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2012年湖北生物产业发展高端论坛暨湖北省生物工程学会2012年度学术交流会

作者：吕杰王玉晨陈向东武汉大学生命科学学院

上个世纪九十年代,本实验室在湖北应城盐矿分离到了一株嗜盐古生菌natrinema J7,并发现鉴定其携带一个天然质粒pHH205。之后在提取J7质粒pHH205时,我们在其菌液中偶然分离出两株不同的菌株,一个含有质粒pHH205,另一个不含该质粒,我们将... 详细信息

关键词：嗜盐古生菌遗传转化 natrinema 营养缺陷型质粒

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natrinema sp.J7-2遗传操作系统的构建

Natrinema sp.J7-2遗传操作系统的构建

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2012年鄂粤微生物学学术年会——湖北省暨武汉微生物学会成立六十年庆祝大会

作者：吕杰王玉晨陈向东武汉大学生命科学学院

上个世纪九十年代,本实验室在湖北应城盐矿分离到了一株嗜盐古生菌natrinemaJ7,并发现鉴定其携带一个天然质粒pHH205。之后在提取J7质粒pHH205时,我们在其菌液中偶然分离出两株不同的菌株,一个含有质粒pHH205,另一个不含该质粒,我们将... 详细信息

上个世纪九十年代,本实验室在湖北应城盐矿分离到了一株嗜盐古生菌natrinemaJ7,并发现鉴定其携带一个天然质粒pHH205。之后在提取J7质粒pHH205时,我们在其菌液中偶然分离出两株不同的菌株,一个含有质粒pHH205,另一个不含该质粒,我们将其分别命名为J7-1和J7-2。由于natrinema spp.均没有遗传操作系统,为日后能方便的研究相关工作,我们选择natrinema sp.J7-2进行遗传操作系统的构建。通过不同的诱变方法,从NTG(0.75mg/ml)处理的菌中筛选到4株营养缺陷型菌株,经鉴定分别为:1号为Leu,22号为Arg,26号为Lvs,52号为Arg,之后分别确定了1,26,52号营养缺陷型菌株的突变位点,分别是:1号Leu,在1752gene内部有690-701处12bp缺失,这个基因是正向的leuB基因(3-isopropylmalate

关键词：嗜盐古生菌遗传转化 natrinema 营养缺陷型、质粒

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natrinema sp.J7-2遗传操作系统的构建

Natrinema sp.J7-2遗传操作系统的构建

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2012年第五届全国微生物遗传学学术研讨会

作者：吕杰王玉晨陈向东武汉大学生命科学学院

关键词：嗜盐古生菌遗传转化 natrinema 营养缺陷型、质粒

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嗜盐古生菌natrinema属J7-2遗传操作系统的初步构建

嗜盐古生菌Natrinema属J7-2遗传操作系统的初步构建

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中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：王玉晨吕杰陈向东武汉大学生命科学学院

natrinema J7-2,J7-1及CJ7是本实验室保存的natrinema属的三株J7系列嗜盐古生菌,基因组测序结果显示,这三株菌的染色体序列完全一致,唯一的区别是其携带的质粒不同。J7-1含有约16Kb的pHH205,而J7-2中的含有95Kb的pJ7-I,CJ7则不含有任何... 详细信息

natrinema J7-2,J7-1及CJ7是本实验室保存的natrinema属的三株J7系列嗜盐古生菌,基因组测序结果显示,这三株菌的染色体序列完全一致,唯一的区别是其携带的质粒不同。J7-1含有约16Kb的pHH205,而J7-2中的含有95Kb的pJ7-I,CJ7则不含有任何质粒。迄今为止尚无涉及natrinema属遗传操作系统的相关研究报道,本研究以上述三株菌为材料,尝试构建适合该属的遗传操作系统。质粒pHH205虽然没有明显的遗传表型,但前期工作证实其是溶源病毒SNJ1的基因组。而该古菌病毒可感染不含pHH205的菌株J7-2及CJ7形成噬菌斑。将提纯的pHH205用改良后的PEG转化方法导入J7-2及CJ7中,恢复过夜的转化体系再用丝裂霉素C诱导处理,结果发现培养液上清可以J7-2为敏感菌形成噬菌斑,从而证实PEG转化方法也可用于将外源基因导入natrinema属古菌。以此为基础,构建了以Mev为选择标记,含有pHH205全长序列的E coli-natrinema穿梭载体pUC19-Mev-pHH205 i8,后者转化J7-2及CJ7后均成功得到了具有Mev抗性的转化子并能提取到相应的质粒。进一步在pUC19-Mev的基础上构建得到了一系列含有pHH205部分片段的穿梭载体。其中含有8.715Kb的4号片段及2.706Kb 16号片段被证实也具有在J7-2及CJ7菌株中进行自我复制的能力,但它们的转化效率及质粒拷贝数均不及pUC 19-Mev-pHH205 i8。营养缺陷型作为筛选标记被广泛应用于微生物遗传学研究,但迄今为止该遗传标记尚无在natrinema属古菌中进行应用的报道。以NTG以及紫外诱变的方式对J7-2菌株进行诱变处理,成功分离筛选到了4株营养缺陷型菌株。进一步结合该菌的全基因组信息鉴定出了其中3株菌的具体基因突变信息:2个为相应基因的缺失突变,1个为点突变。采用上述PEG转化方法,野生型J7-2基因组,或相关基因的PCR产物或其克隆质粒均可使相应的营养缺陷型菌株恢复成原养型。证实线性片段和环状质粒一样可经人工转化导入J7系列菌株。与此同时,我们还发现来自其它古菌的外源α-淀粉酶基因被克隆到相应质粒载体中后可随目标基因的同源重组被整合到转化子的基因组上,并能成功表达淀粉酶活性。

关键词：嗜盐古生菌 natrinema 遗传操作系统溶源病毒营养缺陷型

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嗜盐古生菌natrinema属J7-2遗传操作系统的初步构建

嗜盐古生菌Natrinema属J7-2遗传操作系统的初步构建

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2013年湖北省暨武汉微生物学会会员代表大会暨学术年会

作者：王玉晨吕杰陈向东武汉大学生命科学学院

natrinema J7-2,J7-1及CJ7是本实验室保存的natrinema属的三株J7系列嗜盐古生菌,基因组测序结果显示,这三株菌的染色体序列完全一致,唯一的区别是其携带的质粒不同。J7-1含有约16Kb的pHH205,而J7-2中的含有95Kb的pJ7-1,a7则不含有任何... 详细信息

natrinema J7-2,J7-1及CJ7是本实验室保存的natrinema属的三株J7系列嗜盐古生菌,基因组测序结果显示,这三株菌的染色体序列完全一致,唯一的区别是其携带的质粒不同。J7-1含有约16Kb的pHH205,而J7-2中的含有95Kb的pJ7-1,a7则不含有任何质粒。迄今为止尚无涉及natrinema属遗传操作系统的

关键词：嗜盐古生菌 natrinema 遗传操作系统溶源病毒营养缺陷型

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Diversity and Antimicrobial Activity of Cultivable Halophilic Archaea from Three Algerian Sites

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Journal of Life Sciences 2013年第10期7卷 1057-1069页

作者： Nacera Imadalou-Idres Alyssa Carre-Mlouka Manon Vandervennet Houa Yahiaoui Jean Peduzzi Sylvie Rebuffat Laboratoryof Applied Microbiology University Abderrahmane Mira of Nature and Life Sciences Targua Ouzemour Bejaia 06000Algeria Communication Molecules and Adaptation of Microorganisms (MCAMUMR 7245 CNRS-MNHN) National Museum of NaturalHistory Paris 75005 France

Hypersaline environments are colonized by communities of microorganisms, which developed adaptations from halotolerant to extreme halophilic lifestyles. Twenty-four halophilic archaeal strains were isolated from three Algerian hypersaline sites, including the solar salterns in Ichekaben and two natural salt lakes at Ouargla and Oran. Almost full-length 16S rRNA genes were amplified using archaeal-specific primers, sequenced and phylogenetically analyzed. Three isolates from the salt lake of Ouargla were affiliated to Halorubrum sp., while six isolates from Ichekaben were natrinema sp.. The remaining strains belonged to the genus Haloarcula, which was identified in the three Algerian sites. A phylogenetic tree of Haloarcula sp. including the two copies of the 16S rRNA gene, showed that two strains group with Haloarcula hispanica, while the other 13 cluster with OHF-1/OHF-2 isolated from French commercial salt. Both natrinema sp. and Haloarcula sp. were persistent at Ichekaben. For the six natrinema sp. isolates, this observation correlates with their capacity to produce antimicrobial compounds, and a DNA fragment closely related to the halocin C8 gene was amplified for five strains.

关键词： Haloarcula natrinema 16S rRNA gene divergence halocin C8 hypersaline.

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