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高致病性PRRSV的分离及其nsp2和ORF5基因的序列分析

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 650-657页

作者：马静云李浩波王玲玲何晓明王连想谢青梅毕英佐华南农业大学动物科学学院广东广州510642

从广东省不同地区疑似高致病性猪生殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc-145细胞病变的病毒，经RT-PCR检测，确定分离物中存在美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），将此细胞病毒液命名为GDBl，用其感染回归5头40日龄健康仔猪，采... 详细信息

从广东省不同地区疑似高致病性猪生殖与呼吸综合征病料中分离出能引起Marc-145细胞病变的病毒，经RT-PCR检测，确定分离物中存在美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），将此细胞病毒液命名为GDBl，用其感染回归5头40日龄健康仔猪，采集发病及死亡猪组织，重新用Marc-145细胞进行病毒分离，将再次分离到的病毒命名为GDB1F。对GDB1、GDBIF的nsp2、ORF5基因序列进行测定分析。结果表明，单独感染猪2／2发病死亡，同居感染的3头猪全部发病，2头死亡；感染后2～4d所有感染猪均出现体温升高。死亡猪表现为严重的出血性、间质性肺炎，肢体远端皮表出血。序列分析结果表明，GDB1和GDB1F株的nsp2基因与国内高致病性PRRSV分离株JXA1、HN2nsp2、HNXT1、HNyz、HUB2、HUN1的同源性很高，达98．4％～99．0％。GDB1和GDB1F株的ORF5基因存在部分突变，没有缺失，与国内高致病性PRRSV分离株JXA1、HUB2、JX0612、GDZC1的同源性高达97．5％～99．8％。

关键词：高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒分离 nsp2基因 ORF5基因序列分析

3株PRRSV变异株理化特性研究及nsp2、ORF5基因序列分析

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中国兽医学报 2010年第5期30卷 565-568页

作者：王连想孙彦伟马静云曹永长任裕其田云谢青梅毕英佐于康震广东省动物防疫监督总所广东广州510230 华南农业大学动物科学学院广东广州510642 中山大学生命科学学院广东广州510275 中国兽医药品监察所北京100081

用Marc-145细胞从广东省3个发病猪群分离到3株病毒,经RT-PCR方法鉴定为PRRSV变异株(nsp21594～1680bp缺失)。3株分离株第1代均对Marc-145细胞适应性不强,第2代可致典型病变,第3代TCID50分别为103.67、104.20、104.75mL-1;在透射电镜下... 详细信息

用Marc-145细胞从广东省3个发病猪群分离到3株病毒,经RT-PCR方法鉴定为PRRSV变异株(nsp21594～1680bp缺失)。3株分离株第1代均对Marc-145细胞适应性不强,第2代可致典型病变,第3代TCID50分别为103.67、104.20、104.75mL-1;在透射电镜下观察主要为40～70nm大小的圆形、椭圆形具有囊膜的病毒粒子;均对氯仿、酸、碱和热敏感。3株分离株nsp2基因与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比均存在2个位点30个氨基酸缺失,与JXA1、HUN4、HPDEBV等变异株具有相同缺失特性且高度相似,相似性为98.1%～98.3%。ORF5基因均由200个氨基酸组成,与JX-A1、HUN4、HPDEBV等变异株高度相似,相似性为98.5%～99.0%,且第13、151位均为具有强毒特性的精氨酸(R)。本研究进一步证实在广东省内出现以nsp2缺失30个氨基酸为特征PRRSV变异株的流行,也为科学监测和综合防控该毒株感染引起的PRRS奠定了基础。

关键词：猪繁殖呼吸综合征病毒 nsp2基因 ORF5基因分离理化特性

公猪精液PRRSV变异株检测及nsp2、ORF5基因序列分析

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华南农业大学学报 2009年第2期30卷 109-111页

作者：王连想孙彦伟马静云张冠群谢青梅陈锋毕英佐于康震广东省动物防疫监督总所广东广州510230 华南农业大学动物科学学院广东广州510642 中国兽医药品监察所北京100081

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(nsp2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其nsp2和ORF5全基因序列,结... 详细信息

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(nsp2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其nsp2和ORF5全基因序列,结果表明nsp2基因由950个氨基酸组成,与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比481位缺失1个氨基酸、532～560位连续缺失29个氨基酸,与JXA1、HUN4等毒株具有相同的缺失特性;ORF5基因第13、151位为具有强毒特性的精氨酸(R),存在4个潜在的糖基化位点,分别位于30～32、35～37、44～46和51～53位氨基酸.遗传进化分析表明,测定序列与JX-A1、HUN4等毒株关系最近,与CH-1a、NVSL等同属一个大分支,而与BJ-4、P129、RespPRRS MLV、VR-2332等处于不同分支.研究证实公猪精液可携带PRRSV变异株,因此猪场(群)在人工授精和引进精液时必须强化检疫和生物安全措施.

关键词：精液猪繁殖呼吸综合征病毒变异株 nsp2基因 ORF5基因

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株nsp2和GP5基因遗传变异分析

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华北农学报 2012年第2期27卷 100-104页

作者：卢晓艳周永辉李伟娟张志远刘肖萍段二珍夏平安崔保安河南农业大学牧医工程学院．河南郑州450002

扩增了自2006-2009年间从河南省不同地区分离的9株PRRSV株nsp2和GP5编码基因,并进行了序列测定和分析。结果显示,9株分离株nsp2全长2 850～2 937 bp,编码950～979个氨基酸,GP5基因全长603 bp,编码200个氨基酸,与CH-1a株比对,其中有7株... 详细信息

扩增了自2006-2009年间从河南省不同地区分离的9株PRRSV株nsp2和GP5编码基因,并进行了序列测定和分析。结果显示,9株分离株nsp2全长2 850～2 937 bp,编码950～979个氨基酸,GP5基因全长603 bp,编码200个氨基酸,与CH-1a株比对,其中有7株分离株的nsp2基因均出现30个氨基酸的缺失。对9株分离株nsp2和GP5基因进行核苷酸序列分析并绘制进化树,结果表明,9株河南分离株都属于美洲型毒株,对9株PRRSV分离株nsp2和GP5基因同时进行序列分析,比较其变异结果是否一致,为进一步探寻PRRSV流行株遗传变异规律奠定了基础。

关键词： PRRSV nsp2基因 ORF5基因克隆变异分析

我国苏皖地区PRRSV nsp2和ORF5基因的遗传变异分析

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中国兽医学报 2011年第7期31卷 955-960页

作者：李彬何孔旺温立斌俞正玉茅爱华王小敏张雪寒郭容利倪艳秀周俊明吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异特征,采用RT-PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明:22株PRRSV均属于美洲型毒株,其... 详细信息

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异特征,采用RT-PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明:22株PRRSV均属于美洲型毒株,其中21个毒株的nsp2存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征;而且此21个毒株的ORF5基因推导的氨基酸序列也发生多处突变,集中出现在毒力相关位点、抗原表位和糖基化位点序列中。只有HZNJ株与疫苗株的同源性较高。进化树分析显示,21个分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,而HZNJ株与疫苗毒株有较近的亲缘关系,进一步说明高致病性PRRSV已成为该地区的优势流行毒株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 ORF5基因遗传变异

2010年-2011年广东地区PRRSV nsp2和ORF5基因的遗传变异分析

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动物医学进展 2012年第7期33卷 43-48页

作者：彭海滨苏润环潘永飞宋延华李玉谷华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东省温氏食品集团研究院广东新兴527400

为了解2010年-2011年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况,采用RT-PCR方法扩增所分离的16株PRRSV的nsp2和ORF5的基因,应用DNA Star、ClustalX2和MEGA5等对所得序列进行比对及遗传变异分析。16株PRRSV的nsp2和O... 详细信息

为了解2010年-2011年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况,采用RT-PCR方法扩增所分离的16株PRRSV的nsp2和ORF5的基因,应用DNA Star、ClustalX2和MEGA5等对所得序列进行比对及遗传变异分析。16株PRRSV的nsp2和ORF5基因的推导氨基酸序列同源性分别为75.3%～100%和87.5%～100%,与国内高致病性PRRSV代表毒株JXA1的氨基酸同源性分别为74.2%～98.2%和87.5%～99%。nsp2遗传进化分析显示,这16株PRRSV均属于美洲型毒株,其中15株病毒与以JXA1为代表的国内流行毒株处于同一分支,属美洲亚群Ⅰ;另外1株病毒与VR-2332和疫苗株MLV处在同一分支,属美洲亚群Ⅱ。2010年-2011年广东地区流行毒株仍为高致病性PRRSV,且存在经典疫苗毒株MLV。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 ORF5基因遗传变异

猪繁殖与呼吸综合征病毒WF-1株的分离鉴定及nsp2和ORF5基因的变异分析

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西南农业学报 2010年第4期23卷 1264-1270页

作者：李坤吴家强张金强李俊于江刘洋张玉玉刘少宁王兆周顺王金宝青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东济南250100 山东农业大学动物科技学院山东泰安271000

从山东某大型猪场患"猪高热病"的病料中分离到1株病毒,该病毒可在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将其命名为WF-1株。用RT-PCR法分别扩增该分离株的nsp2基因和ORF5基... 详细信息

从山东某大型猪场患"猪高热病"的病料中分离到1株病毒,该病毒可在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将其命名为WF-1株。用RT-PCR法分别扩增该分离株的nsp2基因和ORF5基因,并进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV WF-1株的nsp2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与PRRSV参考变异株JXA1相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.0%、94.2%、86.4%,氨基酸同源性分别为97.5%、94.0%、87.5%。基因遗传进化树分析结果显示,WF-1株与2006～2008年期间分离的JXA1、SX-1等高致病性变异株的亲缘关系很近,与1996年分离的中等毒力毒株CH-1a亲缘关系较远,与VR2332、CC-1、MLV等弱毒株或疫苗株处于不同的分支。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分离 nsp2基因 ORF5基因变异分析

2016-2017年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子检测及nsp2、ORF5基因变异分析

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中国兽医杂志 2019年第4期55卷 25-30,34页

作者：徐铮周吉培申翰钦刘相聪于林洋董建国张乐宜刘燕玲王磊梁鹏帅宋长绪华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东广州510642 信阳农林学院牧医工程学院河南信阳464000

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在广东流行毒株的分子遗传变异情况和发展趋势,通过RT-PCR方法,对2016-2017年采自广东省各地906份疑似病料进行PRRSV检测,并对其中9株PRRSV的nsp2和ORF5基因进行测序及遗传变异分析。结果显示,有39... 详细信息

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在广东流行毒株的分子遗传变异情况和发展趋势,通过RT-PCR方法,对2016-2017年采自广东省各地906份疑似病料进行PRRSV检测,并对其中9株PRRSV的nsp2和ORF5基因进行测序及遗传变异分析。结果显示,有399份样品被检出为阳性,阳性率达到44%;通过nsp2和ORF5基因序列比对和遗传进化分析,发现广东流行毒株主要为美洲型PRRSV,且全部9株与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)高度同源;其中7株的nsp2蛋白存在与HP-PRRSV相同的1+29个氨基酸的不连续缺失特征;9株GP5蛋白的2个重要抗原相关区域的氨基酸位变化特征与HP-PRRSV一致,与美洲型代表株VR-2332相比变异明显。结果表明,PRRSV在广东流行的情况仍比较严重,当前HP-PRRSV依然是广东的优势病毒株,提示对PRRSV的流行和变异进行持续监测是有必要的,还应加强对其致病机理和新型疫苗研发等的深入研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 ORF5基因遗传变异分析

2013年-2014年江西地区PRRSV分离株nsp2及ORF5基因的遗传变异分析

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中国畜牧兽医 2015年第9期42卷 2254-2261页

作者：李海琴林娟刘垒季华员江西省农业科学院畜牧兽医研究所南昌330200 南昌市动物疫病预防控制中心南昌330008 新余市渝水区下镇村农技站新余338000

为研究江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF5基因的变异情况及nsp2基因的结构特征,采用RT-PCR方法扩增了12份江西地区猪场疑似患PRRS的猪肺脏样品中的ORF5全序列和nsp2部分序列,应用DNAStar和Mega 6.0等软件对所得序列进行同源... 详细信息

为研究江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF5基因的变异情况及nsp2基因的结构特征,采用RT-PCR方法扩增了12份江西地区猪场疑似患PRRS的猪肺脏样品中的ORF5全序列和nsp2部分序列,应用DNAStar和Mega 6.0等软件对所得序列进行同源性比对及遗传变异分析。12株PRRSV ORF5核苷酸同源性为83.7%~99.8%,氨基酸同源性为82.1%~99.5%;与参考毒株JXA1、VR-2332和LV的核苷酸同源性分别为84.9%~99.7%、85.2%~91.0%和62.4%~64.8%。对阳性病料进行了nsp2基因部分序列的扩增,测序结果显示12株PRRSV均属于美洲型毒株,12株PRRSV的nsp2部分序列均存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征。12株PRRSV的ORF5遗传进化树分析显示,10株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,进一步说明高致病性PRRSV已成为江西地区的优势流行毒株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 nsp2基因变异分析