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膝关节炎慢性痛老龄大鼠术后神经认知障碍时海马RIPK1与nlrP3炎症小体的关系

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中华麻醉学杂志 2024年第3期44卷 307-312页

作者：于丽丽黄冬冬宋盼盼李春雷孙秀伟李晨晨赵娟常玉林沧州市中心医院麻醉科沧州061000 沧州医学高等专科学校医学诊断教研室沧州061001 河北医科大学教学实验中心石家庄050017

目的评价膝关节炎慢性痛老龄大鼠术后神经认知障碍时海马受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nlrP3)炎症小体的关系。方法健康雄性SD大鼠64只,18月龄,体质量500~550 g,采用随机数字表法分为4组(n=16):膝关... 详细信息

目的评价膝关节炎慢性痛老龄大鼠术后神经认知障碍时海马受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nlrP3)炎症小体的关系。方法健康雄性SD大鼠64只,18月龄,体质量500~550 g,采用随机数字表法分为4组(n=16):膝关节炎慢性痛组(P组)、膝关节炎慢性痛+手术组(PS组)、RIPK1抑制剂Necrostatin-1+膝关节炎慢性痛+手术组(NPS组)和二甲基亚砜(DMSO)+膝关节炎慢性痛+手术组(DPS组)。采用左膝关节腔内注射碘乙酸盐(MIA)1 mg的方法制备膝关节炎模型并于12周后行七氟烷麻醉下剖腹探查术。NPS组和DPS组分别于术前1 h腹腔注射Necrostatin-16.25 mg/kg或等剂量DMSO。于关节腔内注射MIA前1周、注射后6和12周时测定热痛阈。于术后7 d时,采用Morris水迷宫实验评估认知功能;取海马组织,HE染色后光镜下观察病理学结果,采用Western blot法测定RIPK1、磷酸化RIPK1(p-RIPK1)、nlrP3、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cl-caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达,采用ELISA法测定IL-1β和IL-18的含量。结果4组大鼠MIA注射后6和12周时热痛阈较注射前降低(P热痛阈比较差异无统计学意义(P>0.05)。与P组比较,PS组、DPS组和NPS组逃避潜伏期延长,原平台象限停留时间缩短,穿越原平台位置次数减少,海马组织RIPK1、p-RIPK1、nlrP3、cl-caspase-1和ASC表达上调,IL-1β和IL-18含量升高(PnlrP3、cl-caspase-1和ASC表达下调,IL-1β和IL-18含量降低(PnlrP3炎症小体,诱发神经炎症,可能参与术后神经认知障碍的发生机制。

关键词：骨关节炎,膝老年人术后认知并发症受体作用蛋白丝氨酸苏氨酸激酶类 nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3

组织蛋白酶B/nlrP3通路对LPS诱导巨噬细胞M1/M2极化的影响

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中国免疫学杂志 2024年

作者：王宜博代玉婷蔡江晓李忠林秦伟伟孙立新韩伟潍坊医学院麻醉学院青岛市市立医院麻醉科青岛市市立医院呼吸与危重症科

目的评价组织蛋白酶B（CTSB）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（nlrP3）通路对LPS诱导巨噬细胞极化的影响。方法体外培养生长状态良好的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞系，根据随机数字表法分为3组（n=6），对照组（C组），LPS组（L组），... 详细信息

目的评价组织蛋白酶B（CTSB）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（nlrP3）通路对LPS诱导巨噬细胞极化的影响。方法体外培养生长状态良好的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞系，根据随机数字表法分为3组（n=6），对照组（C组），LPS组（L组），LPS+CA074-me（CTSB抑制剂）组（B组）。C组常规培养24h，L组加入LPS浓度为1μg/ml的培养基培养24h，B组在LPS诱导前予以CTSB抑制剂CA074-me30μmol/L预处理1h后在含LPS1μg/ml的培养基中共培养24h。24小时后通过显微镜观察细胞形态变化，通过采用ELISA法测定上清液IL-1β、IL-18的浓度，Westernblot法检测细胞中组织蛋白酶B前体（pro-CTSB）、成熟组织蛋白酶B（mature-CTSB）、nlrP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）的表达，采用qRT-PCR法检测细胞CD32、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg-1）、CD206 mRNA表达水平，流式细胞术检测M1型巨噬细胞表面标记物CD86和M2型巨噬细胞表面标记物CD206阳性表达率。结果与C组相比，L组和B组细胞形态均改变，细胞变大并出现伪足，细胞上清液中IL-1β、IL-18浓度均上升，pro-CTSB、mature-CTSB、nlrP3、ASC和caspase-1表达升高，CD32、iNOS mRNA表达上调，CD86阳性率、CD206阳性率均上升（P＜0.01），B组Arg-1、CD206 mRNA表达上调（P＜0.01）；与L组相比，B组细胞伪足减少，形态更接近C组，细胞上清液中IL-1β、IL-18浓度下降，mature-CTSB、nlrP3、ASC和caspase-1表达降低，CD32、iNOS mRNA及CD86阳性率下降，pro-CTSB表达、Arg-1、CD206 mRNA表达及CD206阳性率升高（P＜0.01）。结论抑制CTSB/nlrP3通路能够减轻炎症反应，减少LPS诱导RAW264.7细胞向M1型巨噬细胞极化，促进其向M2型巨噬细胞极化。

关键词：组织蛋白酶B nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3 脂多糖类巨噬细胞

nlrP3炎症小体在姜黄素减轻七氟烷麻醉大鼠术后认知功能障碍中的作用

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中华麻醉学杂志 2024年第2期44卷 172-175页

作者：张江玲杨亚利杜献慧张继兵王广治河南省人民医院麻醉与围术期医学科、郑州大学人民医院郑州450000

目的评价NOD样受体蛋白3(nlrP3)炎症小体在姜黄素减轻七氟烷麻醉大鼠术后认知功能障碍中的作用。方法 SPF级健康雄性SD大鼠40只,17~18月龄,体质量580~600 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、术后认知功能障碍组(P组)、姜黄... 详细信息

目的评价NOD样受体蛋白3(nlrP3)炎症小体在姜黄素减轻七氟烷麻醉大鼠术后认知功能障碍中的作用。方法 SPF级健康雄性SD大鼠40只,17~18月龄,体质量580~600 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、术后认知功能障碍组(P组)、姜黄素组(CU组)和姜黄素+nlrP3炎症小体激活剂组(CN组)。采用吸入1.5%七氟烷探查腹腔的方法制备大鼠术后认知功能障碍模型。CU组和CN组大鼠姜黄素混悬液300 mg/kg灌胃,CN组大鼠尼日菌素钠盐5 mg/kg同时灌胃,1次/d,连续6 d,C组和P组大鼠等量生理盐水灌胃。随后采用水迷宫实验测定大鼠穿越原平台位置次数和目标象限停留时间,HE染色法观察海马组织病理学结果,TUNEL染色法检测神经元凋亡情况,Western blot法检测nlrP3、Bcl-2和Bax表达。结果与C组比较,P组大鼠穿越原平台位置次数减少,目标象限停留时间缩短,神经元凋亡率升高,nlrP3和Bax表达上调,Bcl-2表达下调(PnlrP3和Bax表达下调,Bcl-2表达上调(PnlrP3和Bax表达上调,Bcl-2表达下调(PnlrP3炎症小体参与了姜黄素减轻七氟烷麻醉大鼠术后认知功能障碍的过程。

关键词： nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3 姜黄素七氟醚认知障碍

漆黄素抑制小胶质细胞nlrP3炎症小体活化缓解脓毒症后认知功能损害的研究

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天津医药 2024年

作者：廖忠廖伟健赖国利文茵苏志威曾举浩丁洪光龙南市第一人民医院急诊科南方医科大学附属广东省人民医院(广东省医学科学院)重症医学科南方医科大学附属广东省人民医院(广东省医学科学院)急诊科

目的探讨漆黄素抑制小胶质细胞NOD样受体家族蛋白3（nlrP3）炎症小体活化缓解脓毒症后认知功能损害的机制。方法选用C57BL/6小鼠，用盲肠结扎穿孔法构建脓毒症模型。分组包括：假手术组、脓毒症组、脓毒症+胱天蛋白酶（caspase）-1敲... 详细信息

目的探讨漆黄素抑制小胶质细胞NOD样受体家族蛋白3（nlrP3）炎症小体活化缓解脓毒症后认知功能损害的机制。方法选用C57BL/6小鼠，用盲肠结扎穿孔法构建脓毒症模型。分组包括：假手术组、脓毒症组、脓毒症+胱天蛋白酶（caspase）-1敲除组(脓毒症+Cas-1-/-组)、脓毒症+漆黄素组。用伊文思蓝检测血脑屏障的通透性；Morris水迷宫评估小鼠的认知功能。Western blot和免疫荧光双染检测脑组织和小胶质细胞nlrP3炎症小体相关蛋白caspase-1、GSDMD蛋白N端片段（GSDMD-N）、白细胞介素（IL）-1β和IL-18，线粒体自噬相关蛋白Pink1、Parkin和微管相关蛋白轻链3（LC3）-Ⅱ的表达。结果与假手术组相比，脓毒症组caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18的表达水平显著升高（P3-Ⅱ的表达水平明显高于脓毒症组（PnlrP3炎症小体活化，进而缓解脓毒症后中枢炎症反应和认知功能损害。

关键词：脓毒症认知功能障碍线粒体自噬 nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3 漆黄素

nlrP3炎性小体在急性胰腺炎中作用的研究进展

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中华普通外科学文献（电子版） 2024年第4期18卷 300-304页

作者：李嘉兴孙乙文李文星山西医科大学第二医院普通外科太原030001

急性胰腺炎是一种与炎性反应密切相关的消化系统疾病。NOD样受体蛋白3(nlrP3)炎性小体是一种蛋白质复合物,在炎症风暴发生、炎性状态的调节中起着至关重要的作用,其通过激活氧化应激、调节肠道菌群和驱动细胞焦亡等,影响急性胰腺炎的发... 详细信息

急性胰腺炎是一种与炎性反应密切相关的消化系统疾病。NOD样受体蛋白3(nlrP3)炎性小体是一种蛋白质复合物,在炎症风暴发生、炎性状态的调节中起着至关重要的作用,其通过激活氧化应激、调节肠道菌群和驱动细胞焦亡等,影响急性胰腺炎的发生、发展和结局转归,有望成为急性胰腺炎诊断的生物标志物及治疗新靶点。现就nlrP3炎性小体与急性胰腺炎的关系以及其相互影响机制的研究现状作一综述。

关键词： nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3 nlrP3炎性小体急性胰腺炎氧化应激肠道菌群细胞焦亡

乙型肝炎病毒X蛋白通过下调微RNA⁃223靶向nlrP3炎症小体促进乙型肝炎病毒相关性肾炎足细胞焦亡

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中华肾脏病杂志 2023年第1期39卷 20-31页

作者：余亚妮陈月琪李保爽杨小倩冯墨宣蒋伟青岛大学附属医院肾内科青岛266003

目的探讨微RNA(microRNA,miRNA)⁃223在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBV X protein,HBx)诱导的HBV相关性肾炎(HBV⁃associated glomerulonephritis,HBV⁃GN)足细胞焦亡中的潜在功能及相关机制。方法采用人肾足细胞中过表达HBx基因来模拟HBV⁃GN的发病机制。实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测焦亡相关蛋白[核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide⁃binding oligomerization domain⁃like receptor protein 3,nlrP3)、胱天蛋白酶1(Caspase⁃1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis⁃associated speck⁃like protein containing a CARD,ASC)]及炎性因子[白细胞介素1β、白细胞介素18]mRNA和蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA⁃223的下游靶标;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞焦亡情况;免疫荧光检测足细胞损伤标志物Desmin和Nephrin的表达;Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化;酶联免疫吸附测定检测Caspase⁃1活性。将足细胞分为以下9组:对照组(不予特殊处理)、空质粒组(转染空质粒)、HBx过表达组(转染HBx过表达慢病毒)、HBx过表达+miRNA⁃223 mimic组(共转染HBx过表达慢病毒和miRNA⁃223模拟物)、HBx过表达+miRNA⁃223 inhibitor组(共转染HBx过表达慢病毒和miRNA⁃223抑制剂)、HBx过表达+miRNA⁃223 mimic+nlrP3组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223模拟物和nlrP3过表达质粒)、HBx过表达+miRNA⁃223 mimic+nlrP3 siRNA组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223模拟物和nlrP3 siRNA)、HBx过表达+miRNA⁃223 inhibitor+nlrP3组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223抑制剂和nlrP3过表达质粒)、HBx过表达+miRNA⁃223 inhibitor+nlrP3 siRNA组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223抑制剂和nlrP3 siRNA)。结果与对照组相比,HBx过表达组miRNA⁃223表达较低(PnlrP3减弱HBx过表达引起的足细胞损伤和焦亡(PnlrP3是miRNA⁃223的下游靶点之一。功能回复实验证明,nlrP3过表达削弱了miRNA⁃223对足细胞损伤的保护作用(P3 mimic和nlrP3 siRNA的共同加入使HBx过表达诱导升高的nlrP3炎症小体及炎性因子表达下降,焦亡细胞数量减少(均P3 inhibitor和nlrP3过表达质粒则使足细胞中nlrP3炎症小体和炎性因子的表达上调,Caspase⁃1活性升高,焦亡细胞数量增加(均P3靶向nlrP3炎症小体促进HBV⁃GN足细胞焦亡。miRNA⁃223有望成为治疗HBV⁃GN的潜在靶点。

关键词：乙型肝炎病毒微RNAs nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3 足细胞焦亡乙型肝炎病毒相关性肾炎

Nod样受体蛋白3炎性小体的代谢调控及其在肾脏疾病中的作用

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中华肾脏病杂志 2023年第4期39卷 305-311页

作者：王敏黄照辉朱永红李鑫刘悦何萍马天魁范秋灵中国医科大学附属第一医院肾内科沈阳110001 中国医科大学附属第四医院肾内科沈阳110032 中国医科大学附属第一医院肿瘤生物治疗室沈阳110001 上海交通大学医学院附属第一人民医院肾内科上海200080

近年来随着代谢重编程领域研究的不断深入,人们对免疫细胞生物学效应的认识发生了转变,即在炎性反应刺激下,免疫细胞重新调控其代谢和生物能量学,提供细胞生存的能量和底物,启动免疫效应功能。Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein... 详细信息

近年来随着代谢重编程领域研究的不断深入,人们对免疫细胞生物学效应的认识发生了转变,即在炎性反应刺激下,免疫细胞重新调控其代谢和生物能量学,提供细胞生存的能量和底物,启动免疫效应功能。Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,nlrP3)炎性小体作为先天免疫系统的重要组成部分,已被证明可以感知如尿酸和胆固醇晶体等代谢物,并可被代谢产物酮体所抑制;也受线粒体活性氧和糖酵解成分(如己糖激酶)的调节。最近的研究表明,多种代谢途径汇聚为nlrP3炎性小体的有效调控因子。该文综述了nlrP3炎性小体激活的代谢调节途径和特异性,以及其在肾脏疾病中的作用。

关键词：糖酵解炎性体 nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3 柠檬酸循环新陈代谢

nlrP3在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系

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中华麻醉学杂志 2023年第2期43卷 206-209页

作者：李翠董树安宋凯李香云杜诗涵余剑波天津医科大学南开临床学院(天津市南开医院)麻醉科和重症医学科天津300100

目的评价核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nlrP3)在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只,6~8周龄,体质量18~22 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症... 详细信息

目的评价核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nlrP3)在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只,6~8周龄,体质量18~22 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+nlrP3抑制剂MCC950组(SAE+MCC950组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+MCC950组小鼠造模后1 h时腹腔注射MCC95020 mg/kg,余组注射等容量生理盐水。造模后1 d时行旷场实验,记录站立次数和中央区停留时间;造模后2~3 d行新物体识别实验,记录探索指数。造模后3 d行为学实验结束后,处死小鼠取脑海马组织,采用Western blot法检测nlrP3的表达,采用免疫荧光技术计数nlrP3与小胶质细胞特异性离子钙结合衔接分子1(Iba-1)共表达细胞,采用ELISA法检测caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量。结果与Sham组比较,SAE组和SAE+MCC950组站立次数减少,中央区停留时间缩短,探索指数降低,海马nlrP3表达上调,nlrP3^(+)-Iba-1^(+)细胞计数增加,caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量升高(PnlrP3表达下调,nlrP3^(+)-Iba-1^(+)细胞计数减少,caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量降低(PnlrP3参与了小鼠脓毒症相关性脑病的发生,与其介导小胶质细胞焦亡有关。

关键词： nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3 脓毒症相关性脑病小神经胶质细胞细胞焦亡

下丘脑外侧区星形胶质细胞nlrP3在小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为中的作用

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中华麻醉学杂志 2023年第8期43卷 981-985页

作者：张冬雪苗慧涛宋荣欣李汶广贾世艳沧州市中心医院老年医学科沧州061000 河北省中西医结合骨关节病重点实验室沧州061000 河北省沧州中西医结合医院麻醉科沧州061000 河北医科大学研究生院石家庄050011

目的:评价下丘脑外侧区星形胶质细胞NOD样受体相关蛋白3(nlrP3)在小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为中的作用。方法:清洁级雄性C57BL/6小鼠48只,10周龄,体质量25~30 g,采用随机数字表法分为4组( n=12):假手术组(C组)、失血性休克复苏组(H... 详细信息

目的:评价下丘脑外侧区星形胶质细胞NOD样受体相关蛋白3(nlrP3)在小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为中的作用。方法:清洁级雄性C57BL/6小鼠48只,10周龄,体质量25~30 g,采用随机数字表法分为4组( n=12):假手术组(C组)、失血性休克复苏组(H组)、失血性休克复苏+腺病毒组(HI组)和失血性休克复苏+对照腺病毒组(HIV组)。H组、HI组和HIV组小鼠通过股静脉放血-回输法建立失血性休克复苏模型;建模前21 d时,HI组小鼠在立体定位仪引导下向双侧下丘脑外侧区注射AAV-GfaABC1D-EGFP-Cre腺病毒,HIV组注射AAV-GfaABC1D-EGFP对照腺病毒。复苏后14 d时,采用埋珠实验和高架十字迷宫实验评估焦虑样行为;行为学实验结束后立即处死小鼠,取含有下丘脑外侧区的脑组织,采用免疫荧光染色法,测定紫藤凝集素荧光强度反映细胞外基质表达,测定nlrP3和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共定位情况,计算cleaved caspase-1/GFAP、IL-18/GFAP阳性细胞数占总细胞的百分比。结果:与C组比较,H组、HI组和HIV组埋珠数量减少,开放臂停留时间百分比降低,下丘脑外侧区细胞外基质表达下调,cleaved caspase-1/GFAP和IL-18/GFAP阳性细胞百分比增加,HI组nlrP3与GFAP共定位系数降低( PnlrP3与GFAP共定位系数降低,cleaved caspase-1/GFAP和IL-18/GFAP阳性细胞百分比降低( P0.05)。结论:小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为与下丘脑外侧区星形胶质细胞nlrP3诱发焦亡,减少细胞外基质有关。

关键词：休克,出血性复苏术焦虑下丘脑区,侧星形细胞 nlr家族,热蛋白结构域包含蛋白3