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nlrp3炎性体与白细胞介素-1β在2型糖尿病中的作用

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中国老年学杂志 2013年第11期33卷 2624-2625页

作者：曾朝阳张颖邹雪琴三峡大学第一临床学院宜昌市中心人民医院内分泌科湖北宜昌443003

2型糖尿病是一种多基因遗传性、进展性疾病,2003年,糖尿病患者占世界总人口的2.8%,其中85%是2型糖尿病〔1〕,严重威胁着人类的健康。因此,研究该病的发病机制,开发治疗该病更为有效的药物及方法迫在眉睫。2010年《科学》杂志发表了一篇... 详细信息

2型糖尿病是一种多基因遗传性、进展性疾病,2003年,糖尿病患者占世界总人口的2.8%,其中85%是2型糖尿病〔1〕,严重威胁着人类的健康。因此,研究该病的发病机制,开发治疗该病更为有效的药物及方法迫在眉睫。2010年《科学》杂志发表了一篇题为nlrp3炎性体（nlrp3

关键词： nlrp3炎性体白细胞介素-1β 2型糖尿病

nlrp3炎性体在缺血-再灌注急性肾损伤大鼠肾组织的表达及地塞米松干预对其影响

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中国急救医学 2019年第6期39卷 591-596页

作者：玄先法王玉新张以勤颜建华周丽娜武挺张丝雨赵本华厦门医学院附属第二医院(厦门市第二医院)肾内科福建厦门361021 厦门大学公共卫生学院福建厦门361102

目的研究缺血-再灌注急性肾损伤(AKI)大鼠肾组织中Nod样受体蛋白3(nlrp3)炎性体的表达以及地塞米松干预对其影响。方法选取发育正常的SD雄性大鼠21只,将实验大鼠平均分为三组并进行大鼠模型构造,分别为缺血-再灌注组(A组)、假手术组(B组... 详细信息

目的研究缺血-再灌注急性肾损伤(AKI)大鼠肾组织中Nod样受体蛋白3(nlrp3)炎性体的表达以及地塞米松干预对其影响。方法选取发育正常的SD雄性大鼠21只,将实验大鼠平均分为三组并进行大鼠模型构造,分别为缺血-再灌注组(A组)、假手术组(B组)及地塞米松+缺血-再灌注组(C组),对比各组之间血肌酐、尿素氮变化及nlrp3表达的差异情况,分析地塞米松干预治疗对大鼠体内nlrp3炎性体含量的影响。采用Western blot检测大鼠肾组织nlrp3蛋白的表达情况,应用ELISA检测大鼠肾组织中白细胞介素-1β(IL-1β)以及白细胞介素-18(IL-18)的水平,采取免疫组化检测各组间肾脏nlrp3表达情况,病理学检查各组大鼠的肾小管间质损伤情况。结果 A组大鼠血肌酐、尿素氮水平、nlrp3炎性体蛋白表达以及IL-1β、IL-18水平明显高于B组大鼠[分别为(89.5±10.8)μmol/L vs.(22.3±3.1)μmol/L,(23.1±5.3)mmol/L vs.(4.8±0.7) mmol/L,(0.39±0.11) vs.(0.08±0.01),(21.7±5.6)pg/mL vs.(5.7±1.9) pg/mL,(42.5±6.7) pg/mL vs.(11.4±2.3)pg/mL],差异均有统计学意义(Pnlrp3表达明显低于A组大鼠[(53.4±8.3)μmol/L vs.(89.5±10.8)μmol/L,(9.6±2.9)mmol/L vs.(23.1±5.3)mmol/L,(0.21±0.07)vs.(0.39±0.11),Pnlrp3的表达显著升高;病理学检查显示,缺血-再灌注组大鼠肾小管间质损伤较重。结论缺血-再灌注AKI会伴随血肌酐水平及nlrp3炎性体、IL-1β、IL-18的快速增高以及肾组织nlrp3表达增强,地塞米松干预能够减少肾组织nlrp3炎性体含量,减轻肾组织的损伤程度。

关键词： nlrp3炎性体缺血-再灌注急性肾损伤(AKI) 地塞米松

nlrp3炎性体参与胰岛素引起的大鼠血管平滑肌细胞炎症发生

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NLRP3炎性体参与胰岛素引起的大鼠血管平滑肌细胞炎症发生

作者：刘念第三军医大学

学位级别：硕士

背景：动脉粥样硬化是2型糖尿病的重要并发症，也是导致2型糖尿病患者死亡的重要原因之一。大量研究证实慢性炎症刺激在其疾病的发生发展具有重要作用。炎性细胞因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β)广泛存在于两种疾病发生发... 详细信息

背景：动脉粥样硬化是2型糖尿病的重要并发症，也是导致2型糖尿病患者死亡的重要原因之一。大量研究证实慢性炎症刺激在其疾病的发生发展具有重要作用。炎性细胞因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β)广泛存在于两种疾病发生发展的过程之中，对它们的发病机制有着重要影响。近年来，IL-1β的产生和成熟机制才逐渐被发现，即依赖于名为炎性体(Inflammasome)的分子平台。nlrp3炎性体是目前众多炎性体中被了解最深入的一种，其活化过程包含了预备(priming)和激活(activation)两个部分。IL-1β产生后，可以损伤2型糖尿病患者的胰岛素敏感性，故而加重胰岛素抵抗，代偿发生高胰岛素血症以及诱发心血管事件。而对于动脉粥样硬化患者，IL-1β则直接促进了斑块的形成和血管壁的损伤。故可认为nlrp3炎性体机制下产生的IL-1β是联系上述两种疾病的一个桥梁。另外一方面，胰岛素本身也被报道具有心血管损伤和促粥样斑块发展的作用，是联系2型糖尿病和动脉粥样硬化的另一个要素。之前的报告认为其主要促进作用是加速血管平滑肌细胞增殖和迁移，来加速粥样斑块的形成。也有学者发现血管平滑肌细胞受到直接炎性因子刺激时，会发生表型上的改变，分泌细胞因子，展现出一种类似炎性细胞的功能。而血管平滑肌细胞增殖和迁移，本身就伴随着去分化和表型改变的过程。因此假设：胰岛素对血管平滑肌的刺激作用，除了促进增殖和迁移之外，同时还可能伴随着炎性分子的是防御表达。明确这种联系是否存在，那么针对可以对临床上使用胰岛素治疗2型糖尿病发生血管并发症的情况，能进一步了解预后，更好的指导其治疗。目的：明确胰岛素诱导平滑肌细胞释放炎性因子IL-1β与IL-6与上调nlrp3相关分子及下游表达。在此基础上，结合胰岛素对在体动物血管损伤发展过程中起的作用，了解nlrp3炎性体在胰岛素治疗2型糖尿病中所扮演的角色，可以为科研和临床提供新的参考。研究内容： 1.胰岛素诱导大鼠血管平滑肌细胞表达nlrp3炎性体及下游分子Caspase-1和IL-1β。 2.胰岛素诱导大鼠血管平滑肌细胞分泌细胞因子IL-1β和IL-6。 3.胰岛素上调大鼠血管平滑肌细胞表达nlrp3炎性体的途径。 4.胰岛素对lepr-/-小鼠的血管损伤的作用。研究方法： 1.大鼠血管平滑肌的复苏、传代培养。 2. RT-QPCR实验检测胰岛素诱导大鼠血管平滑肌表达nlrp3、Caspase-1、IL-1β在mRNA的表达。 3.免疫印迹(Western blot)实验检测胰岛素诱导大鼠血管平滑肌表达nlrp3、Caspase-1、IL-1β在细胞内蛋白的表达。 4.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胰岛素诱导大鼠血管平滑肌培养上清中的IL-1β及IL-6含量。 5.动物小鼠的饲养。 6.小鼠主动脉血管的分离、油红染色、HE染色。结果： 1.胰岛素诱导促进大鼠血管平滑肌细胞nlrp3、Caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达。 2.胰岛素诱导的血管平滑肌细胞分泌IL-1β及IL-6的量随时间的推移而增加，在9H时达到峰值。 3. NF-κB阻滞剂Silibinin和Caspase-1抑制剂Ac-yvad-cmk均可以抑制胰岛素上调nlrp3、IL-1β。 4.胰岛素诱导lepr-/-小鼠体内胸腹主动脉的损伤。结论： 1.胰岛素诱导大鼠血管平滑肌细胞分泌释放表达IL-1β和IL-6炎性细胞因子。 2.胰岛素通过上调nlrp3炎性体，以促进大鼠血管平滑肌细胞表达IL-1β，并使大鼠血管平滑肌细胞具有炎性细胞释放炎性因子的特征。 3.胰岛素上调大鼠血管平滑肌中nlrp3炎性体的作用可以被NF-κB阻滞剂Silibinin和Caspase-1抑制剂Ac-yvad-cmk阻断，提示胰岛素对nlrp3炎性体的作用通过了炎性体活化的预备(priming)和激活(activation)两个途径。 4.胰岛素促进lepr-/-小鼠大血管的损伤。 5.综上所述，胰岛素具有影响血管平滑肌nlrp3炎性体表达和加速小鼠血管损伤的作用，本实验结果支持胰岛素促动脉粥样硬化发展的观点。

关键词： nlrp3炎性体胰岛素血管平滑肌细胞 2型糖尿病动脉粥样硬化

nlrp3炎性体在小鼠炎症相关肺癌发生中的作用

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NLRP3炎性体在小鼠炎症相关肺癌发生中的作用

作者：黄丽郑州大学

学位级别：硕士

目的炎性微环境在肺癌发生发展中发挥重要的作用。nlrp3炎性体是已知的可以参与炎症反应的一种细胞内受体,且已发现nlrp3炎性体与肿瘤的发生发展密切相关,然而其在肺癌发生,特别是炎症相关肺癌发生中的作用目前尚未见报道。本研究拟通... 详细信息

目的炎性微环境在肺癌发生发展中发挥重要的作用。nlrp3炎性体是已知的可以参与炎症反应的一种细胞内受体,且已发现nlrp3炎性体与肿瘤的发生发展密切相关,然而其在肺癌发生,特别是炎症相关肺癌发生中的作用目前尚未见报道。本研究拟通过构建炎症相关肺癌的小鼠模型,探讨nlrp3炎性体在苯并(a)芘[Benzo(a)pyrene,B(a)p]与细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症相关肺癌发生中的作用,对于肺癌的预防和治疗具有重要的现实意义。方法***级的野生型C57BL/6小鼠(Wild-type,WT)和nlrp3-/-小鼠分别随机分为4组:B(a)p联合LPS组[记为B(a)p+LPS组,n=35]、单独的B(a)p组[记为B(a)p组,n=35]、单独的LPS组(记为LPS组,n=15)和三辛酸甘油酯联合生理盐水组(记为溶剂对照组,n=15)。实验组小鼠经气管滴注B(a)p(1mg/mouse,溶于50μL的三辛酸甘油酯)或等体积的三辛酸甘油酯(50μL/mouse),每周1次,连续4次后停止,记为第0周;第3周经气管滴注给予LPS(2.5μg/mouse,溶于50μL的生理盐水)或等体积的生理盐水(50μL/mouse),3周1次,连续5次后停止,正常饲养至30周,观察各组小鼠肺部成瘤情况,计数肺部肉眼成瘤数,游标卡尺测量肺部肿瘤的最大长径,评估肿瘤的大小。透射电镜观察肺泡细胞形态学改变;HE染色观察各组小鼠的肺部病理改变,并评估肺部肿瘤的病理类型。2.免疫组化法检测WT小鼠肺组织中nlrp3、IL-1β和IL-18蛋白的表达;免疫荧光双染法观察WT小鼠肺组织中nlrp3和caspase-1蛋白的结合情况;Western blot检测WT小鼠肺组织中caspase-1成熟蛋白体(caspase-1 p10)和IL-1β成熟蛋白体(cleaved-IL-1β)的表达;ELISA法检测WT小鼠肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-18的表达。结果***小鼠和nlrp3-/-小鼠的溶剂对照组和LPS组均未观察到肉眼可见的瘤体,而B(a)p组与B(a)p+LPS组小鼠均可观察到肉眼可见瘤体,且WT小鼠的两组成瘤率分别82.05%,96.97%,nlrp3-/-小鼠的两组成瘤率分别为64.71%,84.62%。WT小鼠中B(a)p+LPS组成瘤数(13.0±12.4)与单独的B(a)p组(4.7±5.7)相比明显增加,nlrp3-/-小鼠中B(a)p+LPS组成瘤数(5.7±6.1)也明显高于B(a)p组(2.0±2.4)(P均nlrp3-/-小鼠的肉眼成瘤数均明显减少(P均nlrp3-/-小鼠暴露于B(a)p+LPS后形成的≤1mm的肿瘤数分别与其B(a)p组相比均明显增多(P均1mm的肿瘤数均明显高于nlrp3-/-小鼠(P均炎性改变,nlrp3基因缺失可以显著改善LPS所引起的炎性改变;此外,小鼠暴露于B(a)p或B(a)p+LPS后,肺部均有癌巢的形成;而nlrp3基因缺失可减少B(a)p或B(a)p+LPS所引起的癌巢数。两种小鼠暴露于B(a)p或B(a)p+LPS后均可引起肺腺癌和肺鳞癌的发生,且WT小鼠中两组肺腺癌的发生率分别为91.7%和85.7%;而nlrp3-/-小鼠中两组肺腺癌的发生率分别为92.9%和87.5%;两种小鼠B(a)p组和B(a)p+LPS组肺腺癌的发生率均明显高于其肺鳞癌的发生率(P均nlrp3和IL-18蛋白的表达均明显上调,且B(a)p+LPS组IL-18蛋白的表达明显高于B(a)p组(P均nlrp3的共定位程度均明显高于溶剂对照组(P均炎性微环境能够促进B(a)p诱导的小鼠肺癌的发生,成功构建了炎症相关肺癌的动物模型;NLR

关键词：细菌脂多糖苯并(a)芘炎症肺癌 nlrp3炎性体

nlrp3炎性体及Caspase1诱导急性淋巴细胞白血病耐药机制的初探

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NLRP3炎性体及Caspase1诱导急性淋巴细胞白血病耐药机制的初探

作者：王露桥天津医科大学

学位级别：硕士

目的:探究nlrp3炎性体及其下游因子Caspase1的过表达是否与血液肿瘤耐药有一定相关性,其表达升高是否会引起血液肿瘤对化疗药物的耐药从而促进血液肿瘤的进展及复发,抑制炎性体及其相关因子的活性是否会增加血液肿瘤对化疗药物的敏感性... 详细信息

目的:探究nlrp3炎性体及其下游因子Caspase1的过表达是否与血液肿瘤耐药有一定相关性,其表达升高是否会引起血液肿瘤对化疗药物的耐药从而促进血液肿瘤的进展及复发,抑制炎性体及其相关因子的活性是否会增加血液肿瘤对化疗药物的敏感性。从而为干预炎症信号逆转肿瘤耐药提供实验依据。方法:1.筛选细胞株与化疗药物通过LPS与ATP刺激SUP-B15(B-ALL)细胞株、(MOLM-13)AML细胞株、IM9(MM)细胞株、Raji(伯基特淋巴瘤)细胞株,诱导nlrp3炎性体及其下游因子Caspase1过表达。离心,弃上清,使用细胞培养基重悬经LPS与ATP预处理过的细胞,与不同的化疗药物共同孵育24h,48h,72h后,CCK8检测细胞活力变化,并筛选出有意义的细胞株与对应化疗药物。2.抑制Caspase1的活性后是否可以逆转耐药作用在经过LPS与ATP刺激前,用Caspase1抑制剂预处理阳性细胞株,离心,弃上清,再与化疗药物共同孵育,CCK8法检测细胞增殖,探究Caspase1抑制剂是否可以逆转耐药作用。3.抑制nlrp3炎性体的活性后是否可以逆转耐药作用在经过LPS与ATP刺激前,用nlrp3抑制剂预处理阳性细胞株,离心,弃上清,再与化疗药物共同孵育,CCK8法检测细胞增殖,探究nlrp3炎性体抑制剂是否可以逆转耐药作用。***-PCR和Western Blot检测阳性细胞株的nlrp3及其下游因子Caspase1的表达通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR),Western Blot的方法检测以下各组的nlrp3、Caspase1的RNA、蛋白水平的表达:对照组、LPS与ATP、LPS+ATP+化疗药物、nlrp3抑制剂+LPS+ATP+化疗药物、Caspase1抑制剂+LPS+ATP+化疗药物。5.探究nlrp3及Caspase1过表达的机制相关研究表明活性氧在nlrp3及Caspase1的表达中起到了关键作用,用流式的方法检测经以下各组活性氧的表达水平:对照组、LPS与ATP、nlrp3抑制剂+LPS+ATP、Caspase1抑制剂+LPS+ATP、ROS抑制剂+LPS+ATP。6.抑制活性氧的表达对nlrp3及下游因子Caspase1的表达的影响及能否逆转耐药作用在经过LPS与ATP刺激前,用活性氧抑制剂预处理阳性细胞株,离心,弃上清,再与化疗药物共同孵育,收集细胞用RT-PCR和Western Blot的方法检测经过ROS抑制剂预处理后的细胞株的nlrp3、Caspase1在蛋白和RNA水平上的表达变化,CCK8法检测细胞增殖。7.临床患者标本的检测搜集非复发难治、复发及难治的血液肿瘤的病人的骨髓标本,分离单个核细胞,提取蛋白和RNA,使用Western Blot和RT-PCR的方法检测其nlrp3、Caspase1的表达水平。实验结果:1.经过LPS与ATP刺激后的急性淋巴细胞白血病细胞株(SUP-B15)表现出对阿霉素、去甲氧柔红霉素、阿糖胞苷的细胞毒作用的抵抗性,提示LPS与ATP使肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药性。2.加用Caspase1和nlrp3抑制剂后,LPS与ATP刺激细胞后的产生耐药作用则被逆转,猜测Caspase1和nlrp3的表达升高在肿瘤细胞耐药过程中起到了重要作用。***-PCR和Western Blot结果显示经过LPS与ATP处理后的细胞其Caspase1和nlrp3的表达是升高的;VX-765(Caspase1抑制剂)能够抑制Caspase1的表达,nlrp3的表达无明显变化;MCC950(nlrp3抑制剂)均能够抑制nlrp3和Caspase1的表达。4.流式检测经过LPS与ATP刺激后的细胞,其ROS的表达是升高的,加用Caspase1抑制剂和nlrp3抑制剂组显示其ROS的水平无明显变化,加用ROS抑制剂的细胞其ROS的水平是降低的。5.加用ROS抑制剂后对nlrp3炎性体及其下游因子Caspase1的表达有一定抑制作用,对耐药作用有一定逆转作用。6.难治复发的B-ALL患者的Caspase1和NLPR3的表达在蛋白和RNA水平较于非复发难治的患者均升高。结论:***3炎性体及其下游因子Caspase1的过表达可以诱导急性B淋巴细胞白血病细胞株对阿霉素、阿糖胞苷和去甲氧柔红霉素的耐药作用。2.抑制nlrp3和Caspase1的活性在一定程度上可以逆转耐药作用。***和ATP可以通过诱导活性氧的产生进而促进nlrp3炎性体及其下游因子Caspase1的表达。4.复发难治的B-ALL患者的nlrp3和Caspase1的表达升高。

关键词： nlrp3炎性体半胱天冬酶1 耐药性急性淋巴细胞白血病活性氧脂多糖

nlrp3炎性体在HBV相关慢加急性肝功能衰竭中的作用

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NLRP3炎性体在HBV相关慢加急性肝功能衰竭中的作用

作者：贾艳红河北医科大学

学位级别：硕士

目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关慢加急性肝功能衰竭(acute on chronic liver failure,ACLF)是在慢性乙型肝病基础上出现的严重的肝细胞坏死、凋亡,继而引起严重的肝功能损害和各种并发症的临床综合征。其病情凶险,进展迅... 详细信息

目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关慢加急性肝功能衰竭(acute on chronic liver failure,ACLF)是在慢性乙型肝病基础上出现的严重的肝细胞坏死、凋亡,继而引起严重的肝功能损害和各种并发症的临床综合征。其病情凶险,进展迅速,预后不良。目前大多数学者认为其发病机制与免疫损伤密切相关。有研究称:在肝衰竭患者的外周血中存在“免疫紊乱”状态,但目前尚无确切的指标能够明确患者的免疫状态。核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NACHT-LRR-PYD-containing proteins 3,nlrp3)炎性体是一种多蛋白复合体,属于固有免疫系统,通过识别外源性及内源性损伤因子发挥作用。研究发现其在急性肝衰竭发挥促炎作用,但其在HBV相关ACLF中的作用尚未阐明。本研究通过检测HBV相关ACLF患者外周血、肝组织中nlrp3、Caspase-1及细胞因子白细胞介素-1β(interleukin,IL-1β)、IL-18的表达,初步探讨nlrp3炎性体在HBV相关ACLF患者中的作用。方法:选取2016年1月至2016年10月河北医科大学第三医院门诊或住院患者,HBV相关ACLF患者30例(ACLF组)、CHB患者30例(CHB组)和健康体检者15例(健康对照组)。此外,收集接受肝移植的HBV相关ACLF患者肝组织8例、肝组织活检的CHB患者肝组织8例和正常供体肝组织5例。检测入组患者血清ALB、ALT、AST、TB、DB、INR、HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平。流式细胞学检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中nlrp3的表达量及表达位置。实时荧光定量(quantitative real-time)PCR检测PBMC、肝组织中nlrp3、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA的表达,并对PBMC进行磁珠分选,应用RT-qPCR分别检测CD14+单核细胞、CD14-PBMC细胞群中nlrp3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA的表达;免疫组织化学染色法检测肝组织中nlrp3的表达以及与CD68共同表达。结果:1一般资料:各组研究对象年龄、性别比例具有可比性。ACLF组患者血清alt、ast、tb、db、inr水平明显高于chb组及健康对照组(pnlrp3的表达下降应用流式细胞学技术分析各组患者外周血单核细胞中nlrp3的表达水平(mfi),结果显示:aclf组nlrp3的表达量明显低于chb组和健康对照组(pnlrp3的表达亦低于健康对照组(pnlrp3的表达,结果显示:aclf中晚期患者明显低于aclf早期患者(pnlrp3的表达,结果显示:aclf组nlrp3mrna水平低于chb组和健康对照组(pnlrp3mrna的表达亦低于健康对照组(pnlrp3主要表达在cd14+cd16+单核细胞群nlrp3在单核细胞亚群中的表达:在cd14++cd16-单核细胞群和cd16++cd14-单核细胞群,aclf组、chb组、健康对照组中nlrp3的表达未见明显差异(p>0.05);在cd14+cd16+单核细胞群,aclf组、chb组均低于健康对照组(pnlrp3的降低最为明显,尤其是aclf中晚期患者。同时,应用cd14磁柱分离pbmc,分别检测cd14+单核细胞、cd14-pbmc中nlrp3mrna水平。aclf组、chb组cd14+单核细胞中nlrp3mrna水平明显低于健康对照组(pnlrp3mrna的表达未见明显差异(p>0.05)。4乙型肝炎病毒相关慢加急性肝功能衰竭组肝组织中nlrp3的表达升高免疫组织化学染色结果显示:aclf组肝组织中nlrp3的表达明显高于chb组(pnlrp3表达。nlrp3在汇管区与小叶内均有表达,以小叶内为主,cd68与nlrp3共染提示:nlrp3主要表达于肝小叶内kupffer细胞胞浆。rt-qpcr检测肝组织中nlrp3mrna的表达显示:aclf组nlrp3mrna的表达高于chb组和健康对照组(pnlrp3mRNA的表达亦高于健康对照组(P<0.01)。5乙型肝炎病毒相关慢加急性肝

关键词： nlrp3炎性体单核巨噬细胞肝功能衰竭肝炎固有免疫

nlrp3炎性体激活通过促进肺血管内皮间质化参与机械通气诱导肺纤维化过程的机制研究

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NLRP3炎性体激活通过促进肺血管内皮间质化参与机械通气诱导肺纤...

作者：吕洲上海交通大学

学位级别：硕士

目的:机械通气（Mechacical ventilation,MV）可引起肺部的纤维化病变。现已有研究表明,机械性牵拉导致的肺内皮细胞受损是呼吸机相关性肺损伤的重要机制之一。因此,本研究旨在探讨肺内皮细胞向间质细胞转化（Endothelial-mesenchymal t... 详细信息

目的:机械通气（Mechacical ventilation,MV）可引起肺部的纤维化病变。现已有研究表明,机械性牵拉导致的肺内皮细胞受损是呼吸机相关性肺损伤的重要机制之一。因此,本研究旨在探讨肺内皮细胞向间质细胞转化（Endothelial-mesenchymal transition,EndMT）是否参与了机械通气引起的肺纤维化,如果这一现象能够被证实,我们将进一步对机械牵拉导致EndMT的潜在机制进行探讨。内容和方法:动物实验选择ICR小鼠,小鼠全身麻醉后行气管插管并连接小动物呼吸机进行机械通气（VT=20ml/kg,2h）,通气结束麻醉复苏后不同时间点（3天、7天、14天）收取肺组织标本,肺组织切片HE（Hematoxylin and eosin）染色反映肺组织水肿,出血及肺组织病理学改变,Masson染色反映肺组织纤维化病变,免疫荧光双标记染色进行肺血管内皮细胞、间质细胞的定位,定性及半定量分析;肺组织抽提RNA或蛋白质检测肺组织内皮细胞标记物及间质细胞标记物表达的变化;肺组织中纤维化及炎症标记蛋白含量的变化用ELISA（Enzyme-linked immuno sorbent assay）方法检测;细胞实验选择原代培养小鼠肺血管内皮细胞（Mouse lung vascular endothelial cells,MLVECs）对在体实验进行验证,对MLVECs 行机械牵拉（Stretch=20%,Frequency=30/min,24h）,牵拉后 24h 收取细胞上清,用ELISA方法检测纤维化及炎性标记蛋白含量的变化;抽提细胞蛋白检测内皮细胞及间质细胞标记物表达的变化;免疫荧光双标染色显示内皮细胞及间质细胞标记物的定位表达含量的变化。主要结果:接受机械通气的小鼠肺组织内有大量胶原沉积,且羟脯氨酸和I型胶原的含量以及TGF-p的分泌在通气后3到14天呈持续性高表达。机械通气引起肺纤维化的同时,伴随着间质细胞标记物（α-平滑肌肌动蛋白[α-smooth muscle actin,α-SMA]和波状蛋白vimentin）表达的增多以及上皮细胞标记物（E-cadherin）和内皮细胞标记物（VE-cadherin和CD31）表达的降低。免疫荧光双标显示在某些肺血管内皮细胞上有α-SMA和CD31的共染区域,提示机械牵拉可诱导 EndMT 的发生。肺组织中 nlrp3（cysteine aspartuc acidspecific protease）和ASC（Appptosis-associated speck-like protein）mRNA 的表达的明显升高,caspase-1（NACHT-LRR-PYD-containing protein3）p10 和 IL-1β 蛋白含量的增多表明机械通气过程中伴有nlrp3炎性小体的激活。免疫荧光双标显示在巨噬细胞和血管内皮细胞中均可发现nlrp3表达的增多。离体实验中,对原代培养的MLVECs进行机械牵拉可同样能够导致nlrp3炎性小体的激活和EndMT的形成,行nlrp3基因敲低可明显逆转nlrp3的激活和EndMT的形成。结论:机械牵拉导致的nlrp3炎性小体的激活,可能参与了肺内皮细胞向间质转化以及机械通气导致肺纤维化的过程。

关键词：机械通气肺纤维化 EndMT nlrp3炎性体 MLVECs 机械牵拉

衢枳壳提取物对CCl_(4)诱导的肝纤维化小鼠肝脏炎症及NF-κB/nlrp3炎性体通路的影响

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中国中药杂志 2021年第6期46卷 1474-1479页

作者：王思为蓝天郑芳雷美康张峰衢州市人民医院浙江衢州324000 衢州海关技术中心浙江衢州324000

研究衢枳壳提取物(QAF)对四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝纤维化小鼠肝脏炎症的影响及其机制。将60只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法随机分为对照组(蒸馏水灌胃)、模型组(蒸馏水灌胃)、秋水仙碱组(Col,秋水仙碱2 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)... 详细信息

研究衢枳壳提取物(QAF)对四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝纤维化小鼠肝脏炎症的影响及其机制。将60只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法随机分为对照组(蒸馏水灌胃)、模型组(蒸馏水灌胃)、秋水仙碱组(Col,秋水仙碱2 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)、QAF低剂量组(QAF-L,QAF 100 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)和QAF高剂量组(QAF-H,QAF 300 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)。模型组和各给药组用1 mL·kg^(-1)CCl_(4)(CCl_(4)-橄榄油1∶4)腹腔注射,每周2次。给药和造模共6周。末次给药后16 h,处死小鼠,收集血清以及肝脏组织。检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,并观察小鼠肝功能情况;HE染色法观察各组小鼠肝组织病理学变化;F4/80免疫组化法观察各组小鼠肝脏炎症细胞浸润情况;采用RT-PCR法检测各组小鼠肝脏肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)^(-1)8和IL^(-1)βmRNA表达;采用Western blot法检测各组小鼠肝脏IκBα,p-IKKα/β,p-p65,nlrp3,caspase^(-1)和cleaved caspase^(-1)表达情况。结果显示,不同剂量QAF显著缓解肝损伤程度,并降低肝纤维化小鼠肝功能指标血清ALT和AST水平。免疫组化结果显示,QAF显著减少肝纤维化小鼠肝脏炎症细胞浸润。RT-PCR和Western blot结果显示,QAF显著降低肝纤维化小鼠肝组织TNF-α,IL^(-1)8和IL^(-1)β基因表达,并抑制肝脏IκBα蛋白降解,以及p-IKKα/β,p-p65,nlrp3和cleaved caspase^(-1)蛋白表达。综上所述,QAF具有改善CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化的作用,其机制可能与抑制NF-κB/nlrp3炎性体介导的炎症信号通路有关。

关键词：衢枳壳肝纤维化炎症 NF-κB nlrp3炎性体

人脐带间充质干细胞对2型糖尿病小鼠胰岛功能的影响及其对nlrp3炎性体的调节作用

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中华内科杂志 2023年第9期62卷 1077-1084页

作者：王杰尹雅琪程愈李冰苏婉露于松岩薛婧顾钰琳张海霞张瀶曦臧丽母义明解放军总医院第一医学中心内分泌科北京100853 首都医科大学附属北京朝阳医院内分泌科北京100020

目的观察人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对2型糖尿病(T2DM)小鼠胰岛功能的影响及其对NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nlrp3)炎性体和自噬过程的调节作用。方法实验研究。选取20只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为正常对照组(n=5)... 详细信息

目的观察人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对2型糖尿病(T2DM)小鼠胰岛功能的影响及其对NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nlrp3)炎性体和自噬过程的调节作用。方法实验研究。选取20只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为正常对照组(n=5)和高脂喂养建模组(n=15);T2DM建模成功的小鼠进一步分为糖尿病组(n=7)和UC-MSCs治疗组(n=7)。UC-MSCs治疗组每周给予1次UC-MSCs(1×106/0.2 ml磷酸盐缓冲液)尾静脉输注治疗,共治疗4周;糖尿病组注射等量生理盐水,正常对照组不予处理。治疗结束后1周各组小鼠行腹腔糖耐量和胰岛素耐量试验检测糖耐量和胰岛素敏感性变化;采用免疫荧光染色法观察胰岛结构改变并检测胰岛中白细胞介素1β(IL-1β)和胰十二指肠同源框因子1(PDX-1)的表达。体外用脂多糖和三磷酸腺苷对小鼠骨髓诱导的原代巨噬细胞进行刺激(处理组)后,与UC-MSCs进行Transwell共培养实验24 h(治疗组),采用酶联免疫吸附法检测各组上清液中IL-1β的分泌水平,采用免疫荧光染色检测nlrp3炎性体和自噬相关蛋白的表达。统计学分析采用单因素方差分析及重复测量方差分析。结果体内实验表明,与糖尿病组相比,UC-MSCs治疗组小鼠胰岛结构部分修复,糖耐量和胰岛素敏感性均改善(均P体外实验表明,相较于处理组,治疗组中巨噬细胞分泌的IL-1β水平降低[(85.9±74.6)比(883.4±446.2)pg/ml,P=0.001],共聚焦显微镜下观察nlrp3炎性体的表达降低,自噬底物蛋白P62表达降低,微管相关蛋白轻链β3(LC3B)、自噬效应蛋白Beclin-1表达增高。结论UC-MSCs可降低T2DM小鼠胰岛炎症水平,保护胰岛功能,可能与UC-MSCs抑制巨噬细胞nlrp3炎性体的活性,增强自噬水平有关。

关键词：糖尿病,2型干细胞糖尿病,实验性自噬胰岛功能 nlrp3炎性体