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猪nlrp3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备

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中国兽医学报 2019年第6期39卷 1075-1079页

作者：张艳王文秀刘海隆曹宗喜谭树义海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口571100 海南省院士工作站(畜牧兽医) 海南海口571100 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为了获得猪源nlrp3重组蛋白以及针对猪nlrp3蛋白的多克隆抗体,本试验采用原核表达技术对猪源nlrp3蛋白的主要抗原区域进行了截短表达与鉴定,并以重组蛋白为免疫原免疫兔制备兔抗nlrp3蛋白多克隆抗体。结果显示,经RT-PCR方法扩增到大小为... 详细信息

为了获得猪源nlrp3重组蛋白以及针对猪nlrp3蛋白的多克隆抗体,本试验采用原核表达技术对猪源nlrp3蛋白的主要抗原区域进行了截短表达与鉴定,并以重组蛋白为免疫原免疫兔制备兔抗nlrp3蛋白多克隆抗体。结果显示,经RT-PCR方法扩增到大小为864 bp的nlrp3蛋白的主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-32α原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导获得了大小为50 000的重组蛋白;重组蛋白经纯化后Western blot检测其可与抗His标签单克隆抗体发生特异性反应;以纯化蛋白为免疫原制备的兔抗nlrp3蛋白多克隆抗体的抗体效价达1∶25 600,Western blot检测其可与nlrp3重组蛋白发生特异性反应。结果表明,获得了具有良好反应活性的nlrp3重组蛋白与多克隆抗体,为研究nlrp3蛋白的结构与功能、nlrp3蛋白与猪炎症性疾病的相互作用机制奠定了基础。

关键词：猪 nlrp3蛋白原核表达多克隆抗体

18α甘草次酸对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠急性溃疡性结肠炎的保护作用及机制研究

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中国医师杂志 2024年第2期26卷 234-239页

作者：张娟周萍穆先敏南京医科大学第二附属医院临床试验中心南京210011 南京医科大学第二附属医院老年医学科南京210011 南京医科大学第二附属医院生物治疗科南京210011

目的探究18α甘草次酸(18α-GA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的保护作用,为18α-GA的临床应用提供理论依据和实验基础。方法将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组:DSS模型组,阳性药对照组,18α-GA高、中、低剂量组,每... 详细信息

目的探究18α甘草次酸(18α-GA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的保护作用,为18α-GA的临床应用提供理论依据和实验基础。方法将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组:DSS模型组,阳性药对照组,18α-GA高、中、低剂量组,每组8只,5组小鼠均采用3%DSS溶液连续喂养7 d建立急性UC动物模型,同时各组分别每天腹腔注射100 mg/kg生理盐水、100 mg/kg柳氮磺吡啶、40 mg/kg 18α-GA、20 mg/kg 18α-GA、10 mg/kg 18α-GA。每天测量并记录小鼠的体重,评估小鼠疾病活动指数(DAI)。第8天处死小鼠,取小鼠结肠测量其长度;切片观察结肠黏膜并进行病理学评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nlrp3)炎症小体通路相关蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定结肠组织中IL-1β含量。结果与DSS模型组比较,18α-GA高、中剂量组第7天时的体重减轻幅度明显更小(均Pnlrp3表达更低(Pnlrp3炎症小体通路的激活,改善DSS诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎。

关键词：结肠炎,溃疡性 18α-甘草次酸 nlrp3蛋白白细胞介素1β 炎性肠疾病

淫羊藿素对6-OHDA诱导MN9D细胞中的nlrp3、Caspase-1及IL-1β蛋白表达的影响

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淫羊藿素对6-OHDA诱导MN9D细胞中的NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白...

作者：侯晓祎遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:通过研究淫羊藿素（Icaritin,ICT）对6-OHDA诱导的MN9D细胞中nlrp3、Caspase-1及IL-1β蛋白表达影响,探索ICT对6-OHDA诱导的MN9D细胞损伤模型保护作用及可能作用机制。方法:1)选择MN9D细胞进行复苏及培养,免疫荧光法检测MN9D细胞中... 详细信息

目的:通过研究淫羊藿素（Icaritin,ICT）对6-OHDA诱导的MN9D细胞中nlrp3、Caspase-1及IL-1β蛋白表达影响,探索ICT对6-OHDA诱导的MN9D细胞损伤模型保护作用及可能作用机制。方法:1)选择MN9D细胞进行复苏及培养,免疫荧光法检测MN9D细胞中的TH、nlrp3;2)采用不同浓度（0、10、20、30、40、50、60、70、80μmol/L）的6-OHDA诱导MN9D细胞,通过CCK8法检测细胞活力,选取最适6-OHDA浓度;3)采用不同浓度（0.001μmol/L,0.01μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L）的ICT预处理MN9D细胞,通过CCK8法检测细胞活力,选取适宜ICT浓度;4)根据实验设计进行分组:空白组,6-OHDA（50μmol/L）组,6-OHDA+ICT（0.001μmol/L）组,6-OHDA+ICT（0.01μmol/L）组。通过Western blot检测各组细胞中的TH、α-syn蛋白的表达水平;5)通过Western blot检测各组细胞中的nlrp3、Casepase-1、IL-1β蛋白表达水平。结果:1)随6-OHDA浓度增大,细胞活力逐渐下降。6-OHDA诱导浓度为50μmol/L时,细胞活力水平达50%左右接近造模水平,因此本实验选用50μmol/L作为造模浓度;2)不同浓度（0.001μmol/L,0.01μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L）ICT对MN9D细胞活力的影响无明显变化,当ICT浓度为0.01μmol/L时,对6-OHDA（50μmol/L）诱导的MN9D细胞损伤模型保护作用最佳;3)6-OHDA（50μmol/L）组TH的表达较空白组明显降低,予以ICT预处理1 h后6-OHDA+ICT（0.001μmol/L）组及6-OHDA+ICT（0.01μmol/L）组分别较6-OHDA（50μmol/L）组TH表达明显升高;4)6-OHDA（50μmol/L）组α-syn、nlrp3、Casepase-1、IL-1β表达较空白组明显升高,予以ICT预处理1 h后的6-OHDA+ICT（0.001μmol/L）组及6-OHDA+ICT（0.01μmol/L）组分别较6-OHDA（50μmol/L）组表达明显降低。结论:ICT对6-OHDA诱导的MN9D细胞模型有保护作用,该保护作用与抑制nlrp3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达有关。

关键词：淫羊藿素 nlrp3蛋白帕金森病 MN9D细胞

MCC950对大鼠脑缺血再灌注损伤后nlrp3炎性小体活化的影响

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中国新药与临床杂志 2022年第12期41卷 754-758页

作者：潘海英张楠周悦李晓云潍坊市益都中心医院神经康复科山东潍坊262500

目的探讨MCC950对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的保护作用及可能的机制。方法48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、溶剂组和MCC950组,每组12只。制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型后,MCC950组腹腔注射MCC9503 mg·kg^(-1),qd×7 d,溶... 详细信息

目的探讨MCC950对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的保护作用及可能的机制。方法48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、溶剂组和MCC950组,每组12只。制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型后,MCC950组腹腔注射MCC9503 mg·kg^(-1),qd×7 d,溶剂组则以同样的方式给予等量的生理盐水,假手术组和模型组不作任何药物干预。于再灌注24 h和末次给药后,利用Zea-Longa法对各组大鼠进行神经功能缺损评分,TTC染色法测定脑梗死体积,实时荧光定量PCR术检测脑梗死区组织中nlrp3、ASC和caspase-1基因表达,Western blot法检测脑梗死区组织中nlrp3、ASC、pro-caspase-1和caspase-1蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测脑梗死区组织中白细胞介素(IL)-1β和IL-18水平。结果与假手术组比较,模型组、溶剂组和MCC950组大鼠再灌注24 h后和末次给药后神经功能缺损评分升高,脑梗死体积百分比升高,脑梗死区组织中nlrp3、ASC和caspase-1 mRNA和蛋白表达量升高,pro-caspase-1蛋白表达量降低,IL-1β和IL-18水平升高,差异均有显著意义(Pnlrp3、ASC和caspase-1 mRNA和蛋白表达量降低,pro-caspase-1蛋白表达量升高,IL-1β和IL-18水平降低,差异均有显著意义(Pnlrp3炎性小体活化介导的炎症反应有关。

关键词：脑缺血再灌注损伤 MCC950 nlrp3蛋白大鼠

淫羊藿素通过抑制nlrp3对MPTP诱导的帕金森病小鼠神经损伤的保护作用

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淫羊藿素通过抑制NLRP3对MPTP诱导的帕金森病小鼠神经损伤的保护...

作者：杨成念遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究探讨MPTP诱导的PD小鼠模型行为学、黑质中TH阳性神经元及纹状体中TH阳性原纤维、神经胶质细胞和TH、nlrp3、GSDMD、IL-18和IL-1β相关蛋白的特点。通过淫羊藿素(Icaritin,ICT)干预后,观察PD小鼠模型行为学、黑质中TH阳性神... 详细信息

目的:本研究探讨MPTP诱导的PD小鼠模型行为学、黑质中TH阳性神经元及纹状体中TH阳性原纤维、神经胶质细胞和TH、nlrp3、GSDMD、IL-18和IL-1β相关蛋白的特点。通过淫羊藿素(Icaritin,ICT)干预后,观察PD小鼠模型行为学、黑质中TH阳性神经元及纹状体中TH阳性原纤维、神经胶质细胞和TH、nlrp3、GDSMD、IL-18和IL-1β相关蛋白的变化特点,明确ICT对PD小鼠模型的干预作用,为PD的防治提供新思路。方法:将B57BL/6J小鼠适应性喂养后分为空白对照组、正常给药组(ICT20mg/kg组)、模型组(MPTP 30 mg/kg组)、低剂量ICT治疗组(ICT 5 mg/kg+MPTP组)、中剂量ICT治疗组(ICT 10 mg/kg+MPTP组)、高剂量ICT治疗组(ICT 20 mg/kg+MPTP组)。连续9天给正常给药组和各治疗组灌胃ICT,灌胃1小时后,MPTP组及各治疗组连续5天腹腔注射MPTP建立PD模型;取材前一天训练后进行行为学检测,即疲劳转棒实验和爬杆实验;各组小鼠深度麻醉后,进行心脏灌注术后取脑固定。通过免疫荧光染色法观察各组小鼠黑质和纹状体TH阳性表达和神经胶质细胞活化情况。通过尼氏染色法观察黑质病理变化;各组小鼠麻醉后冰上取双侧中脑和纹状体组织,通过Western blot检测各组TH、nlrp3、GSDMD、IL-18 和 IL-1β 蛋白表达水平。结果:通过疲劳转棒测试结果发现,MPTP组跌落时间较空白对照组显著缩短(P蛋白表达降低,nlrp3、GDSMD、IL-18和IL-1β蛋白表达升高。加入ICT干预后,各治疗组TH蛋白降低被抑制,nlrp3、GSDMD、IL-18和IL-1β蛋白表达降低。结论:ICT可改善PD小鼠模型的运动功能障碍,减轻多巴胺能神经元损伤,抑制神经胶质细胞的激活,抑制nlrp3蛋白的激活和GSDMD介导的细胞焦亡。

关键词：帕金森病神经胶质细胞淫羊藿素 nlrp3蛋白

nlrp3炎症小体介导的炎症反应参与糖尿病导致的肾损伤和脂代谢异常

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中国病理生理杂志 2020年第1期36卷 53-58页

作者：朱艳梁子辉任韫卓吴明韩伟霞肖夏杜春阳河北医科大学电镜实验中心河北石家庄050017 河北医科大学外科总论与手术学教研室河北石家庄050017 河北医科大学病理学教研室河北石家庄050017

目的:观察nlrp3在糖尿病肾组织炎症及胆固醇代谢中的作用及机制。方法:实验小鼠分为4组:对照(WT)组、糖尿病(WT+STZ)组、nlrp3基因敲除(NKO)组和nlrp3基因敲除+糖尿病(NKO+STZ)组。腹腔注射STZ构建糖尿病小鼠模型。观察小鼠血尿生化指... 详细信息

目的:观察nlrp3在糖尿病肾组织炎症及胆固醇代谢中的作用及机制。方法:实验小鼠分为4组:对照(WT)组、糖尿病(WT+STZ)组、nlrp3基因敲除(NKO)组和nlrp3基因敲除+糖尿病(NKO+STZ)组。腹腔注射STZ构建糖尿病小鼠模型。观察小鼠血尿生化指标及肾组织形态学;电镜及油红O染色观察肾组织脂滴形成情况;Western blot方法检测nlrp3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18及胆固醇代谢指标SCAP、SREBP-2、HMGCR、LDLR、LXRα和ABCA1的蛋白表达情况及p38 MAPK的磷酸化情况。结果:与WT组小鼠相比,糖尿病小鼠肾组织的nlrp3表达和p38 MAPK的磷酸化水平显著升高;肾组织内炎症明显,胆固醇含量增加伴肾功能受损;敲除nlrp3显著减轻糖尿病小鼠肾组织炎症反应及胆固醇沉积,同时抑制p38 MAPK的磷酸化。结论:nlrp3介导的炎症反应在糖尿病肾损伤及脂代谢异常中发挥重要作用,这种作用可能与p38 MAPK信号通路的活化密切相关。

关键词：糖尿病肾病 nlrp3蛋白炎症胆固醇 p38 MAPK信号通路

右美托咪定通过c-Fos/nlrp3/caspase-1级联抑制LPS诱发的小胶质细胞炎症反应

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临床麻醉学杂志 2019年第8期35卷 798-802页

作者：邴海龙张希峣王朋飞储勤军郑州大学附属郑州中心医院麻醉科 450000 北京大学国际医院麻醉科

目的探讨右美托咪定通过c-Fos/nlrp3/caspase-1级联抑制脂多糖(LPS)诱发的小胶质细胞炎症反应。方法选取新生的SD大鼠,取其小胶质细胞进行原代培养及分离纯化。采用LPS诱导建立小胶质细胞炎症模型。采用MTT法选取右美托咪定抑制LPS诱导... 详细信息

目的探讨右美托咪定通过c-Fos/nlrp3/caspase-1级联抑制脂多糖(LPS)诱发的小胶质细胞炎症反应。方法选取新生的SD大鼠,取其小胶质细胞进行原代培养及分离纯化。采用LPS诱导建立小胶质细胞炎症模型。采用MTT法选取右美托咪定抑制LPS诱导小胶质细胞炎症反应的最适宜浓度。将细胞分为三组:对照组、LPS组和右美托咪定治疗组(D组)。采用实时定量PCR法测定细胞中IL-1β和TNF-α的mRNA表达量;采用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的含量;采用Western blot法检测原癌基因c-Fos、nlrp3和caspase-1的蛋白含量。结果与对照组比较,LPS组小胶质细胞中炎性因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达量均明显升高(Pnlrp3和caspase-1的蛋白含量均明显增加(Pnlrp3和caspase-1的蛋白含量明显低于LPS组(P蛋白含量,推测其作用机制可能与抑制c-Fos/nlrp3/caspase-1级联反应有关。

关键词：右美托咪定脂多糖 c-Fos nlrp3蛋白 caspase-1 炎症反应小胶质细胞

nlrp3炎性复合体与肺纤维化关系研究新进展

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华西医学 2017年第6期32卷 936-939页

作者：况菊谢敏四川大学华西医院呼吸与危重症医学科成都610041

肺纤维化包括一系列以肺间质及实质细胞外基质沉积、纤维形成、对肺结构不可逆性破坏为特点的异质性疾病。nlrp3炎性复合体主要是通过促进白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18成熟、分泌,从而在包括肺纤维化在内的多种病理过程中起... 详细信息

肺纤维化包括一系列以肺间质及实质细胞外基质沉积、纤维形成、对肺结构不可逆性破坏为特点的异质性疾病。nlrp3炎性复合体主要是通过促进白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18成熟、分泌,从而在包括肺纤维化在内的多种病理过程中起重要作用。目前新的研究发现nlrp3蛋白可以不经过复合体的形成而影响肺纤维化。该文对nlrp3炎性复合体及nlrp3蛋白参与肺纤维化的研究新进展进行了综述。

关键词： nlrp3炎性复合体 nlrp3蛋白肺纤维化肌成纤维细胞转化生长因子β