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NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及对膀胱癌细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2021年第5期43卷 432-437页

作者：朱西罗生军蒋立唐伟重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016

目的研究NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及沉默NPRL2对膀胱癌细胞系Biu87/RT-4凋亡的影响。方法收集本院泌尿外科2014年1月至2019年1月的131例膀胱癌患者癌组织标本,免疫组化检测膀胱癌组织中NPRL2表达情况,分析其与膀胱癌临床... 详细信息

目的研究NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及沉默NPRL2对膀胱癌细胞系Biu87/RT-4凋亡的影响。方法收集本院泌尿外科2014年1月至2019年1月的131例膀胱癌患者癌组织标本,免疫组化检测膀胱癌组织中NPRL2表达情况,分析其与膀胱癌临床病理特征的相关性;检测CP-H068、Biu87和RT-4细胞系中NPRL2的表达,CCK-8法检测沉默NPRL2后细胞的增殖情况,流式细胞术检测凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果NPRL2在膀胱癌组织中高表达,为53.44%,与膀胱癌临床分期、分级存在显著相关性(PNPRL2在膀胱癌细胞系Biu87/RT-4中的表达显著高于正常膀胱上皮细胞CP-H068(PNPRL2后Biu87/RT-4细胞增殖能力下降,凋亡率上升,凋亡相关蛋白JNK、Bax、caspase-9表达量增高,Bcl-2表达受抑制,差异均有统计学意义(PNPRL2表达与膀胱癌临床分期和分级相关,通过沉默膀胱癌细胞Biu87/RT-4中NPRL2的表达,可以有效抑制膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡。

关键词： NPRL2 膀胱癌 Biu87细胞 RT-4细胞凋亡

重组质粒pEGFP-N1-NPRL2对人胃癌细胞生物学特性的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1020-1024页

作者：胡在敏王川季文刘波蔡璨姜政重庆医科大学附属第一医院消化内科重庆400016

目的:探讨pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体对SGC-7901胃癌细胞体外增殖﹑细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:构建pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定。脂质体介导转染入SGC-7901胃癌细胞,应用荧光显微镜、RT-PCR、Weste... 详细信息

目的:探讨pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体对SGC-7901胃癌细胞体外增殖﹑细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:构建pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体,并进行酶切及测序鉴定。脂质体介导转染入SGC-7901胃癌细胞,应用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测NPRL2的基因及蛋白水平情况,CCK8法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化,Transwell实验检测NPRL2对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:成功构建了pEGFP-N1-NPRL2真核表达载体。重组质粒转染SGC-7901细胞后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和Westernblot法检测到NPRL2 mRNA及蛋白的表达,CCK8法检测发现NPRL2能够明显抑制肿瘤细胞增殖(PNPRL2使细胞停在G0～G1期(PNPRL2能抑制细胞凋亡(PNPRL2使细胞侵袭迁移能力均降低(PNPRL2可抑制肿瘤细胞的增殖、周期、侵袭及迁移,并促进凋亡。

关键词： NPRL2 SGC7901 转染增殖侵袭

NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及对膀胱癌细胞凋亡的影响

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NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及对膀胱癌细胞凋亡的影响

作者：朱西重庆医科大学

学位级别：硕士

膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率逐年上升。目前临床上治疗膀胱癌的首选方法为手术和辅助化疗,尽管化疗对癌细胞有直接的杀灭作用,但也会对正常细胞造成一定损伤且易复发。因此,揭示膀胱癌发生、发展的分子机制,寻找早期诊... 详细信息

膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率逐年上升。目前临床上治疗膀胱癌的首选方法为手术和辅助化疗,尽管化疗对癌细胞有直接的杀灭作用,但也会对正常细胞造成一定损伤且易复发。因此,揭示膀胱癌发生、发展的分子机制,寻找早期诊断和治疗的靶点极具意义。NPRL2最早是通过生物信息学的方法在肺癌中发现的一个抑癌候选基因,由11个外显子组成,编码一个380个氨基酸的蛋白。该基因在肾脏、脑、肝等正常组织中高表达,而在多种肿瘤如乳腺癌、肺癌和结直肠癌中的表达明显下调,但NPRL2在一些肿瘤细胞中却高表达,如He La细胞,Jurkat细胞和HT29细胞。本课题组一直致力于研究NPRL2在泌尿系肿瘤中的表达情况及其潜在的临床价值,前期结果显示NPRL2在前列腺癌中反常高表达,且与临床分期和Gleason评分呈正相关,此外还发现干扰NPRL2能影响PCa细胞增殖和凋亡,并影响多西他赛对前列腺癌细胞的毒性。目前NPRL2在膀胱癌中尚无研究报道,本研究旨在探讨NPRL2在膀胱癌中的表达情况及其对膀胱癌患者的临床病理特征和对膀胱癌细胞凋亡的影响。目的:研究NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及沉默NPRL2对膀胱癌细胞系Biu87/RT-4凋亡的影响。方法:一临床试验:1.收集重庆医科大学附属第一医院泌尿外科2014年1月至2019年1月的131例膀胱癌患者癌组织标本及其相关病历信息;2.免疫组化检测膀胱癌组织中NPRL2表达情况,并分析其与患者临床病理特征的关系;二体外实验:1.使用RT-PCR和Western Blot检测人正常膀胱上皮细胞株CP-H068和膀胱癌细胞株Biu87/RT-4细胞系中NPRL2的表达量;2.对膀胱癌细胞株Biu87/RT-4进行慢病毒NPRL2 si RNA转染,分别通过荧光法、q PCR及Western blot验证转染效率;3.CCK-8法对转染后的膀胱癌细胞株进行增殖能力检测;4.流式细胞术对转染后的Biu87/RT-4进行凋亡检测;5.运用免疫荧光法对NPRL2的蛋白表达进行检测;6.使用RT-PCR和Western Blot对转染后细胞的凋亡蛋白进行检测;二数据分析:采用SPSS 24.0统计软件,计数资料以x±s表示,两组间比较用t检验,多组间比较用单因素方差分析,组间多重比较用SNKq检验,PNPRL2在膀胱癌组织中高表达,为53.44%,与膀胱癌临床分期分级存在显著相关性;2.与正常的膀胱上皮细胞系CP-H068相比,NPRL2在膀胱癌细胞Biu87/RT-4中的表达量明显增高;3.干扰NPRL2表达后,人膀胱癌细胞Biu87/RT-4的体外增殖能力明显下降;4.干扰NPRL2表达后,可以有效促进人膀胱癌细胞Biu87/RT-4的凋亡;5.干扰NPRL2表达后,凋亡相关蛋白JNK、Bax、Caspase-9表达量增高,Bcl-2表达受抑制。结论:膀胱癌中NPRL2表达与膀胱癌临床分期和分级相关,通过沉默膀胱癌细胞Biu87/RT-4中NPRL2表达,可以有效抑制膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡。

关键词： NPRL2 膀胱癌 Biu87/RT-4 凋亡

CTP-NPRL2融合蛋白对肾癌原代细胞迁移侵袭能力的抑制及机制研究

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第三军医大学学报 2016年第24期38卷 2592-2599页

作者：史晓博叶茂曾洋陈明龙陈志雄熊晶吕不凡唐伟重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016

目的将原核表达的氮酶调节因子2(nitrogen permease regulator 2-like,NPRL2)融合蛋白通过胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)转入肾癌原代细胞内,观察其对肾癌原代细胞迁移侵袭的影响,并分析与肾癌上皮间质转化(epithel... 详细信息

目的将原核表达的氮酶调节因子2(nitrogen permease regulator 2-like,NPRL2)融合蛋白通过胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)转入肾癌原代细胞内,观察其对肾癌原代细胞迁移侵袭的影响,并分析与肾癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法胶原酶消化法培养肾癌原代细胞;构建原核表达质粒pET15b-CTP-NPRL2和pET15b-NPRL2,表达融合蛋白CTP-NPRL2和NPRL2,并通过Western blot鉴定目的蛋白的表达。将培养成功的原代细胞分为BLANK组、NPRL2组和CTP-NPRL2组。免疫荧光检测目的蛋白的细胞定位;Transwell迁移侵袭实验检测导入NPRL2蛋白后,对肾癌细胞迁移侵袭能力的影响;Real-time PCR检测Raptor、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤粘蛋白(Fibronectin)m RNA表达水平;Western blot检测Raptor、E-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平。结果成功培养出肾癌原代细胞并通过鉴定;测序结果及Western blot检测结果显示质粒构建成功并表达出目的蛋白;免疫荧光检测结果显示CTP-NPRL2融合蛋白可以穿过胞膜并定位于胞浆;迁移和侵袭实验显示CTP-NPRL2组肾癌细胞迁移侵袭能力明显下降(PNPRL2组Raptor、Vimentin与Fibronectin的m RNA、蛋白表达水平与NPRL2组和BLANK组相比明显降低(PNPRL2组与BLANK组相比明显升高(PNPRL2可能通过与Raptor相互作用影响mTORC1的活性,进而调节EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Fibronectin的表达量,影响肾癌细胞的迁移侵袭能力。

关键词： NPRL2 mTORC1 迁移侵袭上皮间质转化

NPRL2基因在果蝇胃肠道衰老模型中的功能研究

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Nprl2基因在果蝇胃肠道衰老模型中的功能研究

作者：席俊萌扬州大学

学位级别：硕士

衰老发生在所有的生物有机体中,伴随着组织的退化,产生各种各样与年龄相关的疾病。雷帕霉素复合物1（TORC1）作为一种调节营养状态和细胞代谢的复合物,抑制其活性可以延长生物体寿命,并能延缓与年龄相关疾病的发生。本研究利用TORC1的... 详细信息

衰老发生在所有的生物有机体中,伴随着组织的退化,产生各种各样与年龄相关的疾病。雷帕霉素复合物1（TORC1）作为一种调节营养状态和细胞代谢的复合物,抑制其活性可以延长生物体寿命,并能延缓与年龄相关疾病的发生。本研究利用TORC1的抑制基因NPRL2基因缺失果蝇（NPRL2蛋白是GATOR1复合物的组分之一）,研究TORC1对果蝇衰老过程中胃肠道（GI）消化功能的影响。发现与对照组果蝇相比,NPRL2突变果蝇的寿命显著降低。随着年龄的增长,NPRL2突变果蝇的crop（功能类似于哺乳动物的胃）,有明显的增大,并有食物堆积的现象。为了明确NPRL2在GI中的功能,本课题以雄果蝇为实验对象,研究NPRL2基因对crop中食物转运和肠道衰老的调节。主要结果如下:（1）通过免疫荧光对crop细胞轮廓进行染色,发现NPRL2突变果蝇crop的增大,是由食物堆积膨胀,膜的延展性变大所致。而给果蝇喂食亮蓝食物后发现,NPRL2突变果蝇体内食物停留的时间较长。紫外分光光度计法,测定亮蓝食物的分布情况,发现食物crop中分布较多（P＜0.01）,在肠道中分布较少（P＜0.001）。表明NPRL2基因突变果蝇crop中出现食物堆积现象,是由于食物的消化或转运速度减缓所致。（2）通过CAFE法、Defecation法发现果蝇的食物取食量没有明显差异,但NPRL2突变果蝇的排便率显著降低（P＜0.001）;通过测定果蝇crop的收缩频率发现NPRL2突变果蝇crop的收缩率明显减慢（P＜0.001）。NPRL2突变果蝇的胃动力减弱可能就是造成NPRL2突变果蝇crop增大,食物堆积的原因之一。（3）通过果蝇肠道的测量,发现NPRL2突变果蝇肠道较短较细（P＜0.05、P＜0.001）,表明其肠道稳态可能失衡。通过测定肠道上皮细胞干细胞相关表达情况,发现NPRL2突变果蝇ISCs过度增殖（P＜0.001）,并且分化的肠内分泌细胞（EEs）明显减少（P＜0.05）。通过尼罗红染色对肠道脂含量进行测定,发现NPRL2突变果蝇肠道脂含量显著减少（P＜0.001）,通过给果蝇喂食肠道损伤剂SDS,发现NPRL2突变果蝇的寿命明显缩短（P＜0.001）。测定果蝇肠道抗菌肽基因的表达,发现NPRL2突变果蝇抗菌肽表达有显著升高（P＜0.001）。这些指标都说明NPRL2突变果蝇的肠道加快衰老。（4）用NPRL2;TorA948V果蝇（降低NPRL2果蝇TORC1活性）进行以上部分实验。发现TORC1活性降低后,crop变小,食物代谢加快,食物在crop中分布也减少到对照组野生型状态,并且crop的收缩率也恢复到野生型状态。因此推断NPRL2突变果蝇中TORC1活性升高可能是导致年龄相关的GI功能障碍的原因。（5）通过给果蝇喂食TORC1抑制药物雷帕霉素（rapamycin）,发现rapamycin药物处理后,crop中食物堆积现象明显恢复,表明rapamycin能抑制NPRL2缺失所产生的GI障碍。进一步表明Npr12蛋白通过抑制TORC1活性维持GI的正常功能。我们的研究结果表明,NPRL2突变果蝇GI表现出衰老果蝇的特征,是由于TORC1活性较高所致,提示TORC1活性的过分增加可能会加速GI消化系统衰老。

关键词：黑腹果蝇衰老 TORC1 NPRL2 胃肠道

NPRL2通过调控自噬参与去势抵抗前列腺癌对多西他赛耐药机制探究

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2022年第8期 0065-0067页

作者：张静河南省漯河医学高等专科学校河南漯河462000

研究探讨NPRL2通过调控自噬参与去势抵抗前列腺癌对多西他赛耐药机制。方法回顾分析将我院于2017年9月-2019年12月期间接受的去势抵抗前列腺癌患者中,将这60例患者设为研究对象进行研究。把这60例患者随机换分成两个组,即观察组与对照... 详细信息

研究探讨NPRL2通过调控自噬参与去势抵抗前列腺癌对多西他赛耐药机制。方法回顾分析将我院于2017年9月-2019年12月期间接受的去势抵抗前列腺癌患者中,将这60例患者设为研究对象进行研究。把这60例患者随机换分成两个组,即观察组与对照组,将其中30例患者设为观察组,另30例患者设为对照组。患者在进行治疗时,对照组患者使用泼尼松进行治疗,而观察组患者使用多西他赛耐药物进行治疗。治疗结束,将两组患者的治疗效果以及发生不良反应情况进行对比。结果与对照组相比较,观察组患者的治疗成效明显高于对照组,差异显著,(PNPRL2通过调控自噬参与多西他赛耐药进行治疗,治疗效果在显著提高的同时,其不良反应情况也相应减少,此治疗方式值得临床治疗上进行推广与使用。

关键词： NPRL2 去势抵抗前列腺癌多西他赛耐药调控自噬

肝细胞癌组织中抑癌基因NPRL2的表达及其意义

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中华肝脏病杂志 2012年第5期20卷 390-391页

作者：马燕凌孙建海晏菲李黎刘莉湖北省中山医院肿瘤科武汉430030

肝细胞癌（HCC）为原发性肝癌，其发生、发展是由于环境、遗传和生活环境等因素通过不同的途径激活原癌基因、抑制抑癌基因导致细胞增殖和凋亡失调所致。NPRL2（nitrogen permease regulator-like2）是新发现的人抑癌基因，位于人基因组... 详细信息

肝细胞癌（HCC）为原发性肝癌，其发生、发展是由于环境、遗传和生活环境等因素通过不同的途径激活原癌基因、抑制抑癌基因导致细胞增殖和凋亡失调所致。NPRL2（nitrogen permease regulator-like2）是新发现的人抑癌基因，位于人基因组3p21．3区域。

关键词：癌,肝细胞聚合酶链反应免疫组织化学 NPRL2

NPRL2影响去势抵抗性前列腺癌对奥拉帕尼敏感性的研究

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NPRL2影响去势抵抗性前列腺癌对奥拉帕尼敏感性的研究

作者：陈欣重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探究NPRL2在改善去势抵抗型前列腺癌(CRPC)对奥拉帕尼敏感性的影响方法:Western Blot法检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)、前列腺癌细胞系(LNCaP)、前列腺癌细胞系(PC3)和耐恩杂鲁胺的去势抵抗型前列腺癌细胞(LNPER)中NPRL2的蛋白... 详细信息

目的:探究NPRL2在改善去势抵抗型前列腺癌(CRPC)对奥拉帕尼敏感性的影响方法:Western Blot法检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)、前列腺癌细胞系(LNCaP)、前列腺癌细胞系(PC3)和耐恩杂鲁胺的去势抵抗型前列腺癌细胞(LNPER)中NPRL2的蛋白表达情况。通过慢病毒转染到CRPC细胞建立NPRL2的过表达和干扰,实时荧光PCR和Western blot法验证其NPRL2过表达和干扰效率。在体外实验中为了解NPRL2在CRPC细胞中调控Olaparib的敏感性,通过CCK-8法检测细胞增殖和细胞毒性、流式细胞术检测细胞凋亡和Transwell侵袭和迁移小室实验检测细胞侵袭转移。此外,我们研究了过表达和沉默NPRL2影响凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3蛋白、BAX蛋白和Bcl-2蛋白)、共济失调毛细血管扩张突变基因(ataxia telangiectasia-mutated,ATM)蛋白和上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin蛋白和vimentin蛋白)的表达。此外,我们进行了体内实验,以验证NPRL2在调节Olaparib敏感性中相关蛋白发生改变的结果。结果:NPRL2调控去势抵抗型前列腺癌(CRPC)对Olaparib的敏感性;Western blot显示NPRL2在RWPE-1细胞中低表达而在LNCaP、PC3和LNPER细胞中高表达并成功构建过表达和干扰NPRL2的稳定细胞株,QPCR及Western blot结果显示慢病毒转染能明显增高和降低NPRL2的mRNA和蛋白水平。CCK8实验表明NPRL2过表达促进的CRPC细胞生长和对Olaparib抗性,沉默NPRL2抑制CRPC细胞增殖,增强对Olaparib的敏感性。流式细胞和Transwell实验分别显示,沉默NPRL2联合Olaparib能明显促进细胞凋亡和阻止细胞侵袭转移。Western blot结果表明沉默NPRL2联合Olaparib处理后cleaved caspase-3、BAX蛋白、E-cadherin蛋白表达水平增高和Bcl-2蛋白、vimentin蛋白表达水平降低。沉默NPRL2能下调CRPC细胞的p-ATM和ATM蛋白表达水平,反之则上调p-ATM和ATM蛋白表达水平。体内实验结果证明Olaparib能显著抑制沉默NPRL2后的PC3细胞的裸鼠皮下肿瘤生长,Western blot检测显示沉默NPRL2后,皮下肿瘤凋亡增加,DNA损伤增加。结论:沉默NPRL2能增强CRPC对Olaparib的敏感性,并且NPRL2可以作为潜在的治疗靶标并预测CRPC对Olaparib的抗性。

关键词： NPRL2 ATM 去势抵抗前列腺癌奥拉帕尼敏感性

双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响

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重庆医学 2017年第18期46卷 2464-2467页

作者：邓正国唐伟陈欣史晓博重庆市永荣矿业有限公司总医院泌尿外科重庆荣昌402460 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科 400016

目的探讨双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响。方法构建pET15b-CTP-NPRL2并电转双歧杆菌,Western blot验证蛋白表达。采用肾癌细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型,并分为观察组与对照组(每组8只),分别经尾静脉注射携带pE... 详细信息

目的探讨双歧杆菌介导CTP-NPRL2对裸鼠肾癌生长及凋亡的影响。方法构建pET15b-CTP-NPRL2并电转双歧杆菌,Western blot验证蛋白表达。采用肾癌细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型,并分为观察组与对照组(每组8只),分别经尾静脉注射携带pET15b-CTP-NPRL2的双歧杆菌与生理盐水,每周1次,4周后处死裸鼠,称取裸鼠及荷瘤质量,TUNEL法检测肾癌组织凋亡。结果观察组与对照组裸鼠质量分别为(26.24±1.98)g、(23.28±2.17)g,荷瘤质量分别为(1.37±0.12)g、(1.68±0.18)g,两组比较差异均有统计学意义(P23.27±5.14)%明显高于对照组(10.37±2.58)%,两组比较差异有统计学意义(PNPRL2对裸鼠肾癌生长具有抑制功能,并明显增加了肾癌细胞的凋亡。

关键词：肾肿瘤双歧杆菌基因治疗 NPRL2 细胞质转导肽