性细胞开始出现并增多,脊神经节内可见阳性反应物;7w～8w,套层可见大量突起较长的阳性细胞(P＜0.05);10w～11w以后神经上皮、灰白质内阳性细胞密度和强度均逐渐减少,中央管、白质阳性细胞于3m、5m后趋于稳定,灰质内可见少量有短突起的阳性细胞。 ***染色结果:neun阳性细胞在5w的套层中始见,数量少且染色浅,边缘层未见neun阳性细胞;6w～7w,阳性细胞明显增多,尤以基板为甚,脊神经节内也可见到阳性细胞;8w～9w,套层内阳性细胞进一步增多(P＜0.05);10w,腹角内阳性细胞有所减少,后根处始见少量阳性细胞;11w～3m,灰质内阳性细胞数明显降低(P＜0.05),腹角见体积较大、胞核深染的运动神经元;4m～6m,灰质内的阳性细胞数继续减少(P＜0.05),后根处阳性细胞减少(P＜0.05);7m～8m,灰质内阳性细胞数量未有明显变化。 ***染色结果:GFAP阳性细胞始见于8w的腹侧神经管上皮;9w,神经管上皮阳性纤维密度有所增加(P＜0.05);10w～11w,灰、白质内阳性纤维均明显增多(P＜0.05),中央管11w明显减少,后正中隔见到密集的阳性纤维;3m,中央管阳性纤维进一步减少(P＜0.05),其后至8m未有明显变化。灰质内偶见胞体、突起呈阳性的星形胶质细胞,背角内阳性纤维数量增多(P＜0.05);4m,腹角内阳性纤维数量明显增多(P＜0.05),白质内纤维明显较灰质纤维密集,背角内阳性纤维减少(P＜0.01);5m之后阳性细胞继续减少并持续到8m。 ***凋亡细胞检测结果:3w～4w即可在神经上皮见到大量阳性细胞;5w,基板出现阳性细胞;6w～7w,神经上皮阳性细胞减少(P＜0.05),基板内的阳性细胞较5w明显增多(P＜0.05),脊神经节也可见阳性细胞,边缘层未见;8w,神经上皮阳性细胞进一步减少(P＜0.05),套层中可见胞核深染的阳性细胞,背根节内也可见到阳性细胞;9w,边缘层开始出现少量阳性细胞;10w～11w,神经上皮阳性细胞继续减少(P＜0.05),腹角、背角内均可见大量阳性细胞,白质内阳性细胞较9w有所增加(P＜0.05);3m～6m,灰质内阳性细胞密度降低(P＜0.05),腹角见到阳性运动神经元,白质内可见大量小阳性细胞;7m～8m,神经上皮仍有少量阳性细胞,灰、白质内均可见到体积较小的阳性细胞,数量较6m明显减少(P＜0.05)。 [结论]***阳性细胞在神经上皮贯穿整个发育过程,5w基板、翼板形成后即可见到阳性物,而边缘层6w出现,中央管、基板、翼板、边缘层内阳性细胞达高峰的时间分别是6w、7w、8w、9w,而其出现明显减少的时间分别是8w、10w、9w、10w,随着脊髓的发育成熟,灰、白质内阳性物逐渐减少,而中央管阳性细胞数至3m后较为稳定。 ***阳性细胞仅在基板(腹角)、翼板(背角)及后根可见,套层内出现的时间是5w～6w,于9w达高峰,背角于3m又出现一次小高峰,随后逐渐减少,白质内阳性细胞10w出现,持续到6m后消失。 ***出现时间最晚,中央管、腹角、白质均8w出现,高峰出现时间为10w、4m、4m,而背角于10w始见,高峰出现时间为3m,随后灰、白质阳性细胞均逐渐减少,而中央管于3m后趋于稳定。 4.脊髓神经上皮凋亡细胞在整个发育过程中均可见到,5w达高峰,基板、翼板内凋亡细胞出现时间分别为5w、6w,高峰出现时间为6w、11w,边缘层于9w始见凋亡细胞,5m出现高峰,随后逐渐减少。

关键词： Nestin neun GFAP 凋亡人胚胎脊髓

老年人视皮质PV和neun免疫阳性神经元的形态学观察

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老年人视皮质PV和NeuN免疫阳性神经元的形态学观察

作者：于世奇中南大学

学位级别：硕士

目的：研究人脑视皮质中PV、neun阳性神经元随着衰老而发生的改变,为研究退行性病变提供形态学依据。方法：(1)收集22-102岁人脑标本17例。取视皮质,固定,切片,免疫组织化学方法染色视皮质PV、neun阳性细胞,光镜下计算细胞密度和光密度... 详细信息

目的：研究人脑视皮质中PV、neun阳性神经元随着衰老而发生的改变,为研究退行性病变提供形态学依据。方法：(1)收集22-102岁人脑标本17例。取视皮质,固定,切片,免疫组织化学方法染色视皮质PV、neun阳性细胞,光镜下计算细胞密度和光密度值,统计分析。(2)对上述17例视皮质邻片进行6E10免疫组织化学染色,并分析6E10与PV, neun的相关性。结果：1.视皮质内PV阳性神经元主要分布在外颗粒层、外锥体细胞层和内颗粒层。细胞形态大小不一,胞体呈卵圆形,梭形或者不规则形,突起清晰可辨。PV阳性细胞数目随衰老而逐渐下降。***阳性神经元分布于视皮质的各层,胞核深染,胞浆和树突淡染。细胞随衰老而出现密度下降、体积变大、空泡化等现象。3.有6E10免疫阳性产物的视皮质,其PV和neun免疫阳性神经元数量下降明显。结论：人视皮质PV和neun免疫阳性神经元数目随衰老而下降,有6E10免疫阳性斑块出现的标本,其数目下降更为明显。

关键词： Parvalbumin neun 6E10 视皮质老年人

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不同品系的neun序列比较

不同品系的NeuN序列比较

作者：王晓雪大理学院

学位级别：硕士

neun （neuron-specific nuclear protein）是一种神经元特异性核蛋白，其在脊椎动物神经系统中的大部分神经细胞种类中表达并可被检测。免疫印迹检测neun蛋白表现为46kD和48kD两个条带，可与RNA、DNA相结合，属于可溶性蛋白。neun是分... 详细信息

neun （neuron-specific nuclear protein）是一种神经元特异性核蛋白，其在脊椎动物神经系统中的大部分神经细胞种类中表达并可被检测。免疫印迹检测neun蛋白表现为46kD和48kD两个条带，可与RNA、DNA相结合，属于可溶性蛋白。neun是分化成熟神经元的特异性标记物，并被广泛用于神经发育学、病理组织学检测以及干细胞临床研究等方面。2009年Kim等人证明neun与Fox-3基因相同，属于具有转录、选择性剪接功能的Fox-1转录基因家族，这一研究成果使得对neun的生化、功能研究取得突破性进展。目的：本实验旨在探讨C57BC/L小鼠、SD大鼠及人三个不同品系的脑组织中神经元核蛋白neun基因序列的同源性，并分析其基因可变区域与保守区域，进一步探讨和研究neun的分子特性以及其在神经系统发育、分化及功能分化中的具体机制。材料及方法：获取新鲜C57BC/L小鼠、SD大鼠脑组织及人脑石蜡组织切片，提取总RNA，逆转录为cDNA， RT-PCR技术进行neun目的基因的扩增，并将目的基因插入真核表达载体并进行测序、比对分析。结果：1. RT-PCR扩增目的基因后，凝胶电泳结果显示有约1000bp大小的条带，可能是neun目的基因。 2.将目的基因插入质粒，再次进行凝胶电泳，所得结果显示样本均存在明显目的条带，符合实验要求。 3.质粒样本进行测序，经序列分析后，与Fox-3基因序列基本相同。 4.将三种不同品系的neun序列进行比对，结果显示保守序列为44%，而56%为可变序列。结论：本次实验结果显示三个不同品系的neun基因保守序列为44%，而有56%为可变序列，提示其保守序列可能为各种属的功能区，而其可变序列则可能与不同种属间的差异性有关。

关键词： neun 克隆转染序列比对 RT-PCR

清脑益元汤对脑缺血损伤性大鼠GFAP、neun表达水平的影响

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清脑益元汤对脑缺血损伤性大鼠GFAP、NeuN表达水平的影响

作者：毛冬雪广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察清脑益元汤对脑缺血损伤大鼠GFAP、neun表达水平的影响,探讨清脑益元汤保护脑缺血损伤神经元的部分作用机制。方法:选取雄性健康SD大鼠112只,体重250±50g,用随机数字表法将大鼠分为4组:空白组(7只)、假手术组(35只)、模型组(3... 详细信息

目的:观察清脑益元汤对脑缺血损伤大鼠GFAP、neun表达水平的影响,探讨清脑益元汤保护脑缺血损伤神经元的部分作用机制。方法:选取雄性健康SD大鼠112只,体重250±50g,用随机数字表法将大鼠分为4组:空白组(7只)、假手术组(35只)、模型组(35只)、清脑益元组汤(35只)。假手术组、模型组、清脑益元汤组分别按照术后取材时间点1d、3d、7d、14d、28d又分为5个亚组。空白组大鼠正常饲养,灌胃等体积蒸馏水;假手术组大鼠颈动脉插入约8mm线栓,术后正常饲养,灌胃等体积蒸馏水;模型组术前灌胃等体积蒸馏水7d,大鼠麻醉后行MCAO术,制成大鼠急性脑缺血损伤模型,术后正常饲养,灌胃等体积蒸馏水;清脑益元组大鼠术前灌胃等体积清脑益元汤7d后行MCAO术,灌胃清脑益元汤。参考Longa 5级4分法对大鼠脑缺血损伤后神经功能缺损症状评分,按照各取材时间点进行标本采集。大鼠脑组织取材后,应用TTC染色法对大鼠脑梗死体积进行检测;TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡数量;免疫组织化学法检测脑缺血损伤大鼠梗死区GFAP、neun阳性细胞数的变化情况。结果:(1)神经功能缺损评分情况:与假手术组相比,模型组及清脑益元汤组大鼠神经功能缺损评分有显著性差异(Pneun阳性细胞表达;与假手术组比较,模型组与清脑益元组在相同时间点GFAP免疫阳性细胞的表达均明显增多,neun阳性细胞表达偏少,具有明显差异性(Pneun阳性细胞数显著增多,差异具有统计学意义(Pneun的表达水平有关。

关键词：清脑益元汤脑缺血 GFAP neun

人参皂苷Rb1对阿尔茨海默病模型鼠海马区神经元neun表达的影响

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广东医学 2013年第9期34卷 1335-1336页

作者：于小琪向君广东省广州市第一人民医院老年病科 510180

目的观察人参皂苷Rb1对阿尔茨海默病(AD)模型鼠海马区神经元neun表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对AD的治疗作用。方法选用10月龄SAMP8鼠作为实验鼠,对照鼠为SAMR1鼠,等量分至给药组(SAMP8+GSRb1组和SAMR1+GSRb1组)和未给药组(SAMP8组和SAMR... 详细信息

目的观察人参皂苷Rb1对阿尔茨海默病(AD)模型鼠海马区神经元neun表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对AD的治疗作用。方法选用10月龄SAMP8鼠作为实验鼠,对照鼠为SAMR1鼠,等量分至给药组(SAMP8+GSRb1组和SAMR1+GSRb1组)和未给药组(SAMP8组和SAMR1组)。给药组腹腔注射2.5 mg/kg人参皂苷Rb1 1次/d,连用4周,未给药组腹腔注射同等剂量生理盐水。第1周后所有鼠腹腔注射50 mg/kg Brdu 2次/d,连续3周注射后,10%水合氯醛麻醉后灌注取脑,脑组织固定脱水,用冰冻切片机切片后孵育一抗二抗,激光共聚焦扫描显微镜扫描,采用免疫荧光和免疫荧光双标方法观察各组海马区齿状回Brdu/neun表达情况。结果与SAMR1+GSRb1组(0.25±0.10)比较,SAMP8+GSRb1组(0.50±0.10)Brdu/neun表达明显增多,差异有统计学意义(t=3.95,P=0.005 2);与SAMR1组(0.54±0.08)比较,SAMP8组(0.40±0.08)Brdu/neun表达减少,差异有统计学意义(t=4.06,P=0.003 6)。与SAMP8组比较,SAMP8+GSRb1组Brdu/neun表达明显增多,差异有统计学意义(t=2.82,P=0.022 4)。与SAMR1组比较,SAMR1+GSRb1组Brdu/neun表达增多,差异有统计学意义(t=6.97,P=0.0001)。结论人参皂苷Rb1可以增加AD模型鼠海马齿状回neun表达,证明人参皂苷Rb1可促进神经元neun再生,增强神经元抗损伤与凋亡的能力,为AD治疗提供可靠依据。

关键词：阿尔茨海默病人参皂苷Rbl SAM鼠海马区齿状回 neun

血栓通注射液联合rt-PA早期干预对急性脑梗塞大鼠neun、GFAP、TNF-a表达的影响

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血栓通注射液联合rt-PA早期干预对急性脑梗塞大鼠NeuN、GFAP、TNF...

作者：丁泽惠湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究血栓通注射液联合重组组织型纤溶酶原激活剂(recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA)早期干预对急性脑梗塞大鼠神经元核(neuronal nuclei,Neu N)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响,探讨其对急性脑梗塞的作用机制,为进一步的临床研究提供科学依据。方法:采用SD大鼠随机分为假手术组、梗死组、溶栓组、血栓通组,每组再分为1d、3d、7d三个时间亚组,每个时间亚组5只大鼠。假手术组及梗死组予以等体积0.9%氯化钠溶液静脉注射,溶栓组予以rt-PA及等体积0.9%氯化钠溶液静脉注射,血栓通组rt-PA及血栓通注射液静脉注射。计算各组大鼠死亡率,在相应时间点完善大鼠神经功能缺损评分,断头取脑,TTC染色观察脑梗塞面积,HE染色观察患侧海马区神经元形态变化,免疫组化法检测患侧海马区中Neu N、GFAP、TNF-α的表达水平。结果:1.死亡率:除假手术组以外,其他各组两两相比,死亡率无统计学差异(p>0.05)。***染色:(1)与梗死组相比,溶栓组、血栓通组各时间点脑梗塞面积均明显减小(p<0.01);(2)与溶栓组比较,血栓通各时间点脑梗塞面积均明显减小(p<0.01)。***染色:(1)假手术组各时间点大鼠神经细胞结构清晰,排列整齐,细胞核淡染清晰,处于细胞中央;(2)梗死组各时间点大鼠患侧海马区神经细胞数目减少,细胞核固缩、深染且被挤压至边缘,部分细胞肿胀,细胞间隙增宽,有变性坏死及空泡现象;(3)与梗死组比较,溶栓组及血栓通组各时间点空泡样变、核仁皱缩、变性坏死、组织间隙增宽明显减轻,胶质细胞增生减少,脑组织病理形态改善较大。4.改良神经功能缺损评分:(1)与假手术组比较,各组在不同时间点的评分均明显升高(p<0.01);(2)与梗死组比较,溶栓1d评分降低(p<0.05),溶栓3d、7d及血栓通组各时间点的评分均明显降低(p<0.01);(3)与溶栓组比较,血栓通组在7d时的评分降低(p<0.05)。*** N:(1)与假手术组相比,梗死组、溶栓组、血栓通组各时间点Neu N表达均明显下降(p<0.01);(2)与梗死组相比,溶栓组、血栓通组各时间点Neu N表达均明显上升(p<0.01);(3)与溶栓组比较,血栓通1d、3d时的Neu N表达均有所上升(p<0.05),7d时明显上升(p<0.01)。***:(1)与假手术组相比,梗死组、溶栓组、血栓通组各时间点GFAP表达均明显上升(p<0.01);(2)与梗死组相比,溶栓组1d、3d时的GFAP表达下降(p<0.05),溶栓组7d及血栓通组各时间点的表达均明显下降(p<0.01);(3)与溶栓组比较,血栓通1d、3d时的GFAP表达下降(p<0.05),7d的表达明显下降(p<0.01)。***-α:(1)与假手术组相比,梗死组、溶栓组、血栓通组各时间点TNF-α表达均明显上升(p<0.01);(2)与梗死组相比,溶栓组、血栓通组各时间点TNF-α表达均明显下降(p<0.01);(3)与溶栓组比较,血栓通3d时表达下降(p<0.05),7d时表达明显下降(P<0.01)。结论:1.同种异体血栓大脑中动脉栓塞大鼠rt-PA静脉溶栓后24h内应用血栓通注射液有效,且并未增加大鼠的死亡风险。2.血栓通注射液联合rt-PA可以增加Neu N的表达,减少GFAP、TNF-α的表达,改善神经功能缺损症状及脑组织形态,提示抑制神经元死亡、星形胶质细胞活化及炎症反应产生可能是血栓通注射液联合rt-PA早期干预对急性脑梗塞的神经保护机制之一。

关键词：急性脑梗死血管再通血栓通注射 neun GFAP

neun与GFAP在正常大鼠、小鼠、猫脊髓内的表达

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四川解剖学杂志 2008年第4期16卷 27-28,38页

作者：杨霄彦郝春光王廷华李力燕昆明医学院神经科学研究所云南昆明650031

目的探讨特异识别大鼠的neun、GFAP抗体对小鼠、猫脊髓神经元和星形胶质细胞的识别程度。方法选取正常大鼠、小鼠、猫的脊髓,运用免疫组化二步法分别行neun与GFAP染色,观察两种抗体在三种动物脊髓中的表达情况。结果neun特异识别大鼠、... 详细信息

目的探讨特异识别大鼠的neun、GFAP抗体对小鼠、猫脊髓神经元和星形胶质细胞的识别程度。方法选取正常大鼠、小鼠、猫的脊髓,运用免疫组化二步法分别行neun与GFAP染色,观察两种抗体在三种动物脊髓中的表达情况。结果neun特异识别大鼠、小鼠脊髓神经元,但不识别猫脊髓神经元。GFAP可特异识别大鼠、小鼠脊髓的星形胶质细胞,部分识别猫脊髓的星形胶质细胞。结论特异性识别大鼠的neun、GFAP抗体对小鼠、猫脊髓的识别程度存在一定差异。

关键词： neun GFAP 大鼠小鼠猫表达差异

neun及其在局灶性脑缺血再灌注研究中的应用

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华西医学 2004年第2期19卷 329-330页

作者：胡晓松周德明周东四川大学华西医学中心人体解剖学教研室四川成都610041 四川大学华西医院神经内科

脑血管疾病是一组严重危害人类健康的疾病,目前已成为人类致残和死亡的重要原因之一.脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤是脑缺血疾病临床治疗中的关键问题.目前,neun作为一种稳定而敏感的成熟神经元的特异抗原,在局灶性脑缺血... 详细信息

脑血管疾病是一组严重危害人类健康的疾病,目前已成为人类致残和死亡的重要原因之一.脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤是脑缺血疾病临床治疗中的关键问题.目前,neun作为一种稳定而敏感的成熟神经元的特异抗原,在局灶性脑缺血(focal cerebral ischemia,FCI)的研究中应用较多.本文就neun及其在该领域的应用做一简要的综述.

关键词： neun 局灶性脑缺血再灌注损伤治疗抗原