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基于nlrp3/caspase-1通路探讨薏苡仁多糖对溃疡性结肠炎体外炎症模型的干预作用及机制

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重庆医科大学学报 2023年第11期48卷 1323-1330页

作者：陈莉娟李彦龙杨维建李宝瑜苟玉琴张早育李莹吴航甘肃省疾病预防控制中心社区卫生与慢性非传染性疾病防制科兰州730010 甘肃省中医院脾胃病诊疗中心兰州730050 甘肃中医药大学中西医结合学院兰州730000

目的:从炎症理论角度出发,探讨薏苡仁多糖(Coixan)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)体外炎症模型的干预作用及其机制。方法:体外培养NCM460细胞,采用不同剂量(0、2.5、5、10、20和40μg/mL)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导NCM460细胞,筛选出最佳诱导剂量(20μg/mL);用不同浓度(0、5、10、20、40和80μg/mL)的Coixan诱导NCM460,筛选出最佳促增殖浓度(10、20、40μg/mL)。实验随机设为空白组、模型组(LPS诱导)、LPS+Coixan低、中、高剂量(10、20、40μmol/L)组,LPS+柳氮磺吡啶(sulfasalazine,SASP)(200μg/mL)组,除空白组外用LPS(20μg/mL)刺激48 h建立UC体外细胞炎症模型后,分别以薏苡仁多糖及SASP进行48 h干预治疗后,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;免疫荧光检测焦亡相关蛋白caspase-1荧光的表达量;采用qRT-PCR技术检测各组NCM460中nlrp3/caspase-1通路中焦亡相关nlrp3、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达水平的影响;Western blot技术检测各组焦亡相关nlrp3、caspase-1、IL-1β蛋白表达水平的影响。结果:与0μg/mL比较(20μg/mL)LPS诱导48 h对NCM460细胞生长抑制较为适中(Pnlrp3、caspase-1β、IL-1β蛋白和nlrp3、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著升高(Pcaspase-1表达水平明显下调(Pnlrp3、caspase-1蛋白和基因表达明显降低(Pnlrp3,caspase-1,IL-1β)表达水平明显下调(Pnlrp3、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β的表达水平,从而抑制人结肠上皮细胞的细胞焦亡,发挥人结肠上皮细胞保护作用。

关键词：薏苡仁多糖溃疡性结肠炎细胞炎症模型 nlrp3/caspase-1 细胞焦亡

基于nlrp3/caspase-1途径探讨不同时间窗电针对缺血性脑卒中大鼠认知功能的影响

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基于NLRP3/Caspase-1途径探讨不同时间窗电针对缺血性脑卒中大鼠...

作者：易婉莎福建中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察不同时间窗电针对缺血性脑卒中大鼠的神经功能评分、体质量变化、脑缺血面积、患侧海马病理损伤、患侧海马组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucl eotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLR... 详细信息

目的:观察不同时间窗电针对缺血性脑卒中大鼠的神经功能评分、体质量变化、脑缺血面积、患侧海马病理损伤、患侧海马组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucl eotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,nlrp3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Cysteine-requiring aspartate protease-1,caspase-1)、白介素(Nterleuki n,IL)1β、IL-18 m RNA相对表达量与蛋白表达量,基于nlrp3/caspase-1途径探讨不同时间窗电针对缺血性脑卒中认知功能的影响。方法:将60只体质量为(260±20)g SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,电针组分为1 h电针组、6 h电针组、24 h电针组三个亚组,每组12只。模型组和电针组参考Longa改良线栓法进行大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型制备。假手术组钝性分离血管后即缝合,其余操作与模型组相同。电针组采用电针神庭穴、百会穴进行干预,1 h电针组于造模后1 h(拔栓前)进行首次电针,6 h电针组于造模后6 h进行首次电针,24 h电针组于造模后24 h进行首次电针,每天1次,每次20 min,连续7天。模型组和假手术组行与电针组同等条件的抓取束缚后回笼,不予治疗。在术后第1天、第3天、第7天,进行神经行为学评分和体质量记录;术后的第3、4、5、6天进行水迷宫测试;术后第7天电针干预结束后每组随机选取3只大鼠进行2,3,5—氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyte trazoliumchloride,TTC)染色观察脑缺血状况;每组随机选取3只进行HE(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察海马组织病理改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Quantitative PCR,RT-q PCR)检测患侧海马组织中nlrp3、caspase-1、IL-1β、IL-18 m RNA表达量;免疫蛋白印迹法(Western blot,WB)检测患侧海马中nlrp3、caspase-1、IL-1β、IL-18的蛋白表达量。结果:1.神经功能缺损评分:可见假手术组未出现神经功能缺损,电针组和模型组术后神经功能缺损评分均明显高于假手术组(P1、3天,各电针组和模型组之间评分差异无统计学意义,术后第7天各电针组较模型组评分明显改善(P1天,模型组与24 h电针组体质量明显低于假手术组(P3天,模型组、各电针组体质量明显低于假手术组(P1 h、6 h电针组体质量显著高于模型组(P1天相比,模型组与24 h组体质量显著下降(P1天相比,模型组体质量下降(P1 h电针组、6 h电针组体质量增加(P3.大鼠逃避潜伏期变化:术后第3天,模型组、24 h电针组逃避潜伏期显著高于假手术组(P1 h电针组逃避潜伏期显著低于24h电针组(P1 h电针组nlrp3、caspase-1、IL-1β、IL-18 m RNA相对表达量:与假手术组相比,模型组nlrp3、caspase-1、IL

关键词： nlrp3/caspase-1 MCAO 认知障碍时间窗电针

基于焦亡通路nlrp3/caspase-1探讨降脂消斑片防治动脉粥样硬化机制

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中医临床研究 2022年第1期14卷 1-6页

作者：唐聪聪冯君冉俊宁程丑夫刘建和湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的:观察降脂消斑片对高脂饮食(High-Fat Diet,HFD)诱导的动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)小鼠的白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)蛋白表达的影响及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-Binding Oligomerization Domain-like Receptor Protein 3,nlrp3)/半胱天冬酶1(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase 1,caspase-1)通路活化的影响,探讨降脂消斑片抑制细胞焦亡的作用机制,为防治AS提供新思路。方法:将实验小鼠分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、降脂消斑片给药组(中、高、低剂量组)。除空白组外,其余5组均通过HFD建立小鼠AS模型,6周后检测小鼠主动脉建模情况,预防性给与相应处理因素6周,12周后采用全自动生化仪检测血清总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、三酰甘油(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High-Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)含量;采用苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察主动脉、肝脏组织形态学改变;采用免疫组化检测主动脉中nlrp3的表达;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测主动脉组织中nlrp3、caspase-1的含量;采用酶联免疫吸附剂测定(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测血清中IL-1β、IL-18、TNF-α的释放。结果:与空白组相比,模型组小鼠AS斑块面积增大、肝脏细胞脂质沉积增多(P nlrp3、caspase-1的释放增加(P nlrp3、caspase-1蛋白表达明显减少(P nlrp3/caspase-1焦亡通路活化从而改善HFD诱导的AS小鼠主动脉斑块,为健脾化痰、活血化瘀法防治AS提供了新的治疗思路。

关键词：动脉粥样硬化降脂消斑片细胞焦亡 nlrp3/caspase-1 信号通路

基于nlrp3/caspase-1通路探讨PM_(2.5)短期暴露对大鼠肺损伤机制

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毒理学杂志 2023年第6期37卷 507-513页

作者：黄小溪田亚绒孙小宁苏德奇新疆医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室新疆乌鲁木齐830000 延安大学咸阳医院陕西咸阳712000

目的采用气管滴注法对大鼠进行PM_(2.5)短期暴露,研究其对不同性别大鼠的肺损伤及其机制。方法48只SD大鼠随机分为生理盐水对照组和PM_(2.5)高、中、低剂量(13.5、4.5和1.5 mg/kg)组,气管滴注连续7 d后解剖,观察肺大体变化情况;苏木素-... 详细信息

目的采用气管滴注法对大鼠进行PM_(2.5)短期暴露,研究其对不同性别大鼠的肺损伤及其机制。方法48只SD大鼠随机分为生理盐水对照组和PM_(2.5)高、中、低剂量(13.5、4.5和1.5 mg/kg)组,气管滴注连续7 d后解剖,观察肺大体变化情况;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;支气管肺泡灌洗检查(BALF)肺上皮损伤指标[乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(AKP)]变化情况;ELISA检测肺组织IL-1β和IL-18的表达水平;RT-PCR和Western blot检测nlrp3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,各剂量组均出现不同程度的大片黑色斑块或者散在黑色斑点,且病变处质感相对较硬,病变程度呈现出剂量依赖性。HE染色发现,随着染毒剂量增加,肺泡壁逐渐增厚,中和高剂量组出现大面积的肺泡实变,且雌鼠病变较雄鼠严重。与对照组相比,雌鼠中和高剂量组、雄鼠高剂量组AKP及LDH含量均升高(F_(AKP(雌))=8.193、F_(AKP(雄))=9.121、F_(LDH(雌))=8.193、F_(AKP(雄))=9.121,P3、F_(IL-1β(雄))=12.127、F_(IL-18(雌))=14.195、F_(IL-18(雄))=6.474,Pnlrp3、caspase-1 mRNA及雄鼠高剂量组caspase-1 mRNA表达水平上调(F_(nlrp3 mRNA(雌))=3.131、F_(caspase-1 mRNA(雌))=6.072、F_(caspase-1 mRNA(雄))=3.033,Pnlrp3蛋白均上调(F_(nlrp3蛋白(雌))=7.810、F_(nlrp3蛋白(雄))=3.490,Pcaspase-1蛋白表达均出现上调(F_(caspase-1蛋白(雌))=12.447、F_(caspase-1蛋白(雄))=3.137,Pcaspase-1 mRNA表达水平较低(t=-2.349,Pnlrp3/caspase-1信号通路有关,并且这些损伤可能具有性别差异性,表现为雌鼠损伤比雄鼠严重。

关键词：细颗粒物气管滴注炎症反应急性暴露 nlrp3/caspase-1

桑色素调节nlrp3/caspase-1通路改善大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的研究

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四川大学学报（医学版） 2021年第2期52卷 229-234页

作者：孙雅军张艳芳许惠敏马永涛李春聂春红赵敏开封市儿童医院内分泌科开封475000 开封市儿童医院PICU 开封475000 开封市儿童医院急诊科开封475000 开封市儿童医院化验室开封475000 河南大学附属淮河医院呼吸与危重症医学科开封475000

目的研究桑色素调节Nod样受体(NLR)家族中含有pyrin结构域的蛋白3(nlrp3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路对大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的影响。方法将大鼠随机分为6组:对照组,实验性自身免疫性甲状腺炎组(EAT),桑色素低、... 详细信息

目的研究桑色素调节Nod样受体(NLR)家族中含有pyrin结构域的蛋白3(nlrp3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路对大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的影响。方法将大鼠随机分为6组:对照组,实验性自身免疫性甲状腺炎组(EAT),桑色素低、中、高剂量组(建模后每日灌胃桑色素50、100、200 mg/kg,连续6周)和雷公藤多苷组(LGT,建模后每日灌胃雷公藤多苷6.25 mg/kg,连续6周)。除对照组以外,其余各组均采用皮下注射0.1 mL含猪甲状腺球蛋白的不完全弗氏佐剂建立实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠模型,放射免疫分析法检测血清中甲状腺球蛋白(Tg-Ab)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)、三碘甲腺原氨酸(T3)和四碘甲腺原氨酸(T4)水平;逆转录-聚合酶链反应检测白细胞介素(IL)-17、IL-4、γ干扰素(INF-γ)的mRNA水平;试剂盒检测血清中蛋白质羰基含量、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平、丙二醛(MDA)活力;蛋白免疫印迹检测nlrp3、凋亡z相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1蛋白表达。结果与EAT组相比,桑色素低、中、高剂量组和LGT组血清中TPO-Ab、Tg-Ab、T3和T4水平降低(Pnlrp3、ASC、caspase-1蛋白水平降低(Pnlrp3/caspase-1通路能改善大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎。

关键词：桑色素实验性自身免疫性甲状腺炎炎症 nlrp3/caspase-1

程氏蠲痹汤通过下调nlrp3/caspase-1信号通路抑制TNF-α诱导的滑膜成纤维细胞焦亡

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湖北中医药大学学报 2023年第4期25卷 10-14页

作者：孙广瀚朱俊许霞万磊南淑玲王玉凤赵黎程卉王坤方妍妍孙朗安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学科研技术中心安徽合肥230021

目的观察程氏蠲痹汤(JBT)对TNF-α诱导的滑膜成纤维细胞(FLS)焦亡的抑制作用及其分子机制。方法以FLS为研究对象,按CCK8实验结果将其分为A:FLS组;B:TNF-α+FLS组;C:TNF-α+FLS+JBT组(最佳程氏蠲痹汤剂量)。电镜观察细胞形态,使用乳酸... 详细信息

目的观察程氏蠲痹汤(JBT)对TNF-α诱导的滑膜成纤维细胞(FLS)焦亡的抑制作用及其分子机制。方法以FLS为研究对象,按CCK8实验结果将其分为A:FLS组;B:TNF-α+FLS组;C:TNF-α+FLS+JBT组(最佳程氏蠲痹汤剂量)。电镜观察细胞形态,使用乳酸脱氢酶(LDH)释放测定各组质膜孔隙形成的情况,采用RT-qPCR、Western Blot(WB)实验观察各组细胞中细胞标志基因、蛋白的表达,CO-IP检测nlrp3和caspase-1相互作用。结果 CCK8实验结果发现JBT冻干粉浓度在0.5 mg/mL,培养48 h效果最佳。透射电镜显示总体病变程度B组0.05)。RT-qPCR及WB结果显示,A组和C组、B组相比,nlrp3、caspase-1、IL-18、IL-1β mRNA及蛋白表达上调(Pnlrp3、caspase-1、IL-18、IL-1βmRNA及蛋白的表达下调(Pnlrp3和caspase-1的结合。结论程氏蠲痹汤通过下调nlrp3/caspase-1细胞焦亡信号通路而抑制TNF-α诱导的滑膜成纤维细胞焦亡。

关键词：程氏蠲痹汤滑膜成纤维细胞细胞焦亡 nlrp3/caspase-1

清化肠饮对溃疡性结肠炎大鼠nlrp3/caspase-1细胞焦亡通路的影响

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实用中医内科杂志 2023年第11期37卷 86-89页

作者：田琳王鑫黄晓峰郑泽宇黄铭涵福建中医药大学附属第二人民医院福建福州350003

目的探讨清化肠饮对溃疡性结肠炎模型大鼠nlrp3/caspase-1细胞焦亡通路相关分子的影响。方法将SPF级Wistar大鼠分为空白组和造模组,造模组采用“高脂高糖饮食+免疫”法构建湿热证UC大鼠模型,共持续20 d。造模成功后,造模组随机分为模... 详细信息

目的探讨清化肠饮对溃疡性结肠炎模型大鼠nlrp3/caspase-1细胞焦亡通路相关分子的影响。方法将SPF级Wistar大鼠分为空白组和造模组,造模组采用“高脂高糖饮食+免疫”法构建湿热证UC大鼠模型,共持续20 d。造模成功后,造模组随机分为模型组、清化肠饮组、SASP组,每组8只。各组给予相应处理21 d后,麻醉采血,取结肠组织后,分别运用ELISA、qReal-time PCR法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-18(IL-18)的含量及肠黏膜组织nlrp3、caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组血清中IL-1β、IL-6、IL-18的含量及nlrp3、caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达水平均显著升高(Pnlrp3、caspase-1、ASC、GSDMD mRNA表达水平均显著降低(Pnlrp3/caspase-1信号通路,阻断该信号通路相关分子的合成、激活,从而抑制UC大鼠肠道黏膜细胞焦亡程序,改善UC大鼠肠道黏膜损伤。

关键词：清化肠饮溃疡性结肠炎 nlrp3/caspase-1 细胞焦亡大鼠

电针对急性脑梗死nlrp3/caspase-1信号通路蛋白表达的研究

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电针对急性脑梗死NLRP3/caspase-1信号通路蛋白表达的研究

作者：曹冰倩广州中医药大学

学位级别：硕士

脑梗死已成为全球第二大死因,危害人类生命健康的主要致死、致残原因,严重危害人类生命健康。目前,药物、介入治疗急性脑梗死（Acute Cerebral Ischemia,ACI）受治疗时间窗及临床应用转化限制,所以迫切需要寻找有效的治疗策略,通过多靶... 详细信息

脑梗死已成为全球第二大死因,危害人类生命健康的主要致死、致残原因,严重危害人类生命健康。目前,药物、介入治疗急性脑梗死（Acute Cerebral Ischemia,ACI）受治疗时间窗及临床应用转化限制,所以迫切需要寻找有效的治疗策略,通过多靶点、多方位的综合治疗促进神经功能恢复,减轻社会和家庭的脑卒中负担。研究证实细胞因子介导的炎症反应是ACI患者神经功能缺损的重要原因之一,诱导细胞焦亡的经典炎症小体在激活后也会产生一系列的炎症反应,通过正负反馈的调节机制进一步释放出的大量炎症介质,加重ACI患者脑损伤,影响后期的神经功能修复。其中,依赖nlrp3/caspase-1信号通路诱导的细胞焦亡已证实与缺血性卒中患者脑损伤关系密切。我们的前期研究工作表明,电针能有效地干预炎症反应,减少ACI后遗症,促进神经功能修复。新近研究发现脑缺血局部梗死灶继发的海马、丘脑、延髓、脊髓等远隔部位的损伤会增加致死、致残率,阻碍神经功能康复。那么电针能否通过干预nlrp3/caspase-1信号传导通路相关蛋白表达,减轻脑梗死远隔部位损害,促进神经修复?因此本课题基于nlrp3/caspase-1信号通路诱导的小胶质细胞焦亡探讨电针对脑梗死远隔损害的干预作用。目的:1.基于细胞焦亡的炎症通路,观察电针对ACI患者NIHSS、FMA、MBI及血清caspase-1、IL-1 β等蛋白表达水平的影响,证实电针能抑制ACI后细胞焦亡介导的炎症反应。2.从小胶质细胞焦亡nlrp3/caspase-1的信号通路角度,探讨电针对MCAO大鼠远隔损害的作用,揭示电针治疗ACI远隔损害的分子机制,为电针的临床应用研究提供科学依据。方法:1.临床研究:选取2018年04月至2019年01月佛山市中医院神经内科住院部符合纳入标准的ACI患者66例,按随机数字表分为两组,治疗组33例（脱落3例）,对照组33例（脱落4例）。另选取健康体检中心的健康人30例作同期参考值测定。对照组予改善循环、抗血小板聚集、调脂稳斑、康复等常规治疗,治疗组在对照组的基础上加用电针治疗,观察期为2周。观察并比较两组治疗前、后神经功能NIHSS、FMA、MBI评分变化,测定患者血清caspase-1、IL-1 β的表达。2.实验研究:取雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠81只,10～12周龄,体重220～250 g。随机分为3组:假手术组（Sham）、模型组（MCAO）和电针组（EA）,每组27只,每组再进一步分为1d、7d、14d共三个亚组。Sham组仅作颈部切开,暴露颈动脉后缝合,不作电针治疗。MCAO组采用线栓法制备大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,1.5h后拔线栓再灌注,治疗时固定于实验木板上20 min,不作电针治疗。EA组同MCAO一样,但造模清醒后每天给予电针治疗20min。分别于造模后第1d、7d、14d进行神经功能评分,TTC染色检测脑梗塞面积、Western blot检测患侧与健侧部位海马nlrp3、IL-1β蛋白表达,免疫组织化学染色法检测患侧与健侧部位海马nlrp3、caspase-1表达。结果:1.临床部分本研究共纳入66例急性脑梗死患者病例,随机数字表分为治疗组与对照组,各33例,其中治疗组脱落3例,对照组脱落4例。两组在基线比较上无明显差异,具有可比性。另选择我院健康体检中心于同期就诊,且年龄性别基线无差异的健康体检者30例。（1）临床观察结果显示,治疗组与对照组在治疗前后NIHSS、FMA、MBI评分的组内比较中,差异具有统计学意义。对照组常规治疗能显著改善患者简单化测评的神经功能缺损、运动功能障碍及日常生活活动能力。干预后,治疗组在NIHSS、FMA评分的改善上优于对照组,电针治疗能有效改善ACI患者神经功能缺损、运动功能障碍。但是干预后的治疗组与对照组在MBI评分无显著性差异,电针对日常生活活动能力的改善效果在短期内不明显,电针可能需要长疗程的叠加累积效应。（2）实验室指标结果显示,脑梗死组血清caspase-1与IL-1 β浓度显著高于健康对照组,提示ACI患者血清中炎症介质caspase-1、IL-1 β浓度明显高于正常。治疗组与对照组均能显著下调炎症介质caspase-1与IL-1 β的表达。干预后,治疗组血清IL-1 β显著低于对照组,提示电针能降低ACI后炎症因子IL-1 β表达。电针能通过下调炎症介质的表达来促进神经功能的修复,改善神经功能缺损及运动功能障碍。2.实验部分（1）神经功能缺损评分EA组在7d、14d的神经功能评分低于MCAO组,差异有统计学意义。提示电针能改善7d、14d的MCAO大鼠神经功能缺损。（2）TTC染色MCAO组与EA组的梗死体积均在1d达高值,

关键词：急性脑梗死电针细胞焦亡 nlrp3/caspase-1 远隔损害

视网膜小胶质细胞P2X7-nlrp3/caspase-1通路在脉络膜新生血管中的作用机制

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视网膜小胶质细胞P2X7-NLRP3/Caspase-1通路在脉络膜新生血管中的...

作者：许阿敏武汉大学

学位级别：硕士

目的:研究C57BL/6J小鼠激光诱导脉络膜新生血管(CNV)形成过程中CD11b、P2X7、nlrp3/caspase-1炎症小体和IL-1β的变化,探讨视网膜小胶质细胞通过P2X7-nlrp3/caspase-1炎症小体通路介导的在CNV发生发展中的作用机制,为湿性AMD新的防治方... 详细信息

目的:研究C57BL/6J小鼠激光诱导脉络膜新生血管(CNV)形成过程中CD11b、P2X7、nlrp3/caspase-1炎症小体和IL-1β的变化,探讨视网膜小胶质细胞通过P2X7-nlrp3/caspase-1炎症小体通路介导的在CNV发生发展中的作用机制,为湿性AMD新的防治方法提供科学依据。方法:40只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组和CNV激光模型组。采用氪红激光照射(激光参数:波长647nm,能量200mW,光斑直径80um,照射时间100ms)视网膜,每只眼围绕视盘在其周围距离1个视盘直径的血管间光凝5个点。实验各组于激光照射后第4天取材,应用眼底荧光素血管造影(FFA)和光相干断层扫描(OCT)一体机以及苏木精-伊红染色(HE)观察激光照射处CNV是否形成;应用免疫荧光检测视网膜冰冻切片P2X7和nlrp3/caspase-1炎症小体和IL-1β的表达情况;Western Blot检测CD11b、P2X7、nlrp3炎症小体、caspase-1和IL-1β蛋白含量的表达;实时荧光定量PCR检测CD11b、P2X7、nlrp3炎症小体、caspase-1和IL-1β的mRNA含量的表达情况。结果:FFA检查显示:CNV模型组激光斑处早期呈现强荧光改变,晚期荧光素渗漏增强,表明CNV生成;正常组对照组无明显荧光素渗漏。HE染色显示:病灶处局部脉络膜破损,外层视网膜各层细胞排列紊乱视网膜水肿隆起,Bruch膜和RPE层破坏,光凝区可见巨噬细胞和RPE细胞,新生血管形成;正常对照组视网膜各层结构排列清晰整齐。视网膜组织免疫荧光显示:激光斑处小胶质细胞胞体增大,呈阿米巴状;激光诱导损伤的第4天,激光斑处可见P2X7、nlrp3炎症小体、caspase-1和IL-1β抗体所标记的阳性细胞聚集。与正常对照组相比,应用实时荧光定量PCR所检测激光诱发CNV模型组CD11b、P2X7、nlrp3炎症小体、caspase-1和IL-1β含量明显上升(P11b、P2X7、nlrp3炎症小体、caspase-1和IL-1β在激光损伤后的蛋白含量较正常组的蛋白含量明显上升(Pnlrp3/caspase-1炎症小体通路的作用机制。

关键词：脉络膜新生血管(CNV) 小胶质细胞 P2X7 nlrp3/caspase-1