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KIF17 Modulates Epileptic Seizures and Membrane Expression of the NMDA Receptor Subunit nr2b

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Neuroscience bulletin 2022年第8期38卷 841-856页

作者： Yan Liu Xin Tian Pingyang Ke Juan Gu Yuanlin Ma Yi Guo Xin Xu Yuanyuan Chen Min Yang Xuefeng Wang Fei Xiao Department of Neurology The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical UniversityChongqing Key Laboratory of NeurologyChongqing400016China

Epilepsy is a common and severe brain disease affecting>65 million people worldwide.Recent studies have shown that kinesin superfamily motor protein 17(KIF17)is expressed in neurons and is involved in regulating the dendrite-targeted transport of N-methyl-D-aspartate receptor subtype 2b(nr2b).However,the effect of KIF17 on epileptic seizures remains to be explored.We found that KIF17 was mainly expressed in neurons and that its expression was increased in epileptic brain tissue.In the kainic acid(KA)-induced epilepsy mouse model,KIF17 overexpression increased the severity of epileptic activity,whereas KIF17 knockdown had the opposite effect.In electrophysiological tests,KIF17 regulated excitatory synaptic transmission,potentially due to KIF17-mediated nr2b membrane expression.In addition,this report provides the first demonstration that KIF17 is modified by SUMOylation(SUMO,small ubiquitin-like modifier),which plays a vital role in the stabilization and maintenance of KIF17 in epilepsy.

关键词： Epilepsy KIF17 nr2b SUMOylation

Polygalasaponin F protects hippocampal neurons against glutamate-induced cytotoxicity

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Neural Regeneration Research 2022年第1期17卷 178-184页

作者： Chong Sun Xin-Cheng Cao Zhi-Yang Liu Chao-Lin Ma bao-Ming Li Laboratory of Cognitive Function and Disorder Institute of Life ScienceNanchang UniversityNanchangJiangxi ProvinceChina Institute of brain Science and Department of Psychology School of EducationHangzhou Normal UniversityHangzhouZhejiang ProvinceChina

Excess extracellular glutamate leads to excitotoxicity,which induces neuronal death through the overactivation of N-methyl-D-aspartate receptors(NMDARs).Excitotoxicity is thought to be closely related to various acute and chronic neurological disorders,such as stroke and Alzheimer’s disease.Polygalasaponin F(PGSF)is a triterpenoid saponin monomer that can be isolated from Polygala japonica,and has been reported to protect cells against apoptosis.To investigate the mechanisms underlying the neuroprotective effects of PGSF against glutamateinduced cytotoxicity,PGSF-pretreated hippocampal neurons were exposed to glutamate for 24 hours.The results demonstrated that PGSF inhibited glutamate-induced hippocampal neuron death in a concentration-dependent manner and reduced glutamate-induced Ca^(2+)overload in the cultured neurons.In addition,PGSF partially blocked the excess activity of NMDARs,inhibited both the downregulation of NMDAR subunit nr2A expression and the upregulation of NMDAR subunit nr2b expression,and upregulated the expression of phosphorylated cyclic adenosine monophosphate-responsive element-binding protein and brain-derived neurotrophic factor.These findings suggest that PGSF protects cultured hippocampal neurons against glutamate-induced cytotoxicity by regulating NMDARs.The study was approved by the Institutional Animal Care Committee of Nanchang University(approval No.2017-0006)on December 29,2017.

关键词： bDNF Ca^(2+)homeostasis excitotoxicity glutamate hippocampal neurons pCREb polygalasaponin F neuroprotection nr2A nr2b

电针联合壮医药线点灸对带状疱疹后遗神经痛模型大鼠脑组织nr1、nr2b的影响

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中华中医药学刊 2023年第2期41卷 167-171,I0026页

作者：韦日铺徐崟唐晓李锦颜广西中医药大学附属瑞康医院广西南宁530000 广西中医药大学附属国际壮医医院广西南宁530000

目的观察电针、药线点灸、电针合药线点灸对带状疱疹后遗神经痛模型大鼠的镇痛效果及作用机制。方法将50只大鼠随机等分为5组,10只为空白对照组,另40只采用RTX腹腔注射来复制实验模型,造模成功后随机等分为模型对照组、电针治疗组、药... 详细信息

目的观察电针、药线点灸、电针合药线点灸对带状疱疹后遗神经痛模型大鼠的镇痛效果及作用机制。方法将50只大鼠随机等分为5组,10只为空白对照组,另40只采用RTX腹腔注射来复制实验模型,造模成功后随机等分为模型对照组、电针治疗组、药线点灸治疗组、电针合药线点灸治疗组,共干预14 d。观察各组机械性痛阈(Paw withdrawl threshold,PWT)的改变,取脑组织,采用免疫印迹法(Western blot,Wb)法检测nr1、nr2b磷酸化水平的变化,采用实时荧光定量检测(real-time fluorescencespectrometry,QPCR)nr1、nr2b mRNA表达的变化。结果(1)PWT:在注射后1、4、7、14、21、36 d检测,模型对照组的大鼠PWT值依次降低,与空白对照组对比有显著差异(P2)Wb结果:采用IPP软件蛋白条带灰度值进行分析,结果表明,与空白组比较,模型组nr1,P-nr1、nr2b、P-nr2b的表达明显增加(Pnr1及P-nr2b蛋白表达量均明显降低(Pnr1 mRNA表达:模型对照组脑组织中nr1 mRNA表达水平最高,明显高于其余4组,数据差异有统计学意义(Pnr1 mRNA表达水平明显低于单纯电针治疗组和药线点灸治疗组,差异显著(Pnr2b mRNA表达:模型对照组、电针治疗组、药线点灸治疗组nr2b mRNA表达量较空白对照组均明显升高(Pnr2b mRNA表达量显著高于电针治疗组、药线点灸治疗组和电针合药线点灸治疗组(Pnr2b mRNA表达量最低。结论电针及药线点灸对大鼠的机械性痛阈具有显著的提升效果,可减轻大鼠后遗神经痛,两种疗法联合治疗可起到协同增效的作用,其镇痛机制可能与下调脑组织中nr1、nr2b水平相关。

关键词：电针壮医药线点灸带状疱疹后遗神经痛脑组织 nr1 nr2b

nr2b亚基磷酸化在缺血/低氧神经保护中的作用

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中国比较医学杂志 2023年第1期33卷 125-129页

作者：刘晓蕾姜树原邵国谢雅彬贾小娥谢伟包头医学院药学院内蒙古包头014040 内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室内蒙古包头014040 泰国格乐大学国际学院公共卫生学系泰国曼谷10220 深圳市龙岗区第三人民医院转化医学中心检验科广东深圳518112

N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体在神经系统功能中起着关键作用。nr2b亚基是NMDA受体的调节亚单位,在低氧/缺血神经保护中有重要作用。nr2b磷酸化是调节NMDA受体功能的重要机制,通过磷酸化的变化在缺血/低氧神经保护中发挥重要作用。本文... 详细信息

N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体在神经系统功能中起着关键作用。nr2b亚基是NMDA受体的调节亚单位,在低氧/缺血神经保护中有重要作用。nr2b磷酸化是调节NMDA受体功能的重要机制,通过磷酸化的变化在缺血/低氧神经保护中发挥重要作用。本文综述了NMDA受体nr2b亚基的结构、功能、磷酸化、信号通路与缺血/低氧神经保护的关系,为以nr2b亚基为靶点进行低氧/缺血脑疾病的防治工作提供思路。

关键词： NMDA nr2b 缺血/低氧磷酸化神经保护

KIF17调节癫痫发作和NMDA受体亚基nr2b膜表达

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KIF17调节癫痫发作和NMDA受体亚基NR2B膜表达

作者：刘燕重庆医科大学

学位级别：硕士

研究背景癫痫是一种常见而严重的脑部疾病,全世界约有6500万人罹患该病。尽管在过去已有超过40种抗癫痫药物(Anti-seizure medication,ASM)成功研发,但仍有1/3的患者发展成耐药性癫痫(Drug-resistant epilepsy,DRE),因此寻找新的抗癫痫... 详细信息

研究背景癫痫是一种常见而严重的脑部疾病,全世界约有6500万人罹患该病。尽管在过去已有超过40种抗癫痫药物(Anti-seizure medication,ASM)成功研发,但仍有1/3的患者发展成耐药性癫痫(Drug-resistant epilepsy,DRE),因此寻找新的抗癫痫策略以及靶点是必要的。研究表明,驱动蛋白超家族(kinesin superfamily proteins,KIFs)的KIF17是一种在神经元中表达的驱动蛋白,参与N-甲基-D-天冬氨酸受体2b亚基(N-methyl-d-aspartate receptor nr2b subunit,nr2b)树突靶向转运的调控,对突触处nr2b的表达以及突触可塑性调节具有重要意义。KIF17在神经元的定位和功能显示出与癫痫发生的相关性,这可能为癫痫机制的研究和药物研发提供新的思路。研究目的本团队前期已经就KIF17在癫痫患者脑组织和慢性癫痫小鼠脑组织中的表达以及对癫痫的行为学和部分电生理进行了研究。基于此,本课题将进一步探究KIF17在癫痫脑组织的定位,对癫痫电生理的影响及其调控癫痫发作更为深入的分子机制。为KIF17作为抗癫痫靶点提供实验依据。研究方法分别运用免疫荧光及免疫印迹研究KIF17在癫痫脑组织中的定位及表达。利用在体场电位和离体膜片钳技术检测干预海马KIF17的表达对癫痫发作行为学及电生理的影响。利用免疫印迹方法检测干预海马KIF17的表达对nr2b表达的影响,采用免疫共沉淀检测癫痫环境下KIF17/nr2b复合物的形成情况和KIF17的类泛素化修饰(Small ubiquitin-like modifier,SUMO)变化。研究结果免疫荧光结果显示,在癫痫小鼠模型脑组织中KIF17主要表达于神经元,包括谷氨酸能和中间能神经元。亚细胞定位显示KIF17主要与兴奋性突触后标记共定位。免疫印迹提示KIF17在癫痫小鼠模型海马呈现动态表达。海马内过表达KIF17促进癫痫发作,抑制KIF17表达则减轻癫痫发作的严重程度;海马脑片电生理结果表明,干预KIF17不影响配对脉冲比(Paired-pulse ratio,PPR);同时,海马内过表达KIF17增加了自发性兴奋性突触后电流(Spontaneous Excitatory Postsynaptic Current,s EPSC)的幅值,抑制海马内KIF17表达后表现相反的结果。过表达KIF17显著增加了nr2b的神经元细胞膜表达,而不对神经元总nr2b含量产生影响。同时,与正常对照相比,在癫痫海马中KIF17/nr2b复合物明显增加,提示在癫痫中KIF17对nr2b的膜转运增加;免疫共沉淀结果表明,SUMO1介导了KIF17的SUMO化修饰,在癫痫中KIF17的SUMO化水平增加;在体外培养的原代神经元及癫痫模型中,抑制KIF17的SUMO化水平会降低KIF17的表达。研究结论KIF17主要表达于神经元兴奋性突触后区域并在癫痫脑组织中显著升高。抑制海马内KIF17表达能减轻癫痫发作严重程度,这可能是通过改变nr2b膜转运影响兴奋性突触传递实现的。此外,KIF17可以被SUMO化修饰,KIF17的SUMO化修饰对于维持癫痫环境中KIF17的稳定性具有重要作用。

关键词：癫痫 KIF17 nr2b SUMO化

li-pilo颞叶癫痫大鼠认知障碍与年龄的相关性

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华中科技大学学报（医学版） 2022年第2期51卷 207-211页

作者：李承罗小青孙瑞迪刘明洋江军华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院临床神经电生理室武汉430016

目的探讨氧化锂-匹罗卡品(li-pilo)致癫痫大鼠认知障碍与年龄的相关性研究及其可能的致病机制。方法新生SD大鼠在出生后第21天经腹腔注射氯化锂及匹罗卡品,建立癫痫大鼠模型。采用Racine分级评价大鼠癫痫发作行为,选择点燃后出现Racine... 详细信息

目的探讨氧化锂-匹罗卡品(li-pilo)致癫痫大鼠认知障碍与年龄的相关性研究及其可能的致病机制。方法新生SD大鼠在出生后第21天经腹腔注射氯化锂及匹罗卡品,建立癫痫大鼠模型。采用Racine分级评价大鼠癫痫发作行为,选择点燃后出现RacineⅣ级以上表现并存活的大鼠进行实验。造模后根据年龄分为1个月(1 M)、2个月(2 M)及3个月(3 M)癫痫模型,分别通过Morris水迷宫实验观察不同年龄癫痫大鼠的学习记忆功能;应用离体场电位的电生理学方法观察比较不同年龄癫痫大鼠场电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)的变化;采用Western blot检测不同年龄癫痫大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2b(nr2b)表达水平。结果(1)水迷宫实验中,1 M癫痫大鼠第1~5天平均潜伏期及运动总路程与年龄匹配对照大鼠相比均无明显改变;2 M癫痫大鼠的第1~3天平均潜伏期及运动总路程与年龄匹配对照大鼠相比无明显改变,第4~5天平均潜伏期及运动总路程显著长于年龄匹配对照大鼠;3 M癫痫大鼠的第1~5天平均潜伏期及运动总路程均显著长于年龄匹配对照大鼠。(2)离体脑片场电位记录显示,高频刺激后癫痫大鼠海马基础场电位斜率与幅值呈现年龄依赖性减弱。(3)Western blot结果显示癫痫大鼠海马nr2b表达水平呈现年龄依赖性降低。结论癫痫大鼠认知障碍程度与年龄相关,其可能机制与nr2b受体表达年龄依赖性降低导致海马LTP年龄依赖性减弱有关。

关键词：癫痫认知障碍长时程增强 nr2b

前额叶皮层和海马nr2b对大鼠焦虑样行为的影响及其机制研究

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前额叶皮层和海马NR2B对大鼠焦虑样行为的影响及其机制研究

作者：章帆三峡大学

学位级别：硕士

背景:焦虑症作为当今社会常见的精神类疾病,给家庭和社会带来巨大的经济负担。以往焦虑症的药物治疗主要包括γ-氨基丁酸、5-羟色胺能系统等药物,其伴随不良副作用极大限制了药物的临床应用。因此,探究焦虑症的发病机制具有重要的临床... 详细信息

背景:焦虑症作为当今社会常见的精神类疾病,给家庭和社会带来巨大的经济负担。以往焦虑症的药物治疗主要包括γ-氨基丁酸、5-羟色胺能系统等药物,其伴随不良副作用极大限制了药物的临床应用。因此,探究焦虑症的发病机制具有重要的临床价值和社会意义。大量研究表明N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)能够参与影响各方面的情绪,包括恐惧、焦虑和抑郁。而nr2b作为NMDA受体重要调节亚基,在缺血性脑损伤、癫痫、精神分裂症、焦虑症等神经精神疾病中发挥重要作用。因此,深入研究nr2b在焦虑症中确切作用机制,有助于探索焦虑症潜在的治疗靶点。目的:利用腺相关病毒载体构建前额叶皮层(prefrontal cortex,PFC)和海马(hippocampus,HIP)nr2b基因敲低和过表达大鼠模型,并研究PFC和HIP中nr2b基因敲低和过表达对大鼠焦虑样行为的影响及其相关机制。方法:(1)选用10周龄雄性SD大鼠,nr2b基因敲低包括正常组、对照组、nr2b基因敲低组;nr2b基因过表达包括正常组、对照组、nr2b基因过表达组。构建nr2b基因敲低和过表达病毒载体,并通过立体定位仪定位,将腺相关病毒载体分别注射大鼠的PFC和HIP中。饲养4周后通过旷场实验、高架十字迷宫实验检测大鼠焦虑样行为。(2)通过荧光显微镜观察注射点周围病毒扩散情况,并且通过免疫印迹、实时荧光定量PCR技术检测nr2b蛋白及m RNA的表达,检验nr2b基因敲低和过表达大鼠模型是否成功。(3)利用免疫印迹和实时荧光定量PCR技术分别检测PFC和HIP中nr2b基因敲低后HCN1、HCN2、TRIP8b、AP-2α蛋白及其m RNA表达。(4)利用免疫印迹和实时荧光定量PCR技术分别检测PFC和HIP中nr2b基因过表达后HCN1、HCN2、TRIP8b、AP-2α蛋白及其m RNA表达。(5)利用免疫荧光检测PFC和HIP中nr2b基因敲低后神经元或星型胶质细胞中HCN1、HCN2的表达。(6)利用免疫荧光检测PFC和HIP中nr2b基因过表达后神经元或星型胶质细胞中HCN1、HCN2的表达。结果:(1)PFC中nr2b基因敲低会导致大鼠产生焦虑样行为,并且PFC中HCN1、HCN2、TRIP8b、AP-2α总蛋白及m RNA表达均降低。此外,PFC中HCN1的胞浆、胞膜的蛋白表达均降低。并且PFC神经元中HCN1、HCN2表达均降低。(2)HIP中nr2b基因敲低会导致大鼠产生焦虑样行为,并且HIP中HCN2、TRIP8b、AP-2α总蛋白及m RNA表达均降低,HCN1 m RNA表达降低,而HCN1总蛋白不变、胞膜蛋白表达下降、胞浆蛋白表达上升。并且HIP CA1、CA3区神经元中HCN1表达不变,HIP中DG区HCN1表达和CA1、CA3、DG区HCN2表达均降低。(3)PFC中nr2b基因过表达不会对大鼠焦虑样行为产生影响,但PFC中HCN1、HCN2、TRIP8b、AP-2α总蛋白及m RNA表达均上升。并且PFC神经元中HCN1、HCN2表达均上升(4)HIP中nr2b基因过表达会导致大鼠焦虑水平降低,并且HIP中HCN1、HCN2、TRIP8b、AP-2α总蛋白及m RNA表达均上升。并且HIP CA1区神经元中HCN1、HCN2表达均不变,HIP中CA3、DG区HCN1、HCN2表达均升高。结论:(1)PFC中nr2b敲低可能通过抑制PFC神经元中HCN通道的表达导致大鼠产生焦虑样行为,其机制可能与抑制HCN通道辅助亚基TRIP8b、AP-2α表达相关。(2)HIP中nr2b敲低可能通过抑制HIP CA1、CA3、DG区神经元中HCN通道的表达导致大鼠产生焦虑样行为,其机制可能与抑制HCN通道辅助亚基TRIP8b、AP-2α表达相关。(3)HIP中nr2b过表达可能通过促进HIP CA3、DG区神经元中HCN通道的表达导致大鼠焦虑水平降低,其机制可能与促进HCN通道辅助亚基TRIP8b、AP-2α表达相关。

关键词：焦虑症 nr2b HCN通道 TRIP8b AP-2α

洛伐他汀调节NMDA受体功能减缓NMDA兴奋性毒性损害

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南京医科大学学报（自然科学版） 2023年第4期43卷 468-474页

作者：李蓉刘露朱夕陈马涛江南大学附属中心医院药剂科江苏无锡214002 江南大学附属中心医院神经内科江苏无锡214002

目的:检测洛伐他汀(lovastatin,LOV)对N⁃甲基⁃D⁃天门冬氨酸(N⁃methyl⁃D⁃aspartate,NMDA)诱导的兴奋性毒性的神经保护作用并探讨LOV调节NMDA受体功能在神经保护中的潜在机制。方法:培养的大鼠原代神经元细胞分未处理组、LOV组、NMDA组、L... 详细信息

目的:检测洛伐他汀(lovastatin,LOV)对N⁃甲基⁃D⁃天门冬氨酸(N⁃methyl⁃D⁃aspartate,NMDA)诱导的兴奋性毒性的神经保护作用并探讨LOV调节NMDA受体功能在神经保护中的潜在机制。方法:培养的大鼠原代神经元细胞分未处理组、LOV组、NMDA组、LOV+NMDA组、谷氨酸(glutamate,Glu)组及Glu+APV(一种特异性NMDA受体拮抗剂)组。免疫荧光染色检测神经元形态,TUNEL分析检测神经元凋亡,免疫印迹测定蛋白水平,生物素化法检测细胞表面受体。结果:①与NMDA组或Glu组少数幸存微管相关蛋白(microtubule⁃associated protein 2,MAP⁃2)阳性神经元相比,LOV+NMDA组和Glu+APV组MAP⁃2阳性神经元的数量明显增多,神经元树突的数目和长度均明显增加(Pnr2b)表达显著减少(Pnr2b蛋白表达(Pnr2b丢失(Pnr2b丢失(Pnr2b在酪氨酸(tyrosine,Tyr)1472位点的磷酸化下降(P2位点的磷酸化(Pnr2b的细胞内吞和/或胞内降解,进而调节nr2b表面分布有关。

关键词：洛伐他汀 NMDA受体 nr2b 兴奋性毒性神经保护

天麻素通过nr2b/CaMKⅡ/CREb通路调控甲基苯丙胺诱导的神经细胞焦亡

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天麻素通过NR2B/CaMKⅡ/CREB通路调控甲基苯丙胺诱导的神经细胞焦...

作者：田琰昆明医科大学

学位级别：硕士

【目的】研究N-甲基-D-天冬氨酸受体2b亚基/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ/环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(N-methyl-D-aspartic acid receptor 2b/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ/c AMP response element binding protein,nr2b/CaMKⅡ/CREb)信号转导通路在甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)诱导神经细胞焦亡中的作用及其机制;探讨天麻素(Gastrodin)对nr2b/CaMKⅡ/CREb信号转导通路及对甲基苯丙胺诱导细胞焦亡的干预效果,旨在为寻找甲基苯丙胺神经毒性的治疗药物和靶点提供科学依据。【方法】以海马神经元HT-22细胞为研究对象。1.建立METH诱导HT-22细胞焦亡的细胞模型。(1)使用不同浓度的METH(0、0.25、0.5、1、2和4 m M)处理HT-22细胞24 h后,采用CCK-8检测各组细胞的存活率,Western blot技术检测各组细胞中焦亡标志蛋白GSDME和cleaved-GSDME-NT蛋白的表达水平。综合细胞存活率和Western blot结果分析,确定METH诱导HT-22细胞焦亡的最佳浓度。(2)选择最佳METH浓度分别处理HT-22细胞0、3、6、12、24、48 h后,采用CCK-8检测各组细胞的存活率,Western blot技术检测各组细胞中焦亡标志蛋白GSDME和cleaved-GSDME-NT蛋白的表达水平。综合细胞存活率和Western blot结果分析,确定METH诱导HT-22细胞焦亡的最佳时间。(3)使用METH最佳浓度、最佳时间处理HT-22细胞后,收集细胞,扫描电镜观察细胞的形态变化。2.天麻素前干预对METH诱导HT-22细胞焦亡的影响。使用不同浓度的天麻素(1 n M、10 n M、100 n M)提前2 h干预HT-22细胞。(1)实验分组:Control组、Gastrodin(100 n M)组、METH组、Gastrodin(1n M)+METH组、Gastrodin(10 n M)+METH组和Gastrodin(100 n M)+METH组。(2)采用CCK-8检测各组细胞存活率,Western blot技术检测各组细胞中cleaved-GSDME-NT蛋白的表达水平。根据细胞存活率和Western blot结果分析,确定天麻素干预HT-22细胞焦亡的最佳浓度。(3)免疫荧光技术检测各组细胞中GSDME蛋白的表达。(4)扫描电镜观察HT-22细胞的形态变化。3.明确nr2b、CaMKⅡ和CREb蛋白参与天麻素调控METH诱导HT-22细胞焦亡。(1)实验分组:Control组、Gastrodin组、METH组和Gastrodin+METH组。(2)Western blot技术检测各组细胞中nr2b、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREb、p-CREb和Caspase-3等蛋白的表达水平。4.阐明nr2b/CaMKⅡ/CREb信号通路在METH诱导HT-22细胞焦亡中的作用。在METH作用前2 h加入1μM nr2b激动剂NMDA进行前干预。(1)实验分组:Control组、NMDA组、METH组和NMDA+METH组。(2)CCK-8检测各组细胞存活率。(3)免疫荧光技术检测各组细胞中GSDME蛋白的表达。(4)Western blot技术检测各组细胞中nr2b、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREb、p-CREb和Caspase-3等蛋白的表达水平。5.探讨nr2b/CaMKⅡ/CREb信号通路在天麻素调控HT-22细胞焦亡中的作用。天麻素作用2 h后,再加入1μM nr2b特异性抑制剂Ro25-6981进行干预。(1)实验分组:Control组、Gastrodin组、Ro25-6981组和Gastrodin+Ro25-6981组。(2)CCK-8检测各组细胞存活率。(3)免疫荧光技术检测各组细胞中GSDME蛋白的表达。(4)Western blot技术检测各组细胞中nr2b、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREb、p-CREb和Caspase-3等蛋白的表达水平。【结果】1.METH可诱导HT-22细胞发生焦亡。CCK-8实验结果提示:与Control组相比,METH组HT-22细胞的存活率明显降低。Western blot结果提示:与Control组相比,METH组GSDME、cleavedGSDME-NT蛋白的表达水平显著升高。扫描电镜结果提示:给予METH后,HT-22细胞膜上有较多孔洞形成。2.天麻素可减轻METH诱导的HT-22细胞焦亡。实验结果提示:与Control组相比,METH组HT-22细胞的存活率明显降低;与METH组相比,Gastrodin+METH组HT-22细胞的存活率明显升高。Western

关键词：甲基苯丙胺天麻素细胞焦亡 HT-22细胞 nr2b CaMKⅡ CREb