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外泌体miR-125a-5p对nih/3t3细胞增殖和凋亡的影响

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环境与职业医学 2019年第7期36卷 669-675页

作者：张建会王永星郝长付于兴浩黄婼旋魏静静杨果姚武郑州大学公共卫生学院尘肺病教研室

[背景]矽肺发生涉及多细胞、多因子的变化和相互作用,其中成纤维细胞是肺纤维过程中关键的效应细胞。近年来研究发现,成纤维细胞的增殖除了受转化生长因子-β等细胞因子的调节之外,外泌体作为细胞间信号的载体也在其中发挥重要的作用。... 详细信息

[背景]矽肺发生涉及多细胞、多因子的变化和相互作用,其中成纤维细胞是肺纤维过程中关键的效应细胞。近年来研究发现,成纤维细胞的增殖除了受转化生长因子-β等细胞因子的调节之外,外泌体作为细胞间信号的载体也在其中发挥重要的作用。外泌体mi RNAs介导的细胞间信号可能在Si O2诱导的成纤维细胞转分化和增殖中发挥作用。前期研究发现mi R-125a-5p是一条差异表达的miRNAs。[目的]探讨外泌体miR-125a-5p对小鼠胚胎成纤维细胞nih/3t3增殖和凋亡的影响。[方法]培养RAW264.7细胞,收取上清提取外泌体,并采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和Western blot对其进行鉴定。设立对照组和SiO2组(100μg/mL SiO2),观察SiO2粉尘对RAW264.7细胞外泌体及其中miR-125a-5p表达的影响。建立RAW264.7与nih/3t3的共培养模型,分为对照组、SiO2组(100μg/mL)和外泌体组(10μg/mL外泌体作用于nih/3t3,并且该组无RAW264.7),24、48 h时采用Western blot和CCK-8检测nih/3t3细胞Ⅰ型胶原(collagenⅠ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和增殖活性。培养nih/3t3细胞,分为模拟剂组、抑制剂组和对照组,于转染24、48 h后收集细胞,采用荧光定量PCR、CCK-8和流式细胞术分别检测nih/3t3细胞中mi R-125a-5p的表达、细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡的情况。[结果]透射电镜下观察到外泌体具有圆形或茶托样的膜结构。纳米颗粒跟踪分析结果显示外泌体呈聚团或散在分布,粒径大多在30~150 nm。Western blot可检测到外泌体膜标志蛋白tSG101、Alix,未检测到内质网蛋白calnexin。与对照组相比,SiO2粉尘刺激后RAW264.7细胞外泌体含量增多;外泌体膜标志蛋白tSG101和Alix相对表达量升高;mi R-125a-5p的相对表达量上升(P nih/3t3细胞转染24 h和48 h后,与对照组比较,模拟剂组mi R-125a-5p相对表达量上升至82.969±5.570和64.934±19.972(对照组为1.000)(P 35)%和(2.99%±0.61)%[对照组分别为(6.30±0.87)%和(6.67±0.59)%],凋亡率下降至(23.15±4.21)%和(19.20±4.75)%[对照组为(35.15±3.65)%和(37.09±3.52)%](P 38±0.003(P 33%和25.13%,G2/M期细胞数目上升至(10.72±2.06)%和(15.67±2.12)%,凋亡率上升至(50.23±4.06)%和(57.38±3.72)%(P nih/3t3细胞增殖并抑制凋亡。

关键词： miR-125a-5p 外泌体增殖凋亡 RAW264.7 nih/3t3

人apoE_7基因在nih/3t3细胞中瞬时及稳定表达

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中国医学科学院学报 1998年第2期20卷 138-143页

作者：孙明增琦祖和潘燕中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的为了探索人apoE_7基因受控于异源启动子Mt-I时,能否在鼠类细胞中表达。方法自10.3 kb人apoE_7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE_7基因组DNA片段(60 kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(Mt-I)重组,构建pME_7真核表达质粒,用Lipofectamin... 详细信息

目的为了探索人apoE_7基因受控于异源启动子Mt-I时,能否在鼠类细胞中表达。方法自10.3 kb人apoE_7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE_7基因组DNA片段(60 kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(Mt-I)重组,构建pME_7真核表达质粒,用Lipofectamine转染nih/3t3细胞。结果瞬时表达结果表明,重组pME_7质粒能够在nih/3t3细胞中表达。稳定表达的结果则表明,人apoE_7基因的表达水平与其整合到宿主细胞基因组的拷贝数密切相关。ELISA测定结果显示,人apoE_7基因在nih/3t3细胞中可以进行正确的转录剪切和翻译加工,合成有生物活性的人apoE_7蛋白;研究结果还表明:重金属可以诱导增强人apoE_7基因的高效表达,诱导后表达水平提高45%～60%。结论人apoE_7基因的表达不仅局限于人类的组织细胞,也可以在鼠类组织细胞中表达;而且Mt-I启动子能够诱导表达人apoE_7基因,为人apoE_7转基因小鼠模型的建立奠定了基础。

关键词：真核表达质粒 apoE7基因 Mt-I启动子 nih/3t3

苦参素对nih/3t3成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响

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上海医学 2005年第1期28卷 46-48页

作者：熊伍军邱德凯同济大学附属东方医院消化内科上海200120 上海第二医科大学附属仁济医院上海消化疾病研究所

　目的　观察苦参素对nih/3t3成纤维细胞增殖及其细胞外基质 (ECM)合成的影响,探讨苦参素抗肝纤维化的可能作用机制。方法　采用噻唑蓝比色法、流式细胞技术检测苦参素对nih/3t3成纤维细胞增殖及细胞周期的影响,采用放射免疫方法检测苦... 详细信息

　目的　观察苦参素对nih/3t3成纤维细胞增殖及其细胞外基质 (ECM)合成的影响,探讨苦参素抗肝纤维化的可能作用机制。方法　采用噻唑蓝比色法、流式细胞技术检测苦参素对nih/3t3成纤维细胞增殖及细胞周期的影响,采用放射免疫方法检测苦参素对其合成透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ C)等ECM的影响。结果　苦参素可抑制nih/3t3成纤维细胞的增殖,减少S期细胞,降低细胞增殖指数,抑制ECM的合成,并呈剂量依赖关系。结论　苦参素可能通过影响成纤维细胞的增殖、抑制成纤维细胞的分裂和ECM的合成发挥其抗肝纤维化作用。

关键词：苦参素 nih/3t3 成纤维细胞增殖细胞外基质 ECM 影响抑制细胞增殖指数流式细胞技术分裂

基因转移人tGF-β_1在nih/3t3细胞中表达鉴定

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第三军医大学学报 2000年第1期22卷 68-71页

作者：李勇韩本立王会信龙建银李昆第三军医大学附属西南医院肝胆外科中心重庆400038 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

目的 :基因转移人转化生长因子β1(tGF β1)在真核细胞系中蛋白表达。方法 :借助真核质粒表达载体 ,将人tGF β1 转移入小鼠成纤维细胞株(nih/3t3)细胞中 ,经G418筛选 ,克隆扩增 ,Southernblot、Northernblot、PCR、Rt PCR鉴定 ,并经水... 详细信息

目的 :基因转移人转化生长因子β1(tGF β1)在真核细胞系中蛋白表达。方法 :借助真核质粒表达载体 ,将人tGF β1 转移入小鼠成纤维细胞株(nih/3t3)细胞中 ,经G418筛选 ,克隆扩增 ,Southernblot、Northernblot、PCR、Rt PCR鉴定 ,并经水貂肺上皮细胞(CCL 64)生长抑制法 ,对克隆细胞分泌tGF β1 蛋白进行活性检测。结果 :证实了重组人tGF β1 基因在nih/3t3细胞基因组中的稳定重组和mRNA水平的表达 ,tGF β1 蛋白活性检测及流式细胞仪免疫荧光测定结果 ,均证实了克隆细胞表达并分泌tGF β1 蛋白。结论 :通过基因转移方法成功地在nih/3t3细胞中重组并表达人tGF β1 蛋白 ,PCR结果还提示nih/3t3细胞系基因组中无人tGF β1 序列存在。

关键词：转化生长因子β1 载体成纤维细胞株 nih/3t3

tPA对nih/3t3细胞转化和DNA合成的影响

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四川大学学报(医学版) 1984年第4期15卷 313-317页

作者：徐刚白绍槐唐平陈晓禾雷幼导崔联和四川医学院肿瘤研究所四川医学院基础课程部同位素室

本文报告在密闭培养条件下,nih/3t3细胞经致癌剂MCA启动,再用促癌剂tPA促进,可获得较高的转化克隆率,细胞DNA的合成先抑制、后增强,与预期结果符合。说明用密闭培养法作细胞体外短期转化试验,具有条件简单、不易污染、观察方便、结果稳... 详细信息

本文报告在密闭培养条件下,nih/3t3细胞经致癌剂MCA启动,再用促癌剂tPA促进,可获得较高的转化克隆率,细胞DNA的合成先抑制、后增强,与预期结果符合。说明用密闭培养法作细胞体外短期转化试验,具有条件简单、不易污染、观察方便、结果稳定、易于推广等优点。

关键词：细胞转化促进作用 tPA nih/3t3 细胞 DNA

血小板生成素基因在nih/3t3细胞中的表达与调控

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中国生物化学与分子生物学报 2000年第3期16卷 312-317页

作者：伏爽程康陆爱丽魏旭东王申五王德炳 *** 北京医科大学人民医院血液病研究所北京100044 北京医科大学生物化学与分子生物学系北京100083

应用 tet- On基因表达系统 ,调控血小板生成素 (tPO)基因在 nih/3t3细胞中的表达时间与水平 .籍脂质体介导的基因转移方法 ,p tet- On质粒转染 nih/3t3细胞株 ,得到稳定细胞株nih/3t3- tet- On.p tRE/tPO与 p tK- Hyg质粒共转染 nih/3t3... 详细信息

应用 tet- On基因表达系统 ,调控血小板生成素 (tPO)基因在 nih/3t3细胞中的表达时间与水平 .籍脂质体介导的基因转移方法 ,p tet- On质粒转染 nih/3t3细胞株 ,得到稳定细胞株nih/3t3- tet- On.p tRE/tPO与 p tK- Hyg质粒共转染 nih/3t3- tet- On细胞株 ,得到双稳定细胞株 nih/3t3- tet- On- tPO.在培养基中加入或不加强力霉素 ,Rt- PCR、Western印迹及 ELISA法检测培养上清 tPO表达 .结果表明 ,当培养基中不加强力霉素时 ,tPO无明显表达 (0 .1 μg/L) ;当培养基中加入 2 mg/L强力霉素时 ,tPO表达明显增高 (1 0 .8μg/L) .tPO表达水平与强力霉素浓度有关 ,随强力霉素浓度增高 ,tPO表达增加 .tPO表达水平还与强力霉素作用时间有关 ,加入强力霉素 6 h后 ,tPO表达明显增加 (1 .2μg/L) ,随培养时间延长 ,tPO表达增加 ,2 4 h达到峰值(1 0 .8μg/L) ,而且这种诱导作用是可逆的 .为进一步进行 tPO基因表达调控的体内研究奠定基础 ,有望为

关键词：基因表达调控 nih/3t3 tPO 强力霉素基因治疗

煤焦油对小鼠nih/3t3细胞间隙连接通讯影响的研究

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工业卫生与职业病 2010年第1期36卷 29-32页

作者：陈丽丽王玥吴永会哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150081

目的探讨煤焦油对小鼠肺成纤维细胞(NI H/3t3)的细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法以小鼠NI H/3t3细胞为靶细胞,煤焦油对NI H/3t3细胞GJIC的影响采用划痕标记染料示踪(SLDt)技术测定。结果煤焦油低、中、高剂量(0.1、1.5、22.5μg... 详细信息

目的探讨煤焦油对小鼠肺成纤维细胞(NI H/3t3)的细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法以小鼠NI H/3t3细胞为靶细胞,煤焦油对NI H/3t3细胞GJIC的影响采用划痕标记染料示踪(SLDt)技术测定。结果煤焦油低、中、高剂量(0.1、1.5、22.5μg/ml)作用6 h后,高剂量组与阴性对照组比较,GJIC的平均水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);随着作用时间延长至12 h,各剂量组与阴性对照组比较,GJIC水平再次下降,差异均具有统计学意义(P<0.05),并具有一定剂量-反应关系。结论煤焦油能够抑制GJIC功能。

关键词：细胞间隙连接通讯 nih/3t3 煤焦油

miR-29b过表达对nih/3t3细胞直接靶向作用及细胞功能的影响

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中西医结合肝病杂志 2018年第2期28卷 101-105,I0001页

作者：邓菊红范翔雪陶然宋启琴孔红言焦云桃黄加权华中科技大学同济医学院附属梨园医院内科湖北武汉430077 华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科

目的:研究miR-29b过表达对nih/3t3细胞直接靶向作用及其细胞功能变化的影响。方法:将活化的nih/3t3细胞,分为空白对照(Control)组、miR-29b mimics组、miR-Negative Control(miR-NC)组、tGF-β1组、tGF-β1+miR-29b mimics组、tGF-β1+miR-NC组。采用免疫荧光技术、Rt-PCR及Western Blot检测miR-29b、COL1α1、COL3α1、tIMP-1、MMP-9、HSP47、α-SMA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖。结果:miR-29bmimics组与miR-NC组和Control组比较,miR-29b表达上调,COL1α1及COL3α1mRNA及蛋白表达下调(PtGF-β1+miR-29b mimics组与tGF-β1组、tGF-β1+miR-NC组比较,miR-29b表达明显上调(P3α1、tIMP-1、HSP47、α-SMA mRNA及蛋白均明显下降,MMP-9 mRNA及蛋白均明显升高(PtGF-β1+miR-29b mimics组与tGF-β1组、tGF-β1+miR-NC组比较早期凋亡明显增多,而细胞活力明显下降,与Control组比较差异有统计学意义(P3α1是miR-29b的直接靶向调控分子,体外上调miR-29b表达可抑制tGF-β1致纤维化相关因子表达及细胞活力,并可促进细胞凋亡,为进一步研究体内肝纤维化奠定了基础。

关键词： nih/3t3 microRNA-29b COL1α1 COL3α1 细胞功能

重组人tGF-β1在nih/3t3细胞系中的表达及鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 1996年第6期16卷 441-441页

作者：李勇龙建银韩本立王会信李昆第三军医大学西南医院肝胆外科中心!重庆630038 军事医学科学院基础医学研究所八室!北京