检索结果-南通市图书馆

干细胞标志物Nanog基因检测在肺癌免疫诊断及预后中的意义

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国老年学杂志 2020年第3期40卷 532-534页

作者：郭婧澜谭蓓蓓叶婷刘靳波西南医科大学附属医院检验科四川泸州646000 西南医科大学附属医院核医学科四川泸州646000

目的分析干细胞标志物Nanog基因检测在肺癌诊断及预后中的意义。方法肺癌患者100例分为肺腺癌组与肺鳞癌组。采取实时定量RT-PCR检测癌组织与癌旁组织,检测两组干细胞nanog的基因表达水平,并分析两组不同程度下各组织当中nanog的基因表... 详细信息

目的分析干细胞标志物Nanog基因检测在肺癌诊断及预后中的意义。方法肺癌患者100例分为肺腺癌组与肺鳞癌组。采取实时定量RT-PCR检测癌组织与癌旁组织,检测两组干细胞nanog的基因表达水平,并分析两组不同程度下各组织当中nanog的基因表达量。结果两组发病年龄大致相同,性别、疾病分期、有无淋巴结转移等方面差异均无统计学意义(P>0.05);与Ⅰ期和Ⅱ期对比,Ⅲ期与Ⅳ期患者Nanog基因表达明显升高,且癌组织中Nanog基因表达明显高于癌旁组织(PNanog基因表达明显上升(Pnanog在肺癌中的表达要高于癌旁正常肺组织和良性病变肺组织;在肺癌干细胞CD44+细胞中,nanog表现出高表达状态,nanog高表达的生存率(44%)较低,低表达的生存率(60%)较高,差异有统计学意义(χ^2=4.69,PNanog基因表达明显升高,主要以Ⅲ、Ⅳ期肺癌表达最为显著,细胞分化程度越低,其癌组织中Nanog基因表达越强。

关键词： Nanog基因肺癌干细胞

5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2015年第12期46卷 2176-2184页

作者：张亚妮王颖洁左其生李东张蕾汤贝贝连超毕瑜林张文慧李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活... 详细信息

旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活性及其ESC体外培养条件下多能性维持的影响,为初步阐明Nanog基因的表达调控机制提供理论依据。PCR扩增Nanog基因不同长度片段的启动子序列,定向克隆至pGL3-basic载体和pEGFP-N1构建重组载体;将重组载体转染DF-1细胞后,48h收集蛋白,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定基本转录调控区;将重组载体转染DF-1细胞后添加5-Azadc或TSA对Nanog基因进行诱导表达,并通过双荧光素酶报告基因检测系统,分析其对Nanog基因启动子活性的影响。选取生长至第3代的ESC,培养基中添加最适浓度的5-Azadc和TSA,每隔两天观察细胞,分析其对ESC体外多能性维持的影响,并对诱导至第10天的细胞进行间接免疫荧光检测。结果表明,成功构建3个片段的双荧光素酶报告基因表达载体;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3/1967活性最强;分别添加或者联合添加5-Azadc和TSA均可使Nanog基因的转录活性增强;5-Azadc和TSA诱导对ESC体外培养条件下多能性维持的影响结果显示,诱导6d后,对照组细胞大量分化,细胞克隆无法维持,而5-Azadc和TSA诱导组克隆明显,5-Azadc+TSA联合诱导组细胞克隆数量显著多于对照组;诱导至第10天,对照组细胞完全分化,没有细胞克隆,而诱导组存在大量细胞克隆,联合诱导组克隆数量显著多于其他两组;SSEA-1间接免疫荧光结果显示,对照组没有明显的ESC克隆,而5-Azadc组和联合诱导组细胞克隆明显,综上表明,5-Azadc和TSA可有效地通过提高Nanog基因的表达而维持鸡ESC在体外培养过程中的多能性。

关键词： Nanog基因启动子 5-Azadc TSA 双荧光素酶活性检测系统

转Nanog基因抑制帕金森病大鼠脑内小胶质细胞介导的炎性反应

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基础医学与临床 2014年第12期34卷 1665-1670页

作者：陈施艳张志坚刘丽金林红吴秀丽王伟王志强福建医科大学附属第一医院神经内科福建福州350005

目的探讨转Nanog基因对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病大鼠中脑黑质区小胶质细胞的激活及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法将大鼠随机分为对照、6-OHDA+PBS、6-OHDA+PNL与6-OHDA+nanog组。模型组大鼠左侧纹状体内注射6-OHDA,... 详细信息

目的探讨转Nanog基因对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病大鼠中脑黑质区小胶质细胞的激活及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法将大鼠随机分为对照、6-OHDA+PBS、6-OHDA+PNL与6-OHDA+nanog组。模型组大鼠左侧纹状体内注射6-OHDA,再将PBS、慢病毒空载体PNL-IRES.EGFP(PNL)、转Nanog基因载体分别注入6-OHDA+PBS、6-OHDA+PNL与6-OHDA+nanog组大鼠左侧纹状体;14 d后,注射阿朴吗啡(APO),观察大鼠的旋转行为;免疫组织化学染色观察黑质多巴胺能神经元数量;免疫荧光观测黑质区小胶质细胞数量及TNF-α表达。结果注射后14 d,6-OHDA+nanog组大鼠APO诱发的旋转效应低于6-OHDA+PNL与6-OHDA+PBS组(Pnanog组存活的多巴胺能神经元数量多于6-OHDA+PNL与6-OHDA+PBS组(Pnanog组小胶质细胞数目和TNF-α表达水平低于6-OHDA+PNL与6-OHDA+PBS组(PNanog基因可抑制帕金森病大鼠脑内小胶质细胞活化介导的炎性反应,具有神经元保护作用。

关键词：帕金森病 6-羟多巴胺 Nanog基因小胶质细胞肿瘤坏死因子α

水牛Oct4、Nanog基因的克隆及其在水牛胎儿成纤维细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科学 2014年第2期47卷 394-402页

作者：邓彦飞刘庆友邓海莹罗婵杨素芳石德顺广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室

【目的】转录因子Oct4、nanog是调节干细胞多能性相关的转录因子,在干细胞的分化和胚胎发育中有重要作用。本研究旨在克隆水牛Oct4和Nanog基因、分析基因序列和蛋白结构、构建逆转录表达载体,并在水牛体细胞中表达,为进一步研究其在水... 详细信息

【目的】转录因子Oct4、nanog是调节干细胞多能性相关的转录因子,在干细胞的分化和胚胎发育中有重要作用。本研究旨在克隆水牛Oct4和Nanog基因、分析基因序列和蛋白结构、构建逆转录表达载体,并在水牛体细胞中表达,为进一步研究其在水牛早期胚胎发育中的作用,以及为建立水牛胚胎干细胞系和诱导多能干细胞系（iPSC）奠定基础。【方法】分别从水牛生殖嵴和体细胞中提取RNA和DNA,将RNA反转录成第1链cDNA,参照牛基因序列（Oct4:NM;74580,nanog:NM;01025344）设计特异性引物,采用RT-PCR和PCR分别扩增Oct4和nanog的编码区序列（the coding sequences,CDS）和DNA全长序列,其中Oct4全长DNA分3段扩增,nanog全长DNA分2段扩增;利用生物在线分析软件对水牛Oct4和nanog进行蛋白质结构预测和同源性比对;采用EcoRⅠ、XholⅠ和XholⅠ、NotⅠ双酶切,T4连接酶,将Oct4和nanog的CDS连接到逆转录病毒载体pMX上,构建逆转录表达载体pMX-Oct4和pMX-nanog;采用组织块法培养水牛胎儿成纤维细胞（buffalo fetal fibroblasts,BFFs）,逆转录表达系统经过病毒包装后产生的病毒上清液感染BFFs,感染12—15h后,继续培养48 h;通过RT-PCR和免疫荧光技术检测转基因在BFFs中的表达情况。【结果】Oct4 CDS全长1 083 bp,编码361个氨基酸,DNA全长4 509 bp,包括5个外显子和4个内含子;nanog CDS全长903 bp,编码301个氨基酸,DNA全长4 473 bp,包括4个外显子和3个内含子;将Oct4和Nanog基因序列提交到GenBank,分配的基因登录号分别为JN991003和JN991004;Oct4氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为98%、96%、91%和81%,nanog氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为90%、81%、69%和47%;Oct4和nanog蛋白结构与小鼠相应蛋白的结构相似,分别含有本家族特有的POU结构域和HOX同源结构域;成功构建表达Oct4和nanog的逆转录病毒载体pMX-Oct4和pMX-nanog;逆转录病毒系统pMX介导的Oct4和Nanog基因能转入BFFs中,在mRNA水平和蛋白水平都表达,阴性对照中不表达。【结论】分别克隆了水牛Oct4和nanog的DNA序列全长和CDS,其基因序列和氨基酸序列在物种间高度保守;逆转录病毒转基因方法将Oct4和Nanog基因成功地转入BFFs并表达。逆转录病毒系统介导目的基因表达的转基因方法可以应用于水牛转基因研究和水牛iPSC生产。

关键词：水牛 Oct4基因 Nanog基因克隆异位表达

HPV16 E6和Nanog基因shRNA对宫颈癌SiHa细胞影响的研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

HPV16 E6和Nanog基因shRNA对宫颈癌SiHa细胞影响的研究

作者：叶星光暨南大学

学位级别：硕士

研究目的:宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,全球每年新发病例约有50多万,其中我国约占12%,并有年轻化和上升趋势。高危型人乳头瘤病毒(HPV)是导致宫颈癌发生发展的主要病因,其中HPV16和HPV18型约占70%左右。病毒致癌基因E6/E7蛋白结合... 详细信息

研究目的:宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,全球每年新发病例约有50多万,其中我国约占12%,并有年轻化和上升趋势。高危型人乳头瘤病毒(HPV)是导致宫颈癌发生发展的主要病因,其中HPV16和HPV18型约占70%左右。病毒致癌基因E6/E7蛋白结合并降解抑癌蛋白p53和pRb是导致导致细胞发生恶性转化主要致病机制。研究发现,干细胞关键转录因子Nanog基因在多种肿瘤细胞中表达,Nanog基因可以通过调控Stat3、CyclinD1及MDR1等来调节肿瘤细胞的生长,转移和耐药性。由于肿瘤的发生是多个与癌症相关基因异常表达所导致,两基因的联合治疗可能会得到更好的治疗效果。因此本研究以HPV16 E6和Nanog基因作为肿瘤基因治疗的联合靶点,利用RNAi技术研究同时沉默两基因表达对宫颈癌SiHa细胞的影响,探究其作用的分子机制,为宫颈癌的治疗提供新的方向。研究方法:1.根据siRNA的设计原则,针对人nanog和HPV16 E6的DNA序列,构建两目的基因的短发夹RNA(shRNA),分别命名为shRNA-E6(1,2,3)和shRNA-nanog(1,2,3),并将其连接到pSilencer2.1-U6载体上,构建成重组质粒,利用Lipofectamine3000将其转染宫颈癌SiHa细胞,通过实时荧光定量RT-PCR方法分别检测各个shRNA的抑制效果。2.将抑制效果最明显的shRNA-E6和shRNA-nanog重组载体质粒转染宫颈癌细胞SiHa细胞,RT-PCR方法检测HPV16 E6和nanog mRNA的相对表达情况。3.应用免疫印迹法(Western blot)检测转染shRNA-E6和shRNA-nanog重组载体质粒后SiHa细胞中p53,nanog,STAT3,Cyclin D1蛋白的表达情况。4.应用CCK-8测定shRNA-E6及shRNA-nanog单独转染、共转染后宫颈癌细胞SiHa增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力。5.通过流式细胞仪测定shRNA-E6及shRNA-nanog单独转染、共转染SiHa细胞的凋亡情况和不同时段的细胞周期的分布情况。6.应用SPSS16.0和MS Excel进行统计学处理(检验水准P基因shRNA重组载体质粒shRNA-E6-1,sh RNA-E6-2,shRNA-E6-3和Nanog基因shRNA重组载体质粒shRNA-nanog-1,shRNA-nanog-2,shRNA-nanog-3以及一对阴性对照载体质粒shRNA-Control。2.qRT-PCR的结果显示重组载体质粒shRNA-E6-1,shRNA-E6-2和shRNA-E6-3对SiHa细胞E6 mRNA表达抑制率分别为33.16%,35.13%和52.53%;shRNA-nanog-1,shRNA-nanog-2及shRNA-nanog-3对SiHa细胞nanog mRNA表达抑制率分别为53.67%,54.50%和56.78%。3.Western blot实验结果显示,与转染阴性对照质粒shRNA-Control的C组细胞相比,转染shRNA-E6质粒的E组细胞和shRNA-nanog质粒N组细胞及共转染NE组的SiHa细胞中nanog,STAT3蛋白表达均下调,转染shRNA-nanog质粒N组细胞中Cyclin D1的蛋白表达无差异,nanog,STAT3蛋白表达均下调,转染shRNA-E6质粒的E组细胞中p53蛋白表达上调。4.CCK8和Transwell实验结果显示,shRNA-E6-3及shRNA-nanog-3重组质粒的单独转染、共转染均能使SiHa细胞的增殖活性降低,迁移能力减弱。与单独转染组相比,共转染组细胞的增殖和迁移能力减弱效果更明显(Pnanog单独转染、共转染后宫颈癌细胞SiHa的周期及凋亡情况进行检测,检测结果显示shRNA-E6及shRNA-nanog单独转染、共转染SiHa细胞周期停滞于G0/G1期,凋亡细胞明显增多,共转染组较单独转染组抑制作用更明显(PNanog基因的shRNA表达载体质粒,并成功转染SiHa细胞,转染后能有效沉默HPV16 E6和Nanog基因,下调nanog,STAT3,CyclinD1蛋白的表达,进而减弱宫颈癌SiHa细胞的增殖能力和迁移能力,促进宫颈癌细胞凋亡。共转染nanog和HPV16 E6 shRNA较单独转染对SiHa细胞增殖和迁移能力的减弱效果更明显,细胞凋亡率明显增加,协同促进细胞周期的阻滞,增强抗宫颈癌细胞作用的疗效。

关键词：宫颈癌 RNA干扰 HPV16 E6基因 Nanog基因

转Nanog基因对6-羟基多巴胺帕金森病大鼠脑核因子-κB表达的影响

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国老年学杂志 2014年第22期34卷 6401-6404页

作者：陈施艳冯飞阳张志坚周海涛吴秀丽福建医科大学附属第一医院神经内科福建福州350005

目的探讨转Nanog基因对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠A脑内核因子(NF)-κB表达的影响。方法取SD大鼠随机分成正常对照组、6-OHDA+磷酸盐缓冲液(PBS)组、6-OHDA+PNL组与6-OHDA+nanog组,各组又分注射后1、14 d亚组。除正常对... 详细信息

目的探讨转Nanog基因对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠A脑内核因子(NF)-κB表达的影响。方法取SD大鼠随机分成正常对照组、6-OHDA+磷酸盐缓冲液(PBS)组、6-OHDA+PNL组与6-OHDA+nanog组,各组又分注射后1、14 d亚组。除正常对照组外,采用脑立体定向注射技术,6-OHDA+PBS组注入PBS,6-OHDA+PNL组注入空载体,6-OHDA+nanog组注入转Nanog基因载体。各组动物注射阿朴吗啡(APO)后观察各时间点大鼠的旋转行为改变;行脑免疫组织化学染色,观察黑质多巴胺(DA)能神经元数量变化、纹状体NF-κBp65的表达改变;激光扫描共聚焦显微镜技术检测NF-κBp65表达的定位。结果注射后14 d,6-OHDA+nanog组大鼠APO诱发的旋转效应明显低于6-OHDA+PNL组与6-OHDA+PBS组(Pnanog组损毁侧黑质存活的TH阳性细胞数明显高于6-OHDA+PNL组与6-OHDA+PBS组(PNanog基因可抑制6-OHDA诱导的PD大鼠模型脑内NF-κB的活化,同时具有神经元保护作用。

关键词：帕金森病(PD) 6-羟多巴胺 Nanog基因核因子-κB

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Nanog基因在宫颈癌中的表达及其意义

西安交通大学学报（医学版） 2010年第1期31卷 26-31页

作者：文雯冀静郑鹏生西安交通大学医学院第一附属医院妇产科学系生殖医学科陕西西安710061 西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

目的研究nanog在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法用免疫组织化学检测正常宫颈、宫颈原位癌及宫颈癌中nanog的表达;分别用原代宫颈癌肿瘤球细胞及肿瘤球分化细胞接种裸鼠,观察移植瘤的生长情况。结果与正常组织相比,... 详细信息

目的研究nanog在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法用免疫组织化学检测正常宫颈、宫颈原位癌及宫颈癌中nanog的表达;分别用原代宫颈癌肿瘤球细胞及肿瘤球分化细胞接种裸鼠,观察移植瘤的生长情况。结果与正常组织相比,宫颈原位癌及宫颈癌中Nanog基因的表达显著增强(Pnanog在介导宫颈癌的发生过程中起到重要作用。

关键词：宫颈癌 Nanog基因肿瘤干细胞

大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因的表达及启动子区甲基化观察

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

山东医药 2017年第31期57卷 13-16页

作者：刘钦成张梓朗潘润华刘宁韩晓玉郭凌宏王春明廖彩仙南方医科大学南方医院广州510515

目的观察大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因表达及启动子区CpG位点的甲基化变化。方法大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞在体外用25μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松诱导其分化,在诱导第0、7、14天分... 详细信息

目的观察大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因表达及启动子区CpG位点的甲基化变化。方法大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞在体外用25μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松诱导其分化,在诱导第0、7、14天分别提取细胞DNA和RNA。采用实时荧光定量PCR法检测Klf4、Nanog基因mRNA,甲基化特异性PCR法观察Klf4、Nanog基因启动子区CpG位点甲基化。结果与诱导第0天比较,第7、14天Klf4 mRNA相对表达量降低(P均nanog mRNA相对表达量均降低(P均nanog启动子区第1个CpG位点甲基化频率降低,第2个CpG位点甲基化频率升高,P均nanog启动子区第1个CpG位点甲基化频率升高,第2个CpG位点甲基化频率降低,P均Nanog基因表达随诱导时间增加呈现先下降后回升趋势,两者启动子区CpG位点甲基化程度随诱导时间增加出现不同程度变化;Klf4和Nanog基因启动子区CpG位点的甲基化变化不仅会影响Klf4、Nanog基因的表达,而且起到重要的调控作用。

关键词：骨髓间充质干细胞 CD90^+Lin^-骨髓细胞 Nanog基因 Klf4基因

Nanog基因在侧群表型干细胞样肝癌细胞中的表达及意义

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中山大学学报（医学科学版） 2014年第1期35卷 12-17页

作者：周嘉嘉陈汝福邓小耿周雨周泉波张杰伍耀豪曾乐祥邱荣林中山大学孙逸仙纪念医院外科广东广州510120

【目的】基于侧群(SP)细胞分选方法,从肝癌细胞Huh7和Hep3B中分选SP表型干细胞样肝癌细胞,观察干细胞标记物Nanog基因在该SP表型肝癌细胞中的表达。【方法】采用流式细胞术检测和分选肝癌细胞Huh7和Hep3B中的SP细胞和非侧群(NSP)细胞,... 详细信息

【目的】基于侧群(SP)细胞分选方法,从肝癌细胞Huh7和Hep3B中分选SP表型干细胞样肝癌细胞,观察干细胞标记物Nanog基因在该SP表型肝癌细胞中的表达。【方法】采用流式细胞术检测和分选肝癌细胞Huh7和Hep3B中的SP细胞和非侧群(NSP)细胞,细胞生长曲线法检测SP和NSP细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验检测SP和NSP细胞的侵袭能力,MTT法检测SP和NSP细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)和阿霉素(DOX)的药物敏感性;Real-time PCR和WB检测SP与NSP细胞中Nanog基因的表达。【结果】肝癌细胞Huh7和Hep3B中分选的SP细胞比例分别为(5.3±0.8)%和(13.49±1.0)%。生长曲线表明Huh7和Hep3B的SP细胞的增殖速度快于NSP细胞(Pnanog mRNA平均表达水平分别是NSP细胞的4.17和5.51倍(Pnanog蛋白平均表达水平分别是NSP细胞的3.78和5.01倍(PNanog基因在SP表型干细胞样肝癌细胞中高表达。

关键词：肝癌侧群细胞肿瘤干细胞 Nanog基因