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吗啡耐受大鼠脊髓NMDA受体nr2a亚基的表达

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中华行为医学与脑科学杂志 2009年第1期18卷 31-33页

作者：刘金变江伟上海交通大学附属第六人民医院麻醉科上海200233

目的研究N-甲基-M-天冬氨酸受体（NMDA）nr2a亚基在吗啡耐受大鼠脊髓的分布和表达变化。方法12只雄性SD大鼠随机分成对照组（C组，n=6），C组和吗啡耐受组（M组，n=6），C组：鞘内注射生理盐水10μl；M组：鞘内注射吗啡10μg。每日给药... 详细信息

目的研究N-甲基-M-天冬氨酸受体（NMDA）nr2a亚基在吗啡耐受大鼠脊髓的分布和表达变化。方法12只雄性SD大鼠随机分成对照组（C组，n=6），C组和吗啡耐受组（M组，n=6），C组：鞘内注射生理盐水10μl；M组：鞘内注射吗啡10μg。每日给药2次，连续7d。给药前和给药后30min通过测定甩尾潜伏期（TFL）观察大鼠热痛阈的变化。最后一次给药后次日处死动物，取L4～5脊髓组织，采用免疫荧光方法检测nr2a在各组大鼠脊髓的表达。结果随着用药天数增加，M组TFL逐渐下降，到第7天M组与C组比较差异无显著性[（3．25±0．93）s，（2．66±0．27）s，P〉0．05]，成功建立吗啡耐受模型。nr2a在脊髓的分布贯穿全层。M组脊髓背角浅层nr2a表达（OD值：9617±1233）较C组（OD值：2．66±0．93）升高（t=3．133，P〈0．05）。结论鞘内重复注射吗啡后大鼠脊髓背角NMDA受体nr2a亚基表达上调，可能是吗啡耐受形成机制之一。

关键词：吗啡耐受 nr2a亚基脊髓

铅暴露AD模型大鼠脑不同区域NMDA受体亚基（nr1、nr2a、nr2B）表达的研究

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铅暴露AD模型大鼠脑不同区域NMDA受体亚基（NR1、NR2A、NR2B）表...

作者：张奇中国医科大学

学位级别：硕士

铅暴露AD模型大鼠脑不同区域NMDA受体亚基（nr1、nr2a、nr2B）表达的研究前言 N-甲基-D-天冬氨酸（N-methy-D-aspartate，NMDA）受体是离子型谷氨酸（Glutamatic acid）受体的一个亚型，通过对其药理、生理、病理等方... 详细信息

铅暴露AD模型大鼠脑不同区域NMDA受体亚基（nr1、nr2a、nr2B）表达的研究前言 N-甲基-D-天冬氨酸（N-methy-D-aspartate，NMDA）受体是离子型谷氨酸（Glutamatic acid）受体的一个亚型，通过对其药理、生理、病理等方面的研究已经证实，NMDA受体在生物发育过程中有着重要的生理作用，可调节神经元的活性、树突、轴突结构的发育及突触可塑性等，在神经元回路的形成及学习和记忆的突触机制中，NMDA受体亦起着关键作用。先前的研究表明，谷氨酸诱导的神经毒性可能干扰许多神经障碍性疾病包括阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease，AD），亨廷顿氏病（Huntington’s disease），肌萎缩性侧索硬化和癫痫中正常的谷氨酸传递和谷氨酸受体激活。也有报道表明谷氨酸受体能与淀粉样前蛋白或β-淀粉样蛋白相互作用，它们能对神经元产生有益或有害的作用。这些结果表明NMDA受体在阿尔茨海默症（AD）的神经生物学中发挥重要的作用。 AD动物模型的建立是研究AD的基础。回顾对AD的研究，国内外众多的实验室，依据AD的临床特点和病理特征，分别从不同角度研制了多种动物模型，然而，包括转基因动物在内的AD动物模型，均不能完全模拟、复制出AD的主要病理、生化、神经递质及行为学等方面特征性变化，严重制约着关于AD发病机制及防止作用的深入研究。因此，本研究采用了铅暴露大鼠建立AD大鼠模型，研究NMDA受体在AD大鼠学习记忆障碍中的变化，探讨AD可能的发病机制。方法 1、动物及模型制备实验在40只一月龄Sprague-Dawley（SD）中进行，将鼠雌雄不拘，随机分成5组，其中对照组8只，喂蒸馏水。其余4组各8只为铅暴露组，分饲0.1％、0.2％、0.5％、1.0％用蒸馏水配制的醋酸铅。3周后娩出子鼠，子鼠21天起断乳，喂以母鼠相同的饮水并单独饲养。 2、被动回避反应（passive avoidance response，PAR）训练。 3、采用Western blot技术，测定nr1、nr2a和nr2B亚基蛋白在AD模型大鼠脑中额叶皮质、新小脑、海马及纹状体中的表达情况。 4、采用RT-PCR技术，测定nr1、nr2a和nr2B亚基mRNA在AD模型大鼠脑中额叶皮质、新小脑、海马及纹状体中的表达情况。实验结果 1、AD模型大鼠中nr1、nr2a和nr2B亚基的蛋白水平在各个脑区均有不同程度的下调。 2、AD模型大鼠海马区nr1亚基蛋白表达明显减弱，额叶皮质和纹状体次之新小脑区无明显减弱。 3、nr2a亚基蛋白水平在AD模型大鼠额叶皮质、新小脑区、海马及纹状体中均有不同程度的下调，其中海马区的下调趋势最为明显，额叶皮质和纹状体次之，新小脑区最弱。 4、nr2B亚基蛋白水平在AD模型大鼠四个脑区中的表达也均有不同程度的下调，其中海马区、额叶皮质及纹状体的下调趋势均很明显，新小脑区无明显下调趋势。 5、正常对照组大鼠nr1、nr2a亚基m RNA表达新小脑较强，其余各区无差异，nr2B亚基m RNA额叶皮质及新小脑表达较强。 6、AD模型大鼠组三种亚基的m RNA表达均有不同程度的下调。AD模型大鼠中各区nr1亚基m RNA表达均有所降低，其下调趋势趋于一致;nr2a亚基m RNA在AD模型大鼠中额叶皮质、新小脑区、海马及纹状体的表达下调趋势均很明显;nr2B亚基mRNA在额叶皮质、新小脑区的表达趋势下降最显著，纹状体次之，海马最次之。结论 NMDA受体亚基nr1，nr2a和nr2B的蛋白水平和m RNA水平在AD模型大鼠额叶皮质、海马、新小脑及纹状体均有不同程度的下调。

关键词： AD（Alzheimer’s disease，阿尔茨海默症） nr1亚基 nr2a亚基 nr2B亚基

铅暴露大鼠部分脑区的NMDA受体亚基（nr1、nr2a）表达的研究

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铅暴露大鼠部分脑区的NMDA受体亚基（NR1、NR2A）表达的研究

作者：朱庆阳吉林大学

学位级别：硕士

谷氨酸(L-glutamic,Glu)是中枢神经系统中介导快速兴奋性突触反应的重要神经递质。N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体是离子型谷氨酸受体的一个亚型,具有许多不同变构调控点并对钙离子高度通透的配体门控离子通道,当NMDA受体激活时,钙离子... 详细信息

谷氨酸(L-glutamic,Glu)是中枢神经系统中介导快速兴奋性突触反应的重要神经递质。N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体是离子型谷氨酸受体的一个亚型,具有许多不同变构调控点并对钙离子高度通透的配体门控离子通道,当NMDA受体激活时,钙离子通透性增高,钙离子进入细胞,细胞膜去极化、神经元兴奋,对学习、记忆产生一定影响。目的:本实验观察了铅暴露对大鼠不同脑区中NMDAR1(nr1)及NMDAR2A(nr2a)亚基蛋白和mRNA水平表达情况的影响,从蛋白质受体及基因水平研究铅在中枢神经系统的毒性作用,探讨机体内铅水平含量增高对学习、记忆功能的影响机制。方法:本实验取30天龄大鼠经饮水染铅(对照组饮蒸馏水,实验组饮醋酸铅1.0mmol/L、2.4mmol/L、3.6mmol/L、4.8mmol/L、7.2mmol/L、9.6mmol/L、14.4mmol/L、19.6mmol/L),3周后手术取各部位脑组织,应用免疫印迹法(Western Blot)和逆转录聚合酶链式反应(Rt-PCR)以及免疫组化技术,进行nr1、nr2a受体及其mRNA的定量分析。结果:实验数据显示铅暴露大鼠中nr1及nr2a亚基的蛋白水平和mRNA水平在各个脑区均有不同程度的下调,存在着一定的量效关系,NMDA受体亚基nr1和nr2a的表达在mRNA水平就已经发生了改变。结论:铅暴露使大鼠不同脑区nr1及nr2a亚基的蛋白水平和mRNA水平呈现不同程度的下降,以海马最为明显。因此铅对于学习记忆的影响机制可能是通过作用于海马内的NMDA受体及其mRNA表达来实现的。

关键词： NMDA受体 nr1亚基 nr2a亚基

丙泊酚对大鼠的空间学习记忆和海马NMDA受体nr2a亚基表达的影响

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临床军医杂志 2010年第3期38卷 330-333,F0004页

作者：苗青缪雪蓉陆智杰俞卫锋解放军第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科上海200438

目的观察丙泊酚单次麻醉对成年大鼠空间学习记忆能力的影响以及海马NMDA受体nr2a亚基的变化。方法 30只SD大鼠随机分成丙泊酚组(n=15)和对照组(n=15)。给予丙泊酚50mg/kg腹腔注射作为诱导剂量,待翻正反应消失后在腹腔追加50mg/kg丙泊酚... 详细信息

目的观察丙泊酚单次麻醉对成年大鼠空间学习记忆能力的影响以及海马NMDA受体nr2a亚基的变化。方法 30只SD大鼠随机分成丙泊酚组(n=15)和对照组(n=15)。给予丙泊酚50mg/kg腹腔注射作为诱导剂量,待翻正反应消失后在腹腔追加50mg/kg丙泊酚加深麻醉。对照组不予任何处理。待翻正反应恢复12h后应用Morris水迷宫评价丙泊酚对于大鼠空间学习记忆的影响。同时通过免疫荧光技术检测海马NMDA受体nr2a亚基的表达变化。结果丙泊酚组平均学习潜伏期较对照组显著缩短(Pnr2a亚基的表达增加。结论丙泊酚单次麻醉后成年大鼠的空间学习记忆能力提高,这种学习记忆能力的提高可能和NMDA受体nr2a亚基的表达上调相关。

关键词：丙泊酚 Morris水迷宫空间学习和记忆 NMDA受体 nr2a亚基

妊娠末期吗啡暴露的子代鼠nr2a亚基与成瘾性的关系

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赣南医学院学报 2021年第4期41卷 344-348页

作者：杨柳张超陈永权姚卫东鲁美静张恺辰金孝岠皖南医学院弋矶山医院麻醉科皖南医学院弋矶山医院影像科安徽芜湖241000

目的:探讨妊娠末期吗啡暴露的子代鼠在不同成瘾性时脑伏隔核N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体nr2a亚基水平。方法:孕SD大鼠36只随机分为吗啡暴露组(M组)和对照组(N组),M组孕鼠第一天给予吗啡用量为2 mg·kg^(-1),此后每天增加1 mg·kg^(-1)... 详细信息

目的:探讨妊娠末期吗啡暴露的子代鼠在不同成瘾性时脑伏隔核N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体nr2a亚基水平。方法:孕SD大鼠36只随机分为吗啡暴露组(M组)和对照组(N组),M组孕鼠第一天给予吗啡用量为2 mg·kg^(-1),此后每天增加1 mg·kg^(-1)至6 mg·kg^(-1)维持至分娩,N组孕鼠以同样方式注射等量生理盐水。取两组子代鼠50只,正常喂养至4周龄。各组子代鼠于颈背部持续皮下注射吗啡7 d,每天1次,每次3 mg·kg^(-1)进行条件位置偏爱(CPP)训练,CPP训练结束24 h后进行成瘾检测。根据CPP差值(CPP测试值-CPP基数值)将吗啡暴露组子代鼠分为高成瘾组(n=10)、中成瘾组(n=30)、低成瘾组(n=10)。采用Western blotting方法检测高、低成瘾组和对照组子代鼠伏隔核区nr2a亚基的表达。结果:(1)预测试时,各组CPP基数值的差异无统计学意义(P>0.05);高成瘾组CPP差值(552.60±132.60)s高于低成瘾组(223.40±55.14)s和对照组(42.93±31.78)s,差异均有统计学意义(P2)Western blotting结果示高成瘾组的nr2a亚基表达量(0.71±0.05)高于低成瘾组(0.54±0.04)和对照组(0.22±0.04),差异有统计学意义(Pnr2a亚基水平上调相关。

关键词：妊娠末期吗啡条件位置偏爱 N-甲基-D-天冬氨酸受体 nr2a亚基成瘾性

铅暴露大鼠脑不同区域NMDA受体亚基(nr1、nr2a、nr2B)表达的研究

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沈阳医学院学报 2007年第3期9卷 132-134页

作者：朱启文张奇沈阳医学院辽宁沈阳110034 沈阳市铁西区疾控中心理化实验室

目的:观察铅暴露大鼠中不同脑区NMDAR1(nr1)、NMDAR2A(nr2a)和NMDAR2B(nr2B)亚基蛋白和mRNA水平的表达情况。方法:采用Western Blot及RT-PCR技术,测定nr1、nr2a和nr2B亚基蛋白和mRNA在铅暴露大鼠脑中额叶皮质、新小脑、海马及纹状体中... 详细信息

目的:观察铅暴露大鼠中不同脑区NMDAR1(nr1)、NMDAR2A(nr2a)和NMDAR2B(nr2B)亚基蛋白和mRNA水平的表达情况。方法:采用Western Blot及RT-PCR技术,测定nr1、nr2a和nr2B亚基蛋白和mRNA在铅暴露大鼠脑中额叶皮质、新小脑、海马及纹状体中的表达情况。结果:铅暴露大鼠中nr1、nr2a和nr2B亚基的蛋白水平和mRNA表达在各个脑区均有不同程度的下调。结论:在铅暴露大鼠的额叶皮质、海马、新小脑和纹状体中,NMDA受体亚基nr1,nr2a和nr2B的表达在mRNA水平就已经发生了改变。

关键词： AD(Alzheimer,sdisease,阿尔茨海默症) nr1亚基 nr2a亚基 nr2B亚基

NMDA受体nr2a、nr2B亚基在戊四氮诱导慢性癫痫大鼠中的作用

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温州医科大学学报 2018年第12期48卷 866-870页

作者：徐惠琴杜延茹沈晶赞林嘉禾丁思琦郑荣远王新施王莉叶朦倩温州医科大学附属第一医院神经内科浙江温州325015

目的:探讨NMDA受体nr2a、nr2B亚基在戊四氮(PTZ)诱导慢性癫痫大鼠惊厥发作中的作用及机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为:Control组、PTZ组、PTZ+MK-801组、PTZ+NVP组、PTZ+Ifenprodil组;连续腹腔注射35 mg/kg PTZ 28 d,注射PTZ 0.5 h前... 详细信息

目的:探讨NMDA受体nr2a、nr2B亚基在戊四氮(PTZ)诱导慢性癫痫大鼠惊厥发作中的作用及机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为:Control组、PTZ组、PTZ+MK-801组、PTZ+NVP组、PTZ+Ifenprodil组;连续腹腔注射35 mg/kg PTZ 28 d,注射PTZ 0.5 h前,各组分别注射等量0.9%氯化钠溶液、0.1 mg/(kg·d)MK-801、5.0 mg/(kg·d)NVP、10 mg/(kg·d)Ifenprodil。按照Racine分级标准每天记录行为学评分。第29天处死动物,尼氏染色观察大鼠海马神经元丢失情况,Western blot法测定大鼠海马nr2a、nr2B亚基水平。结果:与PTZ组比,MK-801组和NVP组戊四氮诱导慢性癫痫大鼠的惊厥发作减轻,而Ifenprodil组无减轻。与Control组比,PTZ组海马神经元大量丢失;与PTZ组比,MK-801、NVP和Ifenprodil均能减少海马神经元丢失;其中,MK-801、NVP减轻神经元损伤效果显著。与对照组比,各组惊厥发作后海马nr2a、nr2B亚基水平均下降,PTZ组最明显;nr2a亚基水平,PTZ+NVP组高于PTZ组;nr2B亚基水平,各药物干预组均高于PTZ组。结论:非选择性抑制NMDA受体和选择性抑制nr2a亚基能够减轻慢性癫痫大鼠发作强度和海马神经元损伤,而选择性抑制nr2B亚基仅能减轻海马神经元损伤,这提示惊厥发作可能与nr2a亚基有关,而神经元损伤可能与nr2a、nr2B亚基均有关。

关键词：癫痫戊四氮 NMDA受体 nr2a亚基 nr2B亚基大鼠

美金刚对小鼠局灶性脑缺血再灌注后nr2a表达的影响

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美金刚对小鼠局灶性脑缺血再灌注后NR2A表达的影响

作者：刘月娥福建医科大学

学位级别：硕士

目的：通过观察局灶性脑缺血再灌注后nr2a表达的变化，探讨美金刚对局灶性脑缺血再灌注神经保护的机制。方法：将雄性成年昆明小鼠96只，随机分为假手术组、NS对照组、美金刚干预组，线栓法构建大脑中动脉梗塞模型（MCAO），缺血2... 详细信息

目的：通过观察局灶性脑缺血再灌注后nr2a表达的变化，探讨美金刚对局灶性脑缺血再灌注神经保护的机制。方法：将雄性成年昆明小鼠96只，随机分为假手术组、NS对照组、美金刚干预组，线栓法构建大脑中动脉梗塞模型（MCAO），缺血2小时，再灌注22h。采用TTC法计算脑梗死体积占同侧半球的百分比;干湿重法测定脑组织含水量;硝酸还原酶法测定大脑半球组织匀浆NO含量（umol/g）;组织切片HE染色和尼氏染色作形态学描述;尼氏染色计数海马CA1区结构完整的神经元;免疫组化法检测海马CA1区神经元胞膜上nr2a的表达情况。结果：假手术组TTC染色未见梗死灶，对照组和美金刚组梗死体积占同侧半球百分比分别为34.23%±3.76%和28.38%±2.25%，两者差异有统计学意义（P﹤0.05）。假手术组脑组织含水量为76.12%±1.44%，对照组和美金刚组脑组织含水量为分别为82.83％±0.72％和80.20％±0.77％。假手术组术侧大脑半球NO含量为1.281±0.049umol/g，对照组和美金刚组术侧大脑半球NO含量分别为3.126±0.381umol/g和2.087±0.384umol/g,三组相比和组间比较均有显著差异（P﹤0.05）。HE染色和尼氏染色显示，与正常组织相比，梗塞侧脑组织结构疏松，神经元数量减少。尼氏染色显示,三组海马CA1区结构完整的神经元密度（个/高倍镜）分别为33.0±3.8、18.6±2.3和24.7±2.4，三组相比和组间比较差异均有显著性（P﹤0.05）。在正常脑组织中，nr2a主要表达于神经元胞膜和胞浆，而在对照组及美金刚组术侧，可见较多胞核阳性染色。术侧海马CA1区神经元胞膜nr2a染色IOD值，假手术组为6773.89±347.18，对照组和美金刚组分别为3879.24±259.13和4482.22±310.55，三组相比和组间比较差异均有显著性（P﹤0.05）。结论：局灶性脑缺血后主要定位于神经元突触上的nr2a表达下调，削弱nr2a介导的防御性反应，加重细胞损伤;美金刚可能通过抑制突触外NMDAR及胞内钙蛋白酶的活化，增加细胞膜nr2a水平，促进细胞存活，显示出神经保护作用。

关键词：脑缺血再灌注 nr2a亚基美金刚神经保护

Ifenprodil对单眼剥夺小鼠初级视皮层V1B区NMDA受体亚基表达的影响

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Ifenprodil对单眼剥夺小鼠初级视皮层V1B区NMDA受体亚基表达的影响

作者：宋德胜天津医科大学

学位级别：硕士

目的从蛋白组学和分子生物学方面检测NMDA受体nr2B亚基阻断剂Ifenprodil对关键期单眼剥夺小鼠初级视皮层V1B区nr2a和nr2B亚基相对表达量的影响,为弱视机制研究及药物靶向治疗提供实验基础。方法选取生后24天健康C57BL/6小鼠,雌雄不限。... 详细信息

目的从蛋白组学和分子生物学方面检测NMDA受体nr2B亚基阻断剂Ifenprodil对关键期单眼剥夺小鼠初级视皮层V1B区nr2a和nr2B亚基相对表达量的影响,为弱视机制研究及药物靶向治疗提供实验基础。方法选取生后24天健康C57BL/6小鼠,雌雄不限。采用随机数字表法将小鼠随机分为正常0天组(N0),正常对照3天组(N3d),正常对照6天组(N6d),正常对照3天+Ifenprodil组(N3d+Ifenprodil),正常对照6天+Ifenprodil(N6d+Ifenprodil),单眼剥夺3天组(MD3d),单眼剥夺6天组(MD6d),单眼剥夺3天+Ifenprodil组(MD3d+Ifenprodil),单眼剥夺6天+Ifenprodil组(MD6d+Ifenprodil),每组5只,MD3d,MD6d组分别于生后24天缝合右眼,制备单眼形觉剥夺模型,与N组在同样环境下饲养,分别继续饲养3天、6天。3天组腹腔注药小鼠于第1,1.5天进行注药,6天组则于1,3,5天给药,给药剂量为10mg/kg。采用Western blot和实时荧光定量PCR检测各组小鼠视皮层nr2a和nr2B蛋白和m RNA的相对表达情况。结果Western blot结果显示:1.比较各组小鼠左右侧视皮层V1B区nr2a,nr2B蛋白相对表达量N0,N3d,N3d+Ifenprodil,N6d,N6d+Ifenprodil各组左右侧视皮层V1B区nr2a蛋白相对表达量差异均无统计学意义(各组P>0.05);MD3d,MD3d+Ifenprodil,MD6d,MD6d+Ifenprodil各组左右侧视皮层V1B区nr2a蛋白相对表达量有统计学差异(两组均为Pnr2B蛋白相对表达量差异无统计学意义(各组P>0.05);MD3d,MD6d两组左右侧视皮层V1B区nr2B蛋白相对表达量有统计学差异(两组均为Pnr2a,nr2B蛋白相对表达量变化N0,N3d,N6d三组小鼠左侧视皮层V1B区nr2a蛋白相对表达量依次升高,差异有统计学意义(Pnr2a蛋白相对表达量依次升高,差异有统计学意义(Pnr2B蛋白相对表达量依次降低,差异有统计学意义(Pnr2B蛋白相对表达量依次降低,差异有统计学意义(Pnr2a,nr2B蛋白相对表达量的影响与N3d组相比,MD3d组小鼠左侧视皮层V1B区nr2a蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(Pnr2B蛋白相对表达量升高,差异有统计学意义(Pnr2a蛋白相对表达量升高,差异有统计学意义(Pnr2B蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(Pnr2a,nr2B蛋白相对表达量的影响N3d+Ifenprodil组与N3d组相比,N6d+Ifenprodil组与N6d组相比小鼠左侧视皮层V1B区nr2a蛋白相对表达量差异无统计学意义(两组均为P>0.05).N3d+Ifenprodil组与N3d组相比,N6d+Ifenprodil组与N6d组相比小鼠右侧视皮层V1B区nr2a蛋白相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。N3d+Ifenprodil组小鼠左侧视皮层V1B区nr2B蛋白相对表达量较N3d组小鼠左侧视皮层V1B区nr2B蛋白相对表达量低,差异有统计学意义(Pnr2B蛋白相对表达量较N3d组小鼠右侧视皮层V1B区nr2B蛋白相对表达量低,差异有统计学意义(Pnr2a,nr2B蛋白相对表达量的

关键词： nr2a亚基 nr2B亚基初级视皮层艾芬地尔单眼剥夺