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小鼠nmda受体nr2b亚基短发夹RNA干扰真核表达载体的构建与鉴定

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现代医药卫生 2013年第7期29卷 1008-1009页

作者：章饶香中南大学湘雅三医院麻醉科湖南长沙410013

目的设计并构建小鼠N-甲基-D-天冬氨酸(nmda)受体2b亚基(nr2b)短发卡RNA干扰真核表达载体并鉴定。方法根据nmda受体nr2b mRNA编码序列设计并合成针对nr2b的特异性RNA干涉片段,将其克隆入pYr-1.1质粒载体,构建nr2b短发夹RNA(shRNA)真核... 详细信息

目的设计并构建小鼠N-甲基-D-天冬氨酸(nmda)受体2b亚基(nr2b)短发卡RNA干扰真核表达载体并鉴定。方法根据nmda受体nr2b mRNA编码序列设计并合成针对nr2b的特异性RNA干涉片段,将其克隆入pYr-1.1质粒载体,构建nr2b短发夹RNA(shRNA)真核表达载体pYr-1.1-GRIN2b-shRNA,并对其进行酶切和测序鉴定。结果酶切和测序结果均证明nmda受体nr2b shRNA已经插入质粒载体pYr-1.1。结论 nmda受体nr2b shRNA真核表达载体pYr-1.1-GRIN2b-shRNA构建成功。

关键词：小鼠 RNA干扰 nmda受体nr2b亚基 shRNA干扰载体

急性阿片耐受大鼠脊髓nmda受体nr2A及nr2b亚基表达的改变

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中国临床药理学与治疗学 2010年第1期15卷 59-65页

作者：杜金黄宇光扬州大学苏北人民医院麻醉科北京协和医院麻醉科北京100730

目的：了解大鼠短期多次应用芬太尼能否发生急性阿片耐受以及急性阿片耐受大鼠脊髓nmda受体nr2A和nr2b亚基表达的改变。方法：24只体重为200-220g的雄性SD大鼠随机分为3组（n=8）：对照组（C）,生理盐水组（S）及芬太尼组（F）。F组大... 详细信息

目的：了解大鼠短期多次应用芬太尼能否发生急性阿片耐受以及急性阿片耐受大鼠脊髓nmda受体nr2A和nr2b亚基表达的改变。方法：24只体重为200-220g的雄性SD大鼠随机分为3组（n=8）：对照组（C）,生理盐水组（S）及芬太尼组（F）。F组大鼠给予皮下注射芬太尼30μg/kg,共4次,每两次注射之间间隔15min,S组大鼠以生理盐水代替芬太尼,C组大鼠未给药。给药前及给药结束后每30min以Von-Frey仪测定各组大鼠的机械刺激缩足阈值（paw withdrawal threshold,PWT）。当F组大鼠的PWT恢复到给药前基础水平时,各组大鼠均给予腹腔注射吗啡5mg/kg。随后仍每30min测定各组大鼠的PWT,直至F组大鼠的PWT再次回到基础水平。对各组大鼠不同时间点的PWT进行组内和组间比较。另24只体重为2000-220g的雄性SD大鼠分组及给药方法同前（分为C^＊、S^＊及F^＊组）,当F＊组大鼠的PWT首次恢复到基础值时,不给予吗啡,处死各组大鼠,取脊髓,以Western blotting方法测定nmda受体nr2A及nr2b亚基的蛋白表达水平。结果：连续4次皮下注射芬太尼（F组）后大鼠首先表现为PWT较基础值显著升高,随后PWT降低到基础值以下,然后逐渐恢复至基础值水平,此时皮下注射吗啡后,吗啡的镇痛效果显著低于其他两组大鼠（S组,C组）。F^＊组大鼠脊髓的nr2b亚基表达水平显著高于C^＊组及S^＊组,各组大鼠脊髓的nr2A亚基表达水平的差异无统计学意义。结论：短期应用芬太尼可导致大鼠发生急性阿片耐受。急性阿片耐受大鼠的脊髓nmda受体nr2b亚基表达水平显著升高,nr2A亚基表达水平无明显变化。

关键词：急性阿片耐受芬太尼吗啡 nmda受体nr2A亚基 nmda受体nr2b亚基

蛛网膜下腔应用Ro 25-6981对神经病理痛大鼠的镇痛作用及其电生理学机制研究

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中国疼痛医学杂志 2008年第2期14卷 87-91页

作者：曲晓秀李鸣佳蔡捷郑琴池叶楠刘风雨万有韩济生邢国刚北京大学神经科学研究所基础医学院神经生物学系教育部和卫生部神经科学重点实验室北京100083

目的:研究蛛网膜下腔应用Ro 25-6981,一种选择性的nmda受体nr2b亚基(nr2b)的拮抗剂,对神经病理痛大鼠的镇痛作用及其可能的机制。方法:(1)雄性SD大鼠蛛网膜下腔置管,手术成功后进行L5脊神经结扎(SNL)手术。术后7天用vonFrey纤维丝测定... 详细信息

目的:研究蛛网膜下腔应用Ro 25-6981,一种选择性的nmda受体nr2b亚基(nr2b)的拮抗剂,对神经病理痛大鼠的镇痛作用及其可能的机制。方法:(1)雄性SD大鼠蛛网膜下腔置管,手术成功后进行L5脊神经结扎(SNL)手术。术后7天用vonFrey纤维丝测定机械痛敏,筛选出造模成功的SNL神经病理痛大鼠,随机分为三组,通过蛛网膜下腔插管分别鞘内给予(i.t.)Ro25-698110.0μg(20μl)、100.0μg(20μl),或等体积的生理盐水作对照。在给药后第30min、60min、90min和120min测定大鼠后爪的50%缩足阈值(PWT)及鞘内给药前后大鼠的运动功能。(2)通过在体细胞外记录的电生理学方法,观察脊髓背表面给予Ro 25-6981100.0μg对大鼠脊髓背角广动力范围(WDR)神经元放电的影响。结果:(1)与生理盐水组相比,鞘内应用Ro 25-698110.0μg对SNL大鼠的50%PWT和机械痛敏翻转百分率(%MPE)没有明显的影响(P>0.05,n=8),而100.0μg却能显著增加SNL大鼠的50%PWT和%MPE,起到明显的镇痛作用(P0.05);(2)与生理盐水组相比,脊髓背表面给予Ro 25-6981100.0μg对WDR神经元的Aβ纤维诱发放电没有显著影响(P>0.05,n=6),但是可以显著抑制C纤维诱发放电(Pnr2b拮抗剂Ro 25-6981100.0μg可以对SNL大鼠产生明显的镇痛作用,而不影响动物的运动功能;这种镇痛作用可能是通过拮抗脊髓背角的nmda受体nr2b亚基,进而抑制WDR神经元的C纤维诱发放电所产生的。

关键词： nmda受体nr2b亚基脊髓背角神经病理痛 Ro 25-6981

蛛网膜下腔注射Ro25-6981对切口痛大鼠的镇痛作用研究

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国际麻醉学与复苏杂志 2011年第2期32卷 162-165页

作者：蒋明顾小萍马正良张威江苏省麻醉学重点实验室&徐州医学院江苏省麻醉医学研究所 221002 南京大学医学院附属鼓楼医院麻醉科

目的研究蛛网膜下腔注射Ro 25-6981,一种新型选择性的N-甲基-D-天门冬氨酸（nmda）受体nr2b亚基拮抗剂,对切口痛大鼠的镇痛作用.方法雄性SD大鼠60只,将大鼠采用随机数字表法分为4组,每组15只：对照组（C组）、切口痛组（Ⅰ组）、鞘内... 详细信息

目的研究蛛网膜下腔注射Ro 25-6981,一种新型选择性的N-甲基-D-天门冬氨酸（nmda）受体nr2b亚基拮抗剂,对切口痛大鼠的镇痛作用.方法雄性SD大鼠60只,将大鼠采用随机数字表法分为4组,每组15只：对照组（C组）、切口痛组（Ⅰ组）、鞘内注射Ro 25-6981 50μg/25μl组（R1组）、鞘内注射Ro 25-6981 200μg/25μl组（R2组）,每组15只.C组和Ⅰ组均鞘内注射5%DMSO溶剂25 μl.Ⅰ组、R1组和R2组在鞘内注射后行右后足切口痛模型制备.所有动物接受鞘内注射和手术均在吸入七氟醚麻醉下进行.术前24 h、术后2、6、24h检测大鼠痛行为学指标,包括50%机械缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）,同时测定鞘内给药前后大鼠的运动功能.结果与C组和术前基础值比较,Ⅰ组术后各时间点50%PWMT（7.0±0.9）、（6.7±0.7）、（6.4±1.2）g和PWTL（10.3±1.4）、（10.1±1.0）、（10.0±1.0）s均降低（P＜0.05）;与Ⅰ组比较,R1组各时间点50%PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）;R2组术后2 h 50%PWMT（9.0±0.8）g和PWTL（13.7±1.0）s与Ⅰ组相比均升高（P＜0.05）,6、24 h痛行为学差异无统计学意义;鞘内给药前后大鼠运动功能差异无统计学意义（P＞0.05）.结论鞘内注射选择性的Np2b拮抗剂Ro 25-6981 200.0μg可以对切口痛大鼠产生明显的镇痛作用而不影响运动功能.

关键词： Ro 25-6981 nmda受体nr2b亚基切口痛鞘内注射

鞘内注射Ro25-6981对大鼠慢性吗啡耐受的抑制作用研究

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现代医院 2011年第9期11卷 24-26页

作者：郑彬付晓东索琨佘守章许立新许学兵广州医学院附属广州市第一人民医院广东广州510180 中山大学医学院生理学教研室广东广州510080

目的研究鞘内注射Ro25-6981对大鼠吗啡耐受的抑制作用及其可能机理。方法 SD大鼠40只,随机分成四组,每组10只。空白对照组(C1组):蛛网膜下腔注射0.9%生理盐水25μl;溶剂组(C2组):蛛网膜下腔注射5%二甲基亚矾(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)溶... 详细信息

目的研究鞘内注射Ro25-6981对大鼠吗啡耐受的抑制作用及其可能机理。方法 SD大鼠40只,随机分成四组,每组10只。空白对照组(C1组):蛛网膜下腔注射0.9%生理盐水25μl;溶剂组(C2组):蛛网膜下腔注射5%二甲基亚矾(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)溶剂25μl;鞘内注射组Ⅰ(R1组):蛛网膜下腔注射Ro25-6981注射液25μl(50μg);鞘内注射组Ⅱ(R2组):蛛网膜下腔注射Ro25-6981注射液25μl(100μg)。四组大鼠完成鞘内注射后,参照文献[3]方法分别建立慢性吗啡耐受模型。注射后第1天、第3天、第5天和第7天采用热水甩尾法(hot-water tail-flick)测定甩尾潜伏期(Tail Flick Latency,TFL)的变化来评价吗啡的镇痛效果,同时采用斜板实验方法进行运动功能检测。结果同C1组比较:R1组第3天和第5天MPE%差异有统计学意义(p2组各时间点MPE%的差异有统计学差异(p2组差异无统计学意义。与第1天比较:R1组第5天和第7天MPE%逐渐降低(p2组第7天MPE%明显降低(p0.05)。不同时间点各组大鼠斜板角度的变化差异无统计学意义(p>0.05)。结论 Ro25-6981鞘内注射能够在一定程度上抑制大鼠慢性吗啡耐受的形成且不影响运动功能,表明nr2b在吗啡耐受形成中起了关键的作用。

关键词： Ro25-6981 nmda受体nr2b亚基吗啡耐受鞘内注射