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力竭运动对大鼠前额叶皮层小清蛋白阳性神经元及nmdar2b表达的影响

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中国运动医学杂志 2017年第3期36卷 189-194页

作者：崔书强刘晓莉乔德才郑健北京师范大学体育与运动学院北京100875 北京市体育科学研究所北京100075 广州中医药大学广州510006

目的:通过观察力竭运动后大鼠前额叶皮层小清蛋白(parvalbumin,PV)阳性神经元的表达变化,探讨运动疲劳对前额叶皮层神经微环路可塑性的影响,同时观察前额叶皮层N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2b亚型(N-methyl-D-aspartatereceptor NR2b subu... 详细信息

目的:通过观察力竭运动后大鼠前额叶皮层小清蛋白(parvalbumin,PV)阳性神经元的表达变化,探讨运动疲劳对前额叶皮层神经微环路可塑性的影响,同时观察前额叶皮层N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2b亚型(N-methyl-D-aspartatereceptor NR2b subunit,nmdar2b)表达的变化,进一步探讨运动疲劳中枢调节的可能机制。方法:雄性Wistar大鼠36只随机分为一次力竭运动组、重复力竭运动组和对照组。力竭运动方案采用本实验室改进的bedford渐增负荷动物运动方案:I级:8.2 m/min,15 min;II级:15 m/min,15 min;III级:20 m/min,至力竭,重复力竭运动组连续进行7天力竭性跑台运动,在运动力竭后采用免疫荧光染色技术观察大鼠前额叶皮层PV阳性神经元的表达情况,并记录阳性细胞个数。采用免疫荧光染色技术和免疫印迹法检测前额叶皮层nmdar2b的表达情况。结果:一次力竭运动组及重复力竭运动组大鼠前额叶皮层PV阳性神经元个数较对照组显著增加(Pnmdar2b阳性神经元在对照组和重复力竭运动组未见明显表达,一次力竭运动组可见阳性神经元表达;Western blot结果显示,与对照组相比,一次力竭运动组nmdar2b表达相对较高,而重复力竭运动组表达相对较低,但均无显著性差异(P>0.05);nmdar2b表达与运动距离呈显著负相关(P<0.01,r=-0.936)。结论:力竭运动通过PV阳性神经元的局部环路的调节影响大鼠前额叶皮层神经网络的可塑性,其参与了运动疲劳的中枢调节,为运动疲劳中枢机制研究提供了形态学基础。

关键词：运动疲劳 nmdar2b 小清蛋白前额叶皮层中枢调节

癫痫清颗粒对戊四唑点燃癫痫大鼠行为学及脑内nmdar2b、c-fos表达的影响

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中华中医药学刊 2016年第6期34卷 1319-1322,I0003,I0004页

作者：黄寓薛彦杰齐越王健贾冬沈阳市第二中医医院辽宁沈阳110101 沈阳出入境检验检疫局辽宁沈阳110016 辽宁中医药大学附属二院辽宁沈阳110034 沈阳市第一人民医院辽宁沈阳110041 辽宁中医药大学辽宁沈阳110847

目的:观察癫痫清颗粒对戊四唑点燃癫痫大鼠行为学及脑内nmdar2b和c-fos表达的影响,探讨其抗癫痫的作用机理。方法:腹腔注射戊四唑建立癫痫大鼠点燃模型,连续灌胃给药30 d后,观察癫痫清颗粒对大鼠行为学及脑组织nmdar2b和c-fos的影响。结... 详细信息

目的:观察癫痫清颗粒对戊四唑点燃癫痫大鼠行为学及脑内nmdar2b和c-fos表达的影响,探讨其抗癫痫的作用机理。方法:腹腔注射戊四唑建立癫痫大鼠点燃模型,连续灌胃给药30 d后,观察癫痫清颗粒对大鼠行为学及脑组织nmdar2b和c-fos的影响。结果:癫痫清颗粒可延长癫痫大鼠惊厥潜伏期,缩短惊厥持续时间,减少组织nmdar2b和c-fos的表达。结论:癫痫清颗粒对戊四唑点燃大鼠模型具有抗癫痫作用,作用机制与减少脑内nmdar2b和c-fos的表达有关。

关键词：癫痫清颗粒戊四唑 nmdar2b c-fos

抗nmdar2b(phospho Y1070)兔单克隆抗体制备及初步鉴定

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抗NMDAR2B(phospho Y1070)兔单克隆抗体制备及初步鉴定

作者：余丹浙江大学

学位级别：硕士

背景抗体从多克隆发展到单克隆抗体药物,已被广泛应用于生物科学及医药研发技术产品中。相比鼠单克隆抗体而言,兔单克隆抗体具有高亲和力,特异性强,易于人源化等优点。n-甲基-d-天冬氨酸受体(nmdars)是压力敏感型和配基偶联的钙离子通道... 详细信息

背景抗体从多克隆发展到单克隆抗体药物,已被广泛应用于生物科学及医药研发技术产品中。相比鼠单克隆抗体而言,兔单克隆抗体具有高亲和力,特异性强,易于人源化等优点。n-甲基-d-天冬氨酸受体(nmdars)是压力敏感型和配基偶联的钙离子通道,并在突触可塑性、学习记忆以及神经紊乱等方面扮演重要角色,作为一种独特的双重门控通道(doubly gated channel),它既受膜电位控制也受其它神经递质控制。该受体被激活后,主要对Ca2+有通透性,介导持续、缓慢的去极化过程。目前市面上主要是nmdar2b的多克隆抗体,且其特异性和亲和力并不是十分理想。目的制备nmdar2b兔单克隆抗体。方法本实验设计合成了一段nmdar2b多肽,YCA-13436多肽免疫三只实验兔。经过血清blot实验初步筛选,将可能免疫了nmdar2b兔脾细胞与240E兔骨髓瘤样细胞株融合,产生能分泌nmdar2b抗体的兔-兔杂交瘤细胞,用HAT作为选择性培养基对融合后的细胞进行培养,运用ELISA法和Wb法,筛选获得阳性克隆,选取其中Wb信号最强的克隆进入抗体质粒重组阶段,再进一步筛选,选取分泌单克隆抗体最强的配对进入单克隆抗体大转生产。结果YCA-13436的H1332号兔子免疫效果较佳,并进入融合开发抗体,所得重组37-d抗体在多种裂解液中检出特异性目的条带,并能特异性地识别磷酸化蛋白而不能识别非磷酸化蛋白。结论本实验共设计一段nmdar2b的磷酸化氨基酸序列,编号是YCA-13436,免疫实验兔后,通过ELISA和Wb方法,细胞杂交瘤技术以及重组抗体技术,获得YCA-13436-37-d的nmdar2b兔单克隆抗体,特异性地识别磷酸化抗体,Wb结果良好,满足检测需要,有潜在应用前景。

关键词：兔单克隆抗体 nmdar2b 重组抗体

七氟烷致老年大鼠认知能力下降与大脑神经元nmdar2b及GAbAR1的表达相关

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七氟烷致老年大鼠认知能力下降与大脑神经元NMDAR2B及GABAR1的表...

作者：杨晓楠河北北方学院

学位级别：硕士

术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)是麻醉手术的并发症之一,其临床表现为学习和记忆能力下降、注意力不能集中等认知性能的改变,严重者还会呈现人格改变和社会行为能力的严重下降。随着人口老龄化和医学技术... 详细信息

术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)是麻醉手术的并发症之一,其临床表现为学习和记忆能力下降、注意力不能集中等认知性能的改变,严重者还会呈现人格改变和社会行为能力的严重下降。随着人口老龄化和医学技术的快速开展,老年患者获得手术医治的人数在不断增加,随之而来POCD的发病率也在逐年升高,严重影响了老年患者术后的生活质量。本研究拟通过探究吸入相同浓度不同作用时间的七氟烷对老年大鼠认知功能障碍以及不同脑区nmdar2b和GAbAR1两种受体表达的影响。本研究通过雄性SD老年大鼠模型50只,随机分为对照组(C组,n=10)和实验组(T组,n=40)。各组大鼠于处理前进行五天的水迷宫实验,使其能够产生稳定记忆。C组吸入室温空气,实验组按3%浓度吸入七氟烷持续时间不同分为T1(吸入2h)组、T2(吸入4h)组,各组又均分为两组,分别在麻醉后的第1d和第7d进行Morris水迷宫实验,检测老年大鼠的空间学习记忆能力,并在测试结束两小时后进行开颅取脑,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应和免疫荧光技术分别检测海马及额叶的GAbAR1和nmdar2b的m RNA的转录水平和蛋白表达水平。通过分析Morris水迷宫测试的结果发现海马区及额叶在吸入七氟烷1d后的T1,T2组的逃避潜伏期较对照组有所延长(P2组逃避潜伏期较对照组延长(P0.05)。免疫荧光结果显示,吸入七氟烷1d后海马区及额叶T1,T2组比对照组GAbAR1的蛋白含量明显上调(Pnmdar2b的蛋白含量则明显下降(P2组的海马区变化比T1更明显,额叶的变化比T1组不明显;吸入七氟烷7d后,额叶中T1组nmdar2b的蛋白含量较对照组下降明显(P2组GAbAR1和nmdar2b的蛋白含量较对照组以及T1组变化明显(P2组大鼠的GAbAR1和nmdar2b的蛋白含量与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光PCR检测吸入七氟烷1d后海马区及额叶T1,T2组中GAbAR1的转录水平比对照组明显上调(Pnmdar2b的转录水平则明显下降(P2组较T1组变化略大;吸入七氟烷7d后,T1,T2组大鼠的GAbAR1和nmdar2b的转录水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。由此得出结论,吸入麻醉药可引起老年大鼠的空间记忆损伤,且长时吸入七氟烷比短时吸入麻醉造成的损害更重,且损伤会持续一段时间;吸入麻醉药七氟烷可影响老年大鼠的空间记忆能力的下降以及海马区和额叶的GAbAR1表达的上调以及nmdar2b表达的下调,提示吸入七氟烷引起的认知功能障碍可能是由多脑叶及多脑区共同参与完成的。

关键词： POCD 七氟烷 nmdar2b GAbAR1 脑叶

丙泊酚麻醉对老龄大鼠学习记忆的和大脑nmdar2b及GAbAR1表达的影响

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丙泊酚麻醉对老龄大鼠学习记忆的和大脑NMDAR2B及GABAR1表达的影响

作者：乔霖河北北方学院

学位级别：硕士

研究背景:术后认知功能障碍(POCD,postoperative cognitive dysfunction)是指术前没有精神障碍的患者在手术后出现的以精神障碍为主的临床综合征,是老龄患者手术的常见并发症,主要临床表现为人格的改变、精神错乱、焦虑、以及记忆受损。... 详细信息

研究背景:术后认知功能障碍(POCD,postoperative cognitive dysfunction)是指术前没有精神障碍的患者在手术后出现的以精神障碍为主的临床综合征,是老龄患者手术的常见并发症,主要临床表现为人格的改变、精神错乱、焦虑、以及记忆受损。POCD可增加老龄患者术后的发病率和死亡率,并且严重影响患者术后的生活质量。研究目的:在丙泊酚麻醉下,对老龄大鼠进行开腹探查术,探究丙泊酚及手术应激对术后认知功能障碍的影响,以及对海马和外侧颞叶nmdar2b和GAbAR1表达的影响。研究方法:选择雄性健康老龄大鼠60只,随机分为对照组(C),丙泊酚组(P),丙泊酚手术组(PO),每组20只。每组大鼠于术前进行为期五天的水迷宫实验使大鼠产生稳定的记忆,丙泊酚手术组(PO)于水迷宫实验后对大鼠进行丙泊酚麻醉下建立开腹探查术模型,丙泊酚组给予相同时间的单纯麻醉。每组于术后第七天进行水迷宫实验测试其学习记忆能力,并在水迷宫测试完成两小时后进行开颅取脑,常规石蜡包埋,免疫荧光及FISH技术检测外侧颞叶及海马nmdar2b及GAbAR1的表达。研究结果:***水迷宫结果:PO组与C组比较逃避潜伏期时间延长(P2b受体表达结果:PO组免疫荧光,FISH检测与C组比较无论海马及外侧颞叶nmdar2b表达都明显降低(Pnmdar2b表达与C组比较无统计学意义。***1受体表达结果:PO组免疫荧光,FISH检测与C组比较海马及外侧颞叶GAbAR1表达明显上调(PbAR1表达与C组比较无统计学意义。研究结论:1.单纯丙泊酚麻醉下不导致老龄大鼠远期学习记忆的损害,而丙泊酚复合手术影响远期学习记忆。***2b表达的下调及GAbAR1表达的上调参与了丙泊酚手术对老龄大鼠学习记忆的影响。3.丙泊酚及丙泊酚手术不仅仅对传统海马区造成相关蛋白的改变,而在外侧颞叶也发生了与海马相同的改变,我们猜测术后认知功能障碍是多脑叶及多脑区的共同参与。

关键词： POCD 丙泊酚手术应激 nmdar2b GAbAR1

苯并“a”芘对断乳大鼠学习记忆及海马nmdar2b、bDNF、CREb和P300表达的影响

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苯并“a”芘对断乳大鼠学习记忆及海马NMDAR2B、BDNF、CREB和P300...

作者：程继文山西医科大学

学位级别：硕士

目的:观察苯并[a]芘(b[a]P)致断乳大鼠病理组织学以及神经行为的变化,探讨不同剂量苯并[a]芘对断乳大鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法:取40只健康SD初断乳大鼠(28天,体重50～55 g),按体重随机分为5组,每组8只,分组:空白对照组(腹... 详细信息

目的:观察苯并[a]芘(b[a]P)致断乳大鼠病理组织学以及神经行为的变化,探讨不同剂量苯并[a]芘对断乳大鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法:取40只健康SD初断乳大鼠(28天,体重50～55 g),按体重随机分为5组,每组8只,分组:空白对照组(腹腔注射生理盐水)、溶剂对照组(腹腔注射植物油)、3个染毒组(b[a]P浓度分别为5、10和20 mg / kg体重)。隔日腹腔注射,连续染毒一个月后Morris水迷宫试验,测定动物的学习记忆能力,而后断头处死断乳大鼠,取脑,观察断乳大鼠组织学变化。用免疫组织化学法检测N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2b亚基(nmdar2b)、脑源性神经营养因子(bDNF)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREb1)、CREb结合蛋白(CbP/P300)在大鼠海马区的表达。结果:(1)Morris水迷宫试验结果显示:在定位导航试验中,高剂量组逃避潜伏期显著增加(P﹤0.01);在空间搜索实验中,随染毒剂量的增加,原平台现象停留时间呈递减趋势,但各组之间相比差异无统计学意义(P>0.05),高剂量组跨台次数减少(P2)病理组织学结果:常规HE染色光镜观察到,对照组神经细胞排列整齐,随着苯并[a]芘剂量的增高,细胞排列渐松散,高剂量组可见有散在神经元体积缩小,未见凋亡特征性的变化。尼氏体染色结果显示:高剂量组大鼠海马区神经元的胞体和树突内含有颗粒状蓝染物质,可见少许胞体和树突内含有颗粒状蓝染物质溶解或消失(尼氏体溶解现象)。(3)免疫组织化学染色结果:镜下可见各组大鼠海马均有大量免疫反应阳性神经元,CREb1和nmdar2b阳性反应定位于细胞胞膜上,呈棕黄色,并可见随着染毒剂量的加大,免疫阳性表达呈递减趋势,高剂量组与对照组相比,差异有统计学意义(P﹤0.01)。bDNF和P300阳性反应主要定位于细胞胞浆中,呈棕黄色。随着染毒剂量的加大,bDNF灰度值除低剂量组外也呈递减趋势,高剂量组与对照组、低剂量组相比差异均有统计学意义(P﹤0.05),低剂量组大鼠海马区bDNF灰度值高于对照组,但二者相比差异无统计学意义(P>0.05)。P300免疫阳性反应呈递增趋势的现象,低、中量组与对照组相比,差异亦具有统计学意义(P﹤0.01)。结论:苯并[a]芘可致断乳大鼠学习记忆能力发生改变,且随剂量的增加而变化越明显。苯并[a]芘致大鼠学习记忆损伤的病理机制可能与大鼠海马区nmdar2b、bDNF、CREb1的低表达有关。P300在苯并芘致学习记忆损伤过程中可能发挥保护作用,不发挥乙酰化酶的作用。

关键词：苯并[a]芘断乳大鼠学习记忆 nmdar2b bDNF CREb1 P300

异氟醚致老年大鼠认知能力下降与大脑神经元nmdar2b及GAbAR1的表达相关

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异氟醚致老年大鼠认知能力下降与大脑神经元NMDAR2B及GABAR1的表...

作者：曹高亚河北北方学院

学位级别：硕士

术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)是一种于麻醉及手术后出现的认知功能退化的中枢神经系统并发症,尤其以老年患者多见。其主要临床表现为人格的改变、记忆的损伤以及社交减退。POCD可延长老年患者的住院时间... 详细信息

术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)是一种于麻醉及手术后出现的认知功能退化的中枢神经系统并发症,尤其以老年患者多见。其主要临床表现为人格的改变、记忆的损伤以及社交减退。POCD可延长老年患者的住院时间,增加患者的病死率,严重的影响了患者术后的生活质量。本研究拟通过探究不同浓度及不同持续时间的异氟醚吸入对老年大鼠认知功能障碍以及不同脑区nmdar2b和GAbAR1表达的影响。本研究通过对100只雄性SD老年大鼠,随机分组,分别为对照组(C组20只)和实验组(S组80只)。各组大鼠均于处理前进行为期五天的水迷宫实验,以使其能够产生稳定记忆。对照组吸入室温空气,实验组按照药物浓度和吸入持续时间分为S1组(1.5%-2h),S2组(2.5%-2h),S3组(1.5%-4h),S4组(2.5%-4h)。C组和S组均分别在吸入室温空气和不同浓度药物后1、7 d进行Morris水迷宫实验来测试其学习记忆能力,并在测试结束两小时后进行开颅取脑,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应和免疫荧光技术检测海马及颞叶的GAbAR1和nmdar2b的mRNA的转录水平和蛋白表达水平。通过Morris水迷宫测试结果,我们发现吸入异氟醚1d后的各实验组大鼠的穿越平台次数与对照组相比有明显下降,且随着药物浓度的增高和吸入持续时间的增加,大鼠学习记忆能力下降程度越明显;各实验组大鼠的逃避潜伏期与对照组相比出现延长,且与药物浓度增高和药物持续时间的增加有一定相关性。吸入异氟醚7 d后,S1,S2,S3组大鼠的穿越平台次数和逃避潜伏期与对照组差异无统计学意义,但S4组大鼠穿越次数明显低于对照组和其他三组,逃避潜伏期时间明显长于对照组和其他三组。并且大鼠这种改变与我们应用免疫荧光及实时荧光PCR检测出来的结果是一致的。免疫荧光及实时荧光定量PCR显示,吸入异氟醚1d后的各实验组大鼠颞叶及海马中GAbAR1的蛋白含量及转录水平与对照组相比明显上调,且随着药物浓度的增高和吸入持续时间的增加上调的越明显。吸入异氟醚7d后的S1,S2,S3组中GAbAR1的蛋白含量及转录水平与对照组相比差异无统计学意义,而S4组有明显上调。另外,免疫荧光及实时荧光定量PCR还显示,吸入异氟醚1d后的各实验组大鼠颞叶及海马中nmdar2b的蛋白含量及转录水平与对照组相比明显下调,且随着药物浓度的增高和吸入持续时间的增加下调的越明显。吸入异氟醚7d后的S1,S2,S3组中nmdar2b的蛋白含量及转录水平与对照组相比差异无统计学意义,而S4组有明显下调。进而我们也就得出了结论,持续吸入异氟醚对短期空间记忆能力的影响显著,且长时间高浓度的吸入造成的影响时间较长;异氟醚影响空间记忆能力的改变与nmdar2b表达的下调及GAbAR1表达的上调相关;吸入异氟醚麻醉不仅造成了海马区相关蛋白的改变,而且在颞叶也发生了与海马相似的改变,我们推测术后认知功能障碍可能是由多脑叶及多脑区共同参与的。

关键词： POCD 异氟醚 GAbAR1 nmdar2b 脑叶

推拿手法对神经病理痛大鼠背根神经节和脊髓背角nmdar2b表达的影响

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光明中医 2019年第16期34卷 2472-2474页

作者：陈水金江煜陈乐春陈进城林志刚福建中医药大学附属康复医院推拿科福建福州350003 福建省康复技术重点实验室福建福州350003

目的通过观察坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠模型(CCI)大鼠背根神经节和脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2b亚单位(NR2b)的表达和推拿手法干预对其的影响,探讨推拿手法干预神经病理痛的作用机制。方法清洁级雄性SD大鼠,随机分成空白组... 详细信息

目的通过观察坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠模型(CCI)大鼠背根神经节和脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2b亚单位(NR2b)的表达和推拿手法干预对其的影响,探讨推拿手法干预神经病理痛的作用机制。方法清洁级雄性SD大鼠,随机分成空白组、假手术组、CCI模型组、CCI模型+推拿组,每组8只。空白组不做任何处理;假手术组只分离坐骨神经但不进行结扎;CCI模型组及CCI模型+推拿组均参照bennett G J的方法稍作改进制备神经病理痛模型;CCI模型+推拿组于造模后第4~17天实施每天1次、每次10 min的推拿干预。疗程结束后Western blot检测背根神经节和脊髓背角组织NR2b蛋白的表达。结果与空白组、假手术组相比,CCI模型组、CCI+推拿组的背根神经节nmdar2b的表达量均上调(P nmdar2b的表达量的差异无统计学意义(P> 0. 05)。与空白组、假手术组相比,CCI模型组的脊髓背角nmdar2b的表达量上调(P nmdar2b的表达量被逆转(P 2b参与大鼠神经病理痛的形成和维持,推拿手法可通过抑制脊髓NR2b蛋白表达,从而抑制脊髓背角中枢敏化以发挥镇痛的作用。

关键词：推拿神经病理痛背根神经节脊髓背角 nmdar2b

逍遥散对大鼠慢性束缚应激脑区nmdar2A和nmdar2b蛋白的调节作用

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湖南中医药大学学报 2009年第5期29卷 26-28页

作者：王竹风汪宝军岳广欣陈家旭北京市大兴区中医院北京102618 北京中医药大学基础医学院北京100029 中国中医科学院基础研究所北京100700

目的观察海马及杏仁核nmdar2A和2b蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用。方法采用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用Western blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3... 详细信息

目的观察海马及杏仁核nmdar2A和2b蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用。方法采用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用Western blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)和杏仁核的nmdar2A和2b蛋白表达的情况。结果在分离的4个部位(CA1,CA3,DG和杏仁核),发现NR2A和NR2b分子在其中都有表达。NR2A的表达:在CA3和DG区,7 d和21 d模型组的表达降低,差异具有统计学意义(P2b的表达情况和NR2A基本一致。结论逍遥散对NR2A和NR2b有明显的调节作用,在海马的CA3和DG区最明显,对7 d和21 d的应激模型都有不同程度的改变作用,以维持机体原来的平衡状态。提示逍遥散对神经突触性的改变有生理性保护作用。

关键词：逍遥散束缚应激突触可塑性 Western blot nmdar2A nmdar2b 大鼠