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棉花学报 2007年第3期19卷 163-167页

作者：上官小霞李燕娥梁运生吴霞杜春芳张林水山西省农业科学院棉花研究所山西运城044000

利用农杆菌介导转化法,将含有35S启动子驱动nptii基因和GUS基因以及棉纤维特异表达启动子E6驱动目的基因FB的植物表达载体转入到常规棉花R15中。重点分析了GUS基因和nptii基因在愈伤诱导阶段、T0代及T1代转基因棉花中的表达情况。综合... 详细信息

利用农杆菌介导转化法,将含有35S启动子驱动nptii基因和GUS基因以及棉纤维特异表达启动子E6驱动目的基因FB的植物表达载体转入到常规棉花R15中。重点分析了GUS基因和nptii基因在愈伤诱导阶段、T0代及T1代转基因棉花中的表达情况。综合两个基因的表达来进行转基因棉花的阳性鉴定,可以为转基因棉花后代的纯合选育提供双重保障。7个转基因株系选育到T3代共获得株行51个,卡那霉素检测多数株行阳性率在90%以上,其中21个株行阳性率达100%。

关键词： GUS基因 nptii基因相关性转基因棉花基因表达

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GUS基因和nptii基因在转基因花生后代的遗传研究

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花生学报 1999年第S1期29卷 241-245页

作者：方小平许泽永张宗义晏立英陈坤荣罗莉霞陈金香 R.G.Birch R.G.Dietzgen 中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物遗传改良重点开放实验室武汉430062 昆士兰大学植物系昆士兰农业生物技术中心布里斯班4072

对β－葡糖苷酸酶（ＧＵＳ）基因在转基因花生Ｔ１－Ｔ３代植株中的活性测定和ＮＰＴＩＩ基因在Ｔ３代植株中的活性和ＰＣＲ检测表明：Ｔ１代的ＧＵＳ基因为１ ∶１、３∶１等分离，Ｔ２和Ｔ３代ＧＵＳ基因符合３：１单基... 详细信息

对β－葡糖苷酸酶（ＧＵＳ）基因在转基因花生Ｔ１－Ｔ３代植株中的活性测定和ＮＰＴＩＩ基因在Ｔ３代植株中的活性和ＰＣＲ检测表明：Ｔ１代的ＧＵＳ基因为１ ∶１、３∶１等分离，Ｔ２和Ｔ３代ＧＵＳ基因符合３：１单基因显性遗传规律的植株数增加，１：１分离单株比例逐渐减少。从Ｔ３代中就可选择到ＧＵＳ基因纯合的单株，得到了４株遗传性稳定的单株，说明ＧＵＳ基因在转基因花生植株后代的遗传应属于单基因显性遗传规律。实验证明，位于同一质粒上的ＧＵＳ和新霉素磷酸转移酶（ＮＰＴＩＩ）基因，在转基因花生植株中表现为连锁遗传。

关键词：转基因花生 GUS基因 nptii基因外源基因遗传

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纤维素酶基因cel7A的克隆和番茄遗传转化体系建立

纤维素酶基因cel7A的克隆和番茄遗传转化体系建立

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作者：梁超山西大学

学位级别：硕士

在人类生存的环境中有大量纤维素,它们很难被消化,大部分被浪费掉。二十世纪中期,纤维素酶被引入畜牧业,为人类的发展做出了一些贡献。截止到目前,人类对它的利用率仍然偏低,而传统的加工过程中酶制剂成活率往往不高。因此,有必要利用... 详细信息

在人类生存的环境中有大量纤维素,它们很难被消化,大部分被浪费掉。二十世纪中期,纤维素酶被引入畜牧业,为人类的发展做出了一些贡献。截止到目前,人类对它的利用率仍然偏低,而传统的加工过程中酶制剂成活率往往不高。因此,有必要利用基因工程技术手段提高纤维素酶的利用率。真菌中存在着大量的纤维素酶,亚洲香菇(Lentinula edodes),属于真菌的一种。本研究根据NCBI中香菇纤维素酶基因的mRNA序列设计引物,并设计HindⅢ和BamHⅠ两个酶切位点。以PDA液体培养基中培养得到香菇的为材料,用Trizol试剂提取香菇总RNA,通过RT-PCR方法获得香菇纤维素酶基因的cDNA片段。通过分子克隆技术将得到的目的片段克隆到pMD19-T载体上,酶切鉴定并进行基因测序。然后将该基因构建在改造的pCMABIA1302载体上,构建成植物表达载体pCMABIA1302-wjx,并用冻融法将该重组质粒导入根癌农杆菌菌株LBA4404中,构建成转化所用工程菌。以期利用农杆菌介导的遗传转化方法将克隆得到的纤维素酶基因转入玉米中并在玉米中进行表达,为进一步开展玉米转基因研究和生产高消化率的饲用玉米新品种创造了良好的条件。番茄(Lycopersicon esculentum Mill.),属于茄科(Solanaceae),番茄属(Lycopersicon)。不同的番茄品种再生体系存在着一定得的差异,本研究采用太原的两个优势品种特选28和太原823,以这两个品种的番茄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,对番茄的再生体系和农杆菌介导的番茄遗传转化体系进行了优化,建立了适合供试品种太原823和特选28的遗传转化体系。比较了在不同激素浓度以及不同激素浓度的配比的情况下对番茄无菌苗子叶和下胚轴不定芽分化所产生的影响,并对影响外植体转化效率的因素进行了探讨。植物表达载体质粒pBI121中携带的nptii基因不仅提供了转化所用的目的基因,同时又能作为植物的筛选标记,赋予植物对卡那霉素的抗性。在本试验中采用农杆菌介导转化法,将nptii基因导入番茄植株细胞,通过诱导培养和卡那霉素筛选,获得再生植株。结果表明:在农杆菌浸染前进行2天的预培养、农杆菌浸染浓度为OD=0.3、浸染6min的外植体在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA的培养基上外植体再生芽苗率最高。通过建立高效遗传转化体系,以期为利用转基因技术进行生物反应器的研究奠定良好的基础。综上所述,本研究分为两部分内容。一部分通过分子克隆技术成功克隆到了纤维素酶基因cel7A。另一部分通过农杆菌介导的方法转化太原市的两个番茄品种(太原823和特选28),获得了再生植株。这是首次将太原823和特选28首次通过农杆菌介导法转化并获得再生植株。转化的再生番茄植株有待于进一步进行分子检测,检测nptii基转入番茄植株的情况。

关键词：纤维素酶基因cel7A 番茄 nptii基因根癌农杆菌

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棉花叶绿体转化载体的构建以及转化体系的建立

棉花叶绿体转化载体的构建以及转化体系的建立

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作者：刘小云华中农业大学

学位级别：硕士

通过细胞核遗传工程的研究,对棉花产量提高和品质改进以及抗病虫害起到了积极作用,但细胞核遗传工程仍存在诸如基因失活、基因沉默、位置效应、花粉漂移及多基因转化困难等弊端,而叶绿体转化技术作为一种新兴的遗传转化技术有望克服核... 详细信息

通过细胞核遗传工程的研究,对棉花产量提高和品质改进以及抗病虫害起到了积极作用,但细胞核遗传工程仍存在诸如基因失活、基因沉默、位置效应、花粉漂移及多基因转化困难等弊端,而叶绿体转化技术作为一种新兴的遗传转化技术有望克服核基因转化带来的诸多不足,该技术的成功应用将会给棉花基因工程带来一次新的革命。为了解决棉花细胞核遗传工程所带来的诸多问题,我们开展了棉花叶绿体转基因的研究,构建棉花叶绿体转化载体;尝试建立棉花叶绿体转化的标准程序。根据已发表的棉花叶绿体基因组序列(NC07944)设计引物,用PCR方法扩增获得两段同源序列LHRR和RHRR,并通过酶切连接与质粒pBluesript SK连接构建出载体pBSKRR;同时用PCR方法扩增报告基因gfp及筛选标记nptⅡ基因,并在这两个基因两端分别加上来自于棉花叶绿体基因组的强启动子Prrn和PpsbA以及起稳定作用的3’UTR茎环结构Trps16和TpsbA,构建出含有Prrn—gfp—Trps16和PpsbA—nptⅡ—TpsbA表达盒的载体pGGPT和pGNPT;再将这两个基因表达盒与载体pBSKRR酶切连接构建出载体pBRGN,并初步应用于棉花和烟草的叶绿体转化,获得了具有卡那霉素抗性的烟草的绿色愈伤及幼苗,PCR检测出gfp基因和nptⅡ基因的条带,并在荧光显微镜下检测到gfp的表达。gfp在棉花胚性愈伤中也有少量表达,但表达情况很不理想,需要对转化受体以及再生条件进行进一步的摸索。尽管叶绿体转化在棉花中还存在着很多问题,但该实验结果证实了这一实验思路的可行性,为后期棉花叶绿体转化工作的顺利进行打下了基础。

关键词：棉花叶绿体转化表达载体 gfp基因 nptii基因烟草

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NPTⅡ基因在满江红鱼腥藻染色体DNAglnA位点的定点整合及对泌氨和细胞形态结构的影响

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首都师范大学学报（自然科学版） 1993年第4期14卷 27-33页

作者：吴晓强施定基刘祥林汪洪杰邱泽生张承谦印莉萍赵微平首都师范大学生物系中国科学院植物研究所

本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化... 详细信息

本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化学测氨法表明,培养后7～14d泌氨达到高峰,转化细胞泌氨比对照高40％。光镜观察表明,转化细胞藻丝变短,易断成单个细胞,异形胞频率降低;扫描电镜观察指出,转化细胞外壁有鳞片状鞘层,而对照较光滑。

关键词：满江红鱼腥藻 nptii基因 glnA 定点整合泌氨细胞形态结构

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