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nelin与F-actin及Filamin相互作用的鉴定

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华中科技大学学报（医学版） 2007年第3期36卷 281-284,F0003页

作者：王震刘冬青王茵屈伸孟宪敏华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系武汉430030 中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院分子医学中心北京100037 华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系武汉430030

目的在用酵母双杂交方法将nelin与人心脏cDNA文库进行杂交筛选,得到3个阳性克隆的基础上,进一步探讨新基因nelin及其心肌表达产物nelin蛋白的功能,并寻找能够与其发生相互作用的蛋白质。方法采用基因转染和表达技术,在真核细胞内外分别... 详细信息

目的在用酵母双杂交方法将nelin与人心脏cDNA文库进行杂交筛选,得到3个阳性克隆的基础上,进一步探讨新基因nelin及其心肌表达产物nelin蛋白的功能,并寻找能够与其发生相互作用的蛋白质。方法采用基因转染和表达技术,在真核细胞内外分别进行了nelin蛋白与肌动蛋白(F-actin)结合的共沉降及免疫荧光共定位实验。并通过免疫共沉淀实验进一步验证所得的实验结果。结果证实了在细胞内外nelin蛋白均能同F-actin相结合;还能与Filamin的C-末端免疫球蛋白样结构发生相互作用。结论nelin为一个新的兼有actin及Filamin结合能力的蛋白。在心肌细胞内,nelin很可能作为一个膜-细胞骨架连接蛋白,参与了细胞黏着斑形成的过程。

关键词： nelin 肌动蛋白细丝蛋白免疫共沉淀

基因nelin对人大隐静脉平滑肌细胞表型转化的影响

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中华实验外科杂志 2013年第5期30卷 925-927,F0003页

作者：裴长安秦士勇陈士辉张曙光山东大学附属千佛山医院血管外科济南250014

目的观察nelin对血管平滑肌细胞（VSMC）表型转化的影响。方法血清饥饿诱导VSMC由合成型向收缩型转变，应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测不同表型VSMC的nelinmRNA表达水平；转染nelin．小干扰RNA（siRNA）沉默nelin的表达... 详细信息

目的观察nelin对血管平滑肌细胞（VSMC）表型转化的影响。方法血清饥饿诱导VSMC由合成型向收缩型转变，应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测不同表型VSMC的nelinmRNA表达水平；转染nelin．小干扰RNA（siRNA）沉默nelin的表达，应用考马斯亮蓝染色法、乙酰胆碱（Ach）刺激法观察VSMC细胞骨架和收缩功能的变化。结果nelinmRNA在血清刺激组与血清饥饿24、48、72h组表达量分别为：0．1940±0．0971、0．7114±0．1265、0．7270±0．1026、0．7841±0．1240，差异有统计学意义（P〈0．05）。在血清饥饿培养过程中，VSMC细胞骨架由稀疏、模糊网状重构为均匀、致密束状，并重获收缩功能。抑制nelin表达后，血清饥饿诱导的细胞骨架重构受阻，Ach诱发的细胞收缩消失。结论nelin参与VSMC骨架重塑并调节其收缩功能，对VSMC表型转化的调节、收缩表型的维持具有重要作用。

关键词： nelin 血管平滑肌细胞表型转化细胞骨架收缩

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nelin基因与冠心病的相关性研究

Nelin基因与冠心病的相关性研究

作者：王琛延边大学

学位级别：硕士

目的：探讨nelin基因突变与冠心病易感性及危险因素的相关性,同时探讨缺血缺氧损伤对大鼠心肌细胞nelin基因表达的影响。方法：(1)采用DNA序列测定技术,检测101例冠心病患者和114例健康人nelin基因外显子及外显子/内含子连接区的核苷酸... 详细信息

目的：探讨nelin基因突变与冠心病易感性及危险因素的相关性,同时探讨缺血缺氧损伤对大鼠心肌细胞nelin基因表达的影响。方法：(1)采用DNA序列测定技术,检测101例冠心病患者和114例健康人nelin基因外显子及外显子/内含子连接区的核苷酸序列。利用核酸序列分析软件与Genbanlc的nelin基因序列比对,对SNP位点进行序列分析。(2)检测受试对象的身高、体重和血压,用ELISA法检测血清nelin水平,全自动生化分析仪检测血清TC、HDL-C、LDL-C、TG、Hs-CRP、Glu、Cr水平,分析nelin基因变异与以上各指标之间的关系。(3)培养新生大鼠心肌细胞,体外模拟心肌细胞缺血缺氧条件,用RT-PCR、Western blot方法检测缺血缺氧损伤的心肌细胞nelin基因的表达。结果：(1)通过对nelin基因外显子SNP位点的序列分析,共发现2个SNP位点。其中1个为NCBI数据库中报道的rs1166698位点,新发现1个位点。rs1166698位点为第8外显子区G/A错义突变(48364365 G/A),对照组基因型频率为GG：31.6%,GA：52.6%,AA：15.8%,等位基因频率为G：57.9%,A：42.1%。冠心病组基因型频率为GG：33.7%,GA：49.5%,AA：16.8%,等位基因频率为G：58.45%,A：41.45%。冠心病组nelin基因rs1166698位点AA基因型和A等位基因频率均较对照组偏低,但二者均无统计学意义。(2)冠心病组血清nelin水平为0.88±0.74ng/ml,对照组为0.31±0.18ng/ml,冠心病组明显高于对照组(Pnelin水平升高。冠心病组Hs-CRP、Glu、LDL-C水平明显高于对照组(Pnelin基因rs1166698位点AA型与GG+GA型比较,nelin水平、HDL-C偏高,其它指标均偏低,但均无统计学意义(P>0.05)。(4)缺血缺氧诱导的心肌细胞,经RT-PCR、Western blot检测,结果随着缺血缺氧时间的增加,nelin基因mRNA和蛋白的表达量逐渐减少。结论：冠心病组血清nelin水平明显高于对照组,60.4%的冠心病患者nelin水平升高,说明nelin基因与冠心病存在一定关联,实验结果未发现nelin基因rs1166698多态性位点与冠心病相关。缺血缺氧下调心肌细胞nelin表达。提示nelin基因很可能在冠心病的发生发展过程中起重要作用。

关键词： nelin 单核苷酸多态性冠心病心肌细胞缺血缺氧

大隐静脉组织nelin与TIMP-2表达在下肢静脉曲张血管重塑中的作用

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中国普通外科杂志 2014年第12期23卷 1707-1710页

作者：贾胜荣湖北省襄阳市中医院检验科湖北襄阳441000

目的:探讨大隐静脉组织nelin与基质金属蛋白酶抑制物2(TIMP-2)表达在下肢静脉曲张血管重塑中的作用。方法:选取大隐静脉移植术后患者94例,根据是否合并下肢静脉曲张将其分为两组,研究组(合并下肢静脉曲张,48例),对照组(未合并下肢静脉曲... 详细信息

目的:探讨大隐静脉组织nelin与基质金属蛋白酶抑制物2(TIMP-2)表达在下肢静脉曲张血管重塑中的作用。方法:选取大隐静脉移植术后患者94例,根据是否合并下肢静脉曲张将其分为两组,研究组(合并下肢静脉曲张,48例),对照组(未合并下肢静脉曲张,46例)。术中采集大隐静脉组织,采用免疫组化方法检测nelin与TIMP-2表达,Masson染色显微镜下观察静脉重塑情况。结果:与对照组比较,研究组nelin阳性率明显降低,TIMP-2阳性率明显增高,两组比较差异具有统计学意义(Pnelin阴性组静脉壁厚度明显高于nelin阳性组,而TIMP-2阳性组静脉壁厚度明显高于TIMP-2阴性组,组间差异具有统计学意义(Pnelin或上调TIMP-2阳性表达促进下肢静脉曲张血管重塑的平滑肌细胞和胶原纤维异常改变。

关键词：隐静脉 nelin TIMP-2 静脉曲张血管重塑

下肢静脉曲张患者外周血nelin水平测定及意义

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山东大学学报（医学版） 2013年第9期51卷 64-66,78页

作者：裴长安秦士勇陈士辉张曙光山东大学附属千佛山医院血管外科济南250014

目的探讨下肢静脉曲张患者与正常人外周血中nelin表达水平的差异及其意义。方法选取下肢静脉曲张患者57例为对照组,健康查体者60例为正常组,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞中nelin mRNA的表达水平,利用生物素双抗体夹心ELISA技术... 详细信息

目的探讨下肢静脉曲张患者与正常人外周血中nelin表达水平的差异及其意义。方法选取下肢静脉曲张患者57例为对照组,健康查体者60例为正常组,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞中nelin mRNA的表达水平,利用生物素双抗体夹心ELISA技术测定外周血血清中nelin蛋白的表达水平。结果 RT-PCR结果显示,nelin在对照组与正常组的相对表达量分别是0.226±0.070、0.718±0.114,两组差异有统计学意义(t=9.028,Pnelin蛋白的表达,对照组和正常组的表达量分别是(2.61±1.73)ng/mL、(3.64±1.65)ng/mL,两组差异有统计学意义(t=2.92,Pnelin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调,提示nelin基因的表达可能与下肢静脉曲张发生发展有一定的关系。

关键词：静脉曲张 nelin 基因表达表型转化

基因nelin对人大隐静脉平滑肌细胞表型转化的影响

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基因Nelin对人大隐静脉平滑肌细胞表型转化的影响

作者：裴长安山东大学

学位级别：硕士

目的研究基因nelin对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMC）表型转化的影响,探讨nelin在原发性下肢静脉曲张发病中的作用机制。方法（1）采用组织块贴壁结合酶消化法分离培养人大隐静脉来源的VSMC,以形态... 详细信息

目的研究基因nelin对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMC）表型转化的影响,探讨nelin在原发性下肢静脉曲张发病中的作用机制。方法（1）采用组织块贴壁结合酶消化法分离培养人大隐静脉来源的VSMC,以形态学观察、免疫荧光染色法鉴定细胞,应用台盼蓝染色法、绘制生长曲线测定细胞成活率、活性及增殖能力。（2）利用血清饥饿法诱导VSMC由合成型向收缩型转变,恢复血清刺激诱导VSMC由向收缩型向合成型转变,获得不同表型的VSMC。（3）收集不同条件处理的VSMC,利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测不同表型VSMC的nelin mRNA表达活性。（4）转染nelin-siRNA沉默VSMC中nelin基因的表达,通过考马斯亮蓝染色法及乙酰胆碱（ACh）刺激法分别观察抑制nelin表达VSMC细胞骨架和收缩功能的影响。结果（1）原代培养5～7d可见VSMC从组织块边缘爬出,细胞呈梭形、多角形或不规则形,胞体较小,胞浆丰富,折光性强,细胞间常有突起相连,胞核多为卵圆形,有一个或多个核仁;传代细胞呈典型的“峰-谷”样生长,细胞突起增多,透明度增高,折光性下降;细胞免疫荧光染色可见所有VSMC胞质内α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色阳性;传代细胞成活率为97%;生长曲线呈类“S”形。（2） nelin mRNA在不同表型VSMC中的表达差异：血清饥饿可诱导VSMC由合成型向收缩型转化。本实验观察了VSMC由合成型向收缩型转化过程中nelin mRNA表达活性的变化。RT-PCR结果显示,血清刺激培养组、血清饥饿培养24h、48h、72h组以及恢复血清刺激24h、48h、72h组光密度扫描半定量结果分别为：0.1940±0.0971,0.7114±0.1265,0.7270±0.1026,0.7841±0.1240,0.3208±0.1389,0.2997±0.1168,0.1807±0.0845,血清饥饿组与血清刺激组差异有统计学意义（p＜0.05）,血清刺激组间及血清饥饿组间差异无统计学意义（p＞0.05）。（3） nelin表达对VSMC细胞骨架的影响：血清饥饿前,VSMC细胞骨架呈模糊、淡染、稀疏的网格状,血清饥饿培养72h后,细胞骨架发生重构：结构变得清晰,网格致密,沿VSMC极性呈束状分布。应用siRNA技术沉默nelin表达,在此基础上血清饥饿培养VSMC并观察细胞骨架的变化,发现不再出现由稀疏的网格状向束状的重构转变。相同条件下,转染阴性对照siRNA的VSMC不出现上述变化。（4） nelin表达与VSMC收缩功能的关系：收缩型VSMC可对兴奋剂产生收缩反应。结果显示,转染阴性对照siRNA的VSMC血清饥饿后对Ach刺激产生收缩反应,细胞长度缩短,细胞间隙变宽。而转染nelin-siRNA的VSMC血清饥饿后不会对Ach的刺激出现收缩反应。结论（1）体外培养的人大隐静脉平滑肌细胞纯度高,成活率高,结构、功能良好,传代生长3～6d的人大隐静脉VSMC增殖活力较强,是较佳的研究材料。（2） nelin参与血管平滑肌细胞骨架重塑并调节其收缩功能,对其表型转化的调节、收缩表型的维持具有重要作用。

关键词：大隐静脉细胞培养 nelin 血管平滑肌细胞表型转化

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人类新基因nelin及其生物学特性的研究

人类新基因Nelin及其生物学特性的研究

湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

作者：王震孟宪敏郭莲军华中科技大学同济医学院生化和分子生物学系中国医学科学院心血管病研究所

为了寻找和研究心血管系统有关的重要功能基因及其表达模式,通过构建正常成人心脏和主动脉cDNA文库,并在大规模ESTs测定的基础上,筛选出一个新基因nelin。该基因表达的mRNA(GenBank登记号AF114264)全长2736bp,含有一个1344 bp可编码448... 详细信息

为了寻找和研究心血管系统有关的重要功能基因及其表达模式,通过构建正常成人心脏和主动脉cDNA文库,并在大规模ESTs测定的基础上,筛选出一个新基因nelin。该基因表达的mRNA(GenBank登记号AF114264)全长2736bp,含有一个1344 bp可编码448个氨基酸的开放阅读框。前期的Northern blot研究结果表明该基因为肌肉组织内特异表达并在成人心脏中具有一个特异性表

关键词： nelin 细胞骨架蛋白酵母双杂交肌动蛋白蛋白—蛋白相互作用免疫共沉淀

来源： cnki会议评论

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人类新基因nelin及其生物学特性的研究

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