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Construction of curcumin-loaded micelles and evaluation of the anti-tumor effect based on angiogenesis

Acupuncture and Herbal Medicine 2023年第4期3卷 343-356页

作者： Rui Liu Zhongyan Liu Xueli Guo Dereje Kebebe Jiaxin Pi Pan Guo State Key Laboratory of Component-Based Chinese Medicine Tianjin University of Traditional Chinese MedicineTianjinChina Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique Ministry of EducationTianjinChina Haihe Laboratory of Modern Chinese Medicine TianjinChina School of Pharmacy Institute of HealthJimma UniversityJimmaEthiopia

Objective:Inhibition of tumor angiogenesis has become a new targeted tumor therapy.In this study,we established a micellar carrier with a tumor neovascularization-targeting effect modified by the neovascularization-targeting peptide ngr.Methods:The targeted polymer poly(ethylene glycol)-b-poly(lactide-co-glycolide)(PEG-PLGA)modified with Asn–Gly–Arg(ngr)peptide was prepared and characterized by 1H nuclear magnetic resonance and Fourier-transform infrared spectrometry.ngr-PEG-PLGA was used to construct curcumin(Cur)-loaded micelles by the solvent evaporation method.The physicochemical properties of the micelles were also investigated.Additionally,we evaluated the antitumor efficacy of the polymer micelles(PM)using in vitro cytology experiments and in vivo animal studies.Results:The particle size of Cur-ngr-PM was 139.70±2.51 nm,and the drug-loading capacity was 14.37±0.06%.In vitro cytological evaluation showed that ngr-modified micelles showed higher cellular uptake through receptor-mediated endocytosis pathways than did unmodified micelles,leading to the apoptosis of tumor cells.Then,in vivo antitumor experiments showed that the modified micelles significantly inhibited tumor growth and were safe.Conclusions:ngr-modified micelles significantly optimized the therapeutic efficacy of Cur.This strategy offers a viable avenue for cancer treatment.

关键词： Antitumor therapy Curcumin(Cur) Micelles ngr Tumor angiogenesis

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Nogo-A aggravates oxidative damage in oligodendrocytes

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Neural Regeneration Research 2021年第1期16卷 179-185页

作者： Yang-Yang Wang Na Han Dao-Jun Hong Jun Zhang Department of Neurology Peking University People’s HospitalBeijingChina Department of Neurology The First Affiliated Hospital of Nanchang UniversityNanchangJiangxi ProvinceChina

Nogo-A is considered one of the most important inhibitors of myelin-associated axonal regeneration in the central nervous system.It is mainly expressed by oligodendrocytes.Although previous studies have found regulatory roles for Nogo-A in neurite outgrowth inhibition,neuronal homeostasis,precursor migration,plasticity,and neurodegeneration,its functions in the process of oxidative injury are largely uncharacterized.In this study,oligodendrocytes were extracted from the cerebral cortex of newborn Sprague-Dawley rats.We used hydrogen peroxide(H2O2)to induce an in vitro oligodendrocyte oxidative damage model and found that endogenously expressed Nogo-A is significantly upregulated in oligodendrocytes.After recombinant virus Ad-ZsGreen-rat Nogo-A infection of oligodendrocytes,Nogo-A expression was increased,and the infected oligodendrocytes were more susceptible to acute oxidative insults and exhibited a markedly elevated rate of cell death.Furthermore,knockdown of Nogo-A expression in oligodendrocytes by Ad-ZsGreen-shRNA-Nogo-A almost completely protected against oxidative stress induced by exogenous H2O2.Intervention with a Nogo-66 antibody,a LINGO1 blocker,or Y27632,an inhibitor in the Nogo-66-ngr/p75/LINGO-1-RhoA-ROCK pathway,did not affect the death of oligodendrocytes.Ad-ZsGreen-shRNA-Nogo-A also increased the levels of phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2 and inhibited BCL2 expression in oligodendrocytes.In conclusion,Nogo-A aggravated reactive oxygen species damage in oligodendrocytes,and phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2 and BCL2 might be involved in this process.This study was approved by the Ethics Committee of Peking University People’s Hospital,China(approval No.2018PHC081)on December 18,2018.

关键词： BCL2 H2O2 LINGO1 ngr Nogo-A oligodendrocytes phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2 reactive oxygen species

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高压氧联合ngr基因沉默骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

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中国组织工程研究 2022年第1期26卷 12-19页

作者：梅运运张建军王东天津医科大学第四中心临床学院天津市300070 天津市第四中心医院天津市300140

背景:高压氧治疗和Nogo-A/ngr-RhoA/ROCK信号通路的抑制有助于移植细胞的增殖、分化。目的:探讨高压氧联合携带miRNA沉默ngr基因的大鼠骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法:靶向ngr的miRNA重组质粒转染大鼠骨髓间充质... 详细信息

背景:高压氧治疗和Nogo-A/ngr-RhoA/ROCK信号通路的抑制有助于移植细胞的增殖、分化。目的:探讨高压氧联合携带miRNA沉默ngr基因的大鼠骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法:靶向ngr的miRNA重组质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞,RT-qPCR和Western blot检测转染后ngr的表达。80只SD大鼠,随机选取15只大鼠作为假手术组,其余65只大鼠构建脊髓损伤模型,将造模成功的60只大鼠随机分为脊髓损伤组、高压氧组、骨髓间充质干细胞组和高压氧+骨髓间充质干细胞组。骨髓间充质干细胞组和高压氧+骨髓间充质干细胞组于造模24 h后注射5×106个转染重组质粒的大鼠骨髓间充质干细胞(5μL),脊髓损伤组和高压氧组注射等体积的PBS,随后高压氧组和高压氧+骨髓间充质干细胞组接受连续7 d高压氧治疗。细胞移植后采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能,每周1次,连续4周;造模后第4周,检测感觉诱发电位评估神经传导恢复情况,苏木精-伊红染色、TUNEL染色和荧光金逆行追踪观察脊髓组织损伤、细胞凋亡以及轴突再生情况。高压氧治疗后随即对损伤区脊髓组织中Nogo-A、ngr、RhoA、ROCK-1、Lingo-1、p75NTRmRNA相对表达进行RT-qPCR检测。结果与结论:①骨髓间充质干细胞转染后ngr表达明显下降;②造模后2-4周BBB评分:高压氧+骨髓间充质干细胞组>骨髓间充质干细胞组、高压氧组>脊髓损伤组(P0.05);④与脊髓损伤组比较,高压氧组和骨髓间充质干细胞组的神经元数量有所增加,具有轴浆运输能力的轴突数量也明显增多,神经元再生效果明显,凋亡细胞减少,而高压氧+骨髓间充质干细胞组的修复效果优于其他2个治疗组;⑤与脊髓损伤组相比,3个治疗组对Nogo-A/ngr/RhoA-ROCK信号通路相关mRNA相对表达起到明显的抑制作用,骨髓间充质干细胞组与高压氧组差异无显著性意义(P>0.05);⑥结果表明,高压氧联合ngr基因沉默骨髓间充质干细胞移植可抑制Nogo-A/ngrRhoA/ROCK信号通路基因的表达,促进损伤部位轴突再生,改善大鼠电生理及运动功能。

关键词：干细胞骨髓间充质干细胞 miRNA干扰 ngr 高压氧脊髓损伤电生理运动功能

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Olfactory ensheathing cell transplantation and inhibition of NogoA,ngr and RhoA expression in the damaged zone to ameliorate spinal cord injury

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Neural Regeneration Research 2010年第13期5卷 999-1003页

作者： Puwei Yuan Xijing He Guoyu Wang Yangquan Hao Deyu Liu Department of Orthopaedics Affiliated Hospital Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine Xianyang 712046 Shaanxi Province China Second Department of Orthopaedics Second Hospital of Xi'an Jiaotong University Xi'an 710042 Shaanxi Province China

BACKGROUND： Olfactory ensheathing cell （OEC） transplantation promotes repair of spinal cord injury. Neural regeneration inhibits binding of the myelin protein Nogo to its receptor （ngr）, activates downstream inhibitory signal RhoA, and leads to axonal degeneration. OBJECTIVE： To determine the relationship between OECs transplantation for spinal cord injury and NogoA, ngr, and RhoA protein expression in the damaged zone. DESIGN, TIME AND SETTING： A randomized, controlled, animal experiment was performed from September 2006 to May 2007 at the Key Laboratory of Environment and Genes in Xi＇an Jiaotong University School of Medicine, China. MATERIALS： OECs were harvested from healthy, adult, male, Sprague Dawley rats aged 6 months. Mouse anti-rat NogoA, ngr, and RheA monoclonal antibodies were utilized for detection. METHODS： A total of 40 adult Sprague Dawley rats were randomly assigned to four groups： normal, model, OECs, and DF12, with 10 animals in each group. Transverse section spinal cord injury was established in the OECs and DF12 groups, followed by injection of 1μL OECs suspension （1×10^8/mL） or equivalent DF12 medium at 1 mm above and below the injury site. MAIN OUTCOME MEASURES： Immunohistochemistry and Western blot were utilized to detect NogoA, ngr, and RhoA expression in the spinal cord injury lesions. Morphological changes were observed by argyrophilia staining, and lower extremity function of the animals was assessed using Basso, Beattie, and Bresnahan scores. RESULTS： Eight weeks following OECs transplantation, a significant increase in new axons was observed in the OECs group, and nerve fibers crossed the injury site to repair spinal cord injury. Qualitative and quantitative results from the OECs group were superior to the model and DF12 groups. At 8 weeks after transplantation, Basso, Beattie, and Bresnahan scores were significantly greater in the OECs group compared with the model and DF12 groups （P 〈 0.01）, but expression of NogoA, ngr, and RhoA protein was significantly decreased compared with the

关键词： olfactory ensheathing cells NogoA ngr RhoA cell transplantation spinal cord peripheral nerve injury neural regeneration

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^(99)Tc^(m)-DOTA-G3ngr SPECT显像靶向评价抗血管生成药物早期疗效的初步实验研究

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现代肿瘤医学 2023年第24期31卷 4514-4519页

作者：刘松松邱懋灵熊玲张定成陶敏王欣靖功伟韩胜任炳秀遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院)核医学科贵州遵义563000

目的:探究^(99)Tc^(m)标记ngr对CD13阳性表达的肿瘤小鼠模型进行SPECT显像,以期为靶向评价抗血管生成药物早期疗效提供一种直观的影像学方法。方法:用^(99)Tc^(m)标记,制备环形DOTA-G3ngr(DOTA-GGGngrC),再分别以HT-29人结肠腺癌(CD13... 详细信息

目的:探究^(99)Tc^(m)标记ngr对CD13阳性表达的肿瘤小鼠模型进行SPECT显像,以期为靶向评价抗血管生成药物早期疗效提供一种直观的影像学方法。方法:用^(99)Tc^(m)标记,制备环形DOTA-G3ngr(DOTA-GGGngrC),再分别以HT-29人结肠腺癌(CD13表达阴性)和HT-1080人纤维肉瘤(CD13表达阳性)细胞按106/只接种于裸鼠右侧腋下建立荷瘤小鼠模型,以200μCi/只通过腹腔注射^(99)Tc^(m)-DOTA-G3ngr行SPECT显像,采用感兴趣区技术(ROI)对图像进行半定量分析,选择肿瘤作为靶组织(T),对侧肌肉组织作为非靶组织(NT),统计ROI内的总放射性计数计算T/NT比值。结果:DOTA-G3ngr分子量1107.2,^(99)Tc^(m)-DOTA-G3ngr标记率为85%放射化学纯度(radiochemical purity,RCP)达95%以上(97.30±0.76)%(n=4);经室温和37℃(10%FBS,5%CO_(2))条件下,6 h内RCP均在90%以上。HT-1080移植瘤最大T/NT值可达4.23±0.53,且高峰时间出现在注射后4小时,而HT-29移植瘤T/NT值约1.20±0.15,且无明显峰值。通过给予抗血管生成药物(0.5 mg/kg,连续7天后),再注射^(99)Tc^(m)-DOTA-G3ngr显像结果显示HT-1080移植瘤T/NT值出现明显的降低但仍高于HT-29移植瘤(Pngr对CD13具有良性的靶向性和较高的T/NT值,在靶向评估抗血管生成药物早期疗效方面具有潜在应用价值。

关键词： ngr CD13 肿瘤血管生成 SPECT 抗血管生成动物模型

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联合敲低Ptbp1及ngr对PTSD小鼠的行为学影响与机制研究

联合敲低Ptbp1及NgR对PTSD小鼠的行为学影响与机制研究

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作者：刘会林重庆理工大学

学位级别：硕士

目的:创伤后应激障碍(Post-traumatic stress disorder,PTSD)是一种由于经历过重大创伤性事件而引起的严重精神疾病。患者因此出现不断回忆、情感麻木和易怒等症状,这些症状可能会持续数月或数年,并对患者的日常生活造成巨大影响。尽管P... 详细信息

目的:创伤后应激障碍(Post-traumatic stress disorder,PTSD)是一种由于经历过重大创伤性事件而引起的严重精神疾病。患者因此出现不断回忆、情感麻木和易怒等症状,这些症状可能会持续数月或数年,并对患者的日常生活造成巨大影响。尽管PTSD发病机制尚未完全阐明,但有研究证实PTSD患者出现的学习记忆障碍与海马体积缩小、海马神经元丢失和突触可塑性受损有关。Nogo受体(Nogo-66 receptor,ngr)作为髓磷脂相关抑制因子(Myelin-associated inhibitors,MAIs)的共同受体,其介导的MAIs信号通路不仅参与轴突再生的抑制作用,还参与海马突触可塑性调节过程。此外,多聚嘧啶区序列结合蛋白1(Polypyrimidine tract binding protein 1,Ptbp1)已被广泛证实可作为剪接抑制因子参与调控神经元发育过程。Ptbp1表达上调会诱导突触相关基因pre-m RNA发生可变剪接,进而向不利于突触生长和抑制神经元发育的亚型转变。研究表明,Nogo-A也是其选择性剪接的靶基因之一,但现有研究对于Ptbp1如何调控Nogo-A的表达存在争议。我们的前期研究表明敲低Ptbp1后,Nogo-A/ngr表达显著上调。但两者是否对PTSD具有改善效应及其可能的改善机制尚不清楚。因此,本课题采用单一连续刺激(Single-prolonged stress,SPS)法制备PTSD小鼠模型,利用腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)联合敲低Ptbp1及ngr,观察联合敲低Ptbp1及ngr后PTSD小鼠行为学的变化,探讨Ptbp1与ngr在PTSD发生过程中可能的作用机制,为PTSD及相关脑损伤疾病提供新的防治思路。方法:(1)选用8-10周龄SPF级雌性C57BL/6健康小鼠84只,随机分成6组,每组14只。正常对照(Control)组、AAV-Cas Rx-ngr/SPS组、AAV-Cas Rx-Ptbp1/SPS组、AAV-Cas Rx-Ptbp1+ngr/SPS组、AAV-Cas Rx-Lacz/SPS组和PTSD组。应用SPS法制备PTSD小鼠动物模型,AAV-Cas Rx-ngr/SPS组、AAV-Cas Rx-Ptbp1/SPS组、AAV-Cas Rx-Ptbp1+ngr/SPS组和AAV-Cas Rx-Lacz/SPS组分别侧脑室注射AAVCas Rx-ngr病毒、AAV-Cas Rx-Ptbp1病毒、AAV-Cas Rx-Ptbp1+ngr病毒和AAVCas Rx-Lacz空白对照病毒。正常对照(Control)组不做任何处理,PTSD组仅进行SPS造模。(2)采用旷场、高架十字迷宫和Morris水迷宫实验衡量各组实验动物的紧张焦虑程度和学习认知水平。(3)采用HE和Nissl染色,观察各组实验动物海马神经元的形态变化和存活/死亡神经元数目。(4)采用IF检测各组实验动物海马DG区Neu N蛋白的表达水平,观察联合敲低Ptbp1及ngr对PTSD小鼠海马神经元数目的影响。(5)采用IF或Western blot技术检测实验动物海马DG区GAP-43和NF200蛋白的表达量,验证联合敲低Ptbp1及ngr对PTSD小鼠海马神经元轴突再生的影响。(6)采用高尔基染色观察实验动物海马DG区树突的生长变化情况。采用IF和Western blot技术检测实验动物海马DG区突触可塑性标志物Synapsin I的表达变化,探讨联合敲低Ptbp1及ngr对PTSD小鼠海马突触可塑性的影响。结果:(1)应用SPS法制备了PTSD小鼠动物模型,成功构建并包装AAV-Cas Rx-ngr和AAV-Cas Rx-Ptbp1病毒,并通过侧脑室注射成功感染海马区。(2)联合敲低Ptbp1及ngr协同缓解了PTSD小鼠的恐惧焦虑样行为和空间学习记忆缺陷。(3)联合敲低Ptbp1及ngr协同改善了PTSD小鼠海马组织的形态,增加了小鼠海马区存活神经元的数目,对海马神经元具有重要的保护作用。(4)与Control组相比,PTSD组和AAV-Cas Rx-Lacz/SPS组海马区Neu N的荧光强度明显减弱,存活神经元的数目明显减少。联合敲低Ptbp1及ngr减少了PTSD小鼠海马神经元的丢失,神经元特异性标志蛋白Neu N表达显著上调,协同缓解了SPS引发的促凋亡作用。(5)与Control组相比,PTSD组和AAV-Cas Rx-Lacz/SPS组海马区GAP-43和NF200的荧光强度变弱。联合敲低Ptbp1及ngr逆转了轴突再生抑制现象,轴突生长标志物GAP-43和NF200表达量显著增加,减轻了SPS的生长抑制作用。(6)PTSD组和AAV-Cas Rx-Lacz/SPS组海马区树突紊乱,分支少、树突棘密度小,Synapsin I蛋白表达下调。联

关键词：创伤后应激障碍 Ptbp1 ngr 海马神经元轴突再生突触可塑性

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纳米载体介导的人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用及端粒酶表达的影响

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中华肿瘤杂志 2008年第8期30卷 566-572页

作者：王瑾张振中周天洋刘宇琼李惠翔郑州大学第一附属医院病理科河南省肿瘤病理重点实验室 450052 郑州大学药学院

目的探讨纳米载体介导的人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因反义寡核苷酸（ASODN）在体内外对食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用及端粒酶表达的影响。方法制备线型聚乙烯亚胺（L-PEI）／ASODN纳米级复合物及ngr修饰的L-PEI／ASODN靶向纳米复... 详细信息

目的探讨纳米载体介导的人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因反义寡核苷酸（ASODN）在体内外对食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用及端粒酶表达的影响。方法制备线型聚乙烯亚胺（L-PEI）／ASODN纳米级复合物及ngr修饰的L-PEI／ASODN靶向纳米复合物，转染人食管癌细胞系EC9706。采用激光共聚焦显微镜观察细胞对纳米复合物的摄人情况，通过二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测细胞抑制率，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组化法分别检测hTERT mRNA和蛋白的表达情况，Annexin V-FITC／PI双标法检测凋亡细胞。通过体内药物分布实验和抑瘤实验观察ngr的靶向肿瘤细胞作用、裸鼠移植瘤的生长情况、组织形态学和超微形态学改变。结果共聚焦显微镜观察可见，L-PEI可以保护hTERT ASODN有效进入细胞核内；N／P=10、ASODN终浓度40μg／ml的L-PEI／ASODN复合物转染细胞后24、48、72和96h，增殖抑制率分别为45．6％、55．8％、67．0％和83．1％；L-PEI／ASODN转染组hTERT mRNA水平明显降低，hTERT条带与内对照条带灰度值的比值为0．27±0．04，与空白对照组、ASODN转染组和L-PEI／SODN转染组相比，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。hTERT蛋白不表达；转染48h后，L-PEI／ASODN转染组细胞凋亡明显，早期凋亡率和晚期凋亡率分别为38．0％和52．2％。ngr修饰的L-PEI／ASODN-FAM纳米复合物注射于荷瘤小鼠，其靶向肿瘤作用明显；给药8d后，ngr／L-PEI／ASODN静脉给药组和皮下给药组的肿瘤体积均明显小于生理盐水组和ngr／L-PEI／SODN组（均P〈0．05）；超微结构观察可见典型凋亡小体。结论ngr修饰、L-PEI介导下的hTERT ASODN可抑制EC9706细胞的增殖，降低其端粒酶的表达，还可有效到达裸鼠人食管癌移植瘤内，抑制肿瘤的生长。

关键词：聚乙烯亚胺端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸 ngr 食管癌细胞系EC9706

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ngr在新生大鼠少突胶质前体细胞系的表达和缺氧缺血后变化的意义

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中国当代儿科杂志 2007年第5期9卷 445-448页

作者：唐军姚裕家钟琳四川大学华西第二医院儿科四川成都610041

目的观察ngr在新生大鼠少突胶质前体细胞系(OLPs)的表达和细胞定位,以及缺氧缺血(OGD)损伤后的表达变化,探讨其在OLPs损伤后再生抑制中的作用。方法采用改良振荡分离纯化法体外培养OLPs,采用其特异性抗体A2B5、O4和O1作细胞鉴定;用ngr... 详细信息

目的观察ngr在新生大鼠少突胶质前体细胞系(OLPs)的表达和细胞定位,以及缺氧缺血(OGD)损伤后的表达变化,探讨其在OLPs损伤后再生抑制中的作用。方法采用改良振荡分离纯化法体外培养OLPs,采用其特异性抗体A2B5、O4和O1作细胞鉴定;用ngr抗体检测其在OLPs表达。用含连二亚硫酸钠的无糖培养基制作OLPs OGD模型,MTT法检测各组细胞存活率;用免疫荧光法和免疫印迹法观察ngr在细胞OGD后的变化。结果OLPs在分离纯化培养后的第1,2和4天均表达ngr,阳性表达位于胞体及突起;细胞OGD后10min,ngr表达出现增强,30min后明显升高,与对照组比较差异具有显著性(均P(0.05);MTT结果显示,OGD30min,细胞存活率较对照组显著降低(P(0.05)。结论OLPs胞体及突起上均表达ngr;OGD后ngr表达明显增强,细胞存活率显著降低,提示ngr可能参与OGD后OLPs的再生抑制过程。

关键词： ngr 少突胶质前体细胞细胞培养缺氧缺血损伤再生抑制新生大鼠

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兔抗Nogo-66受体(ngr)LRR片段抗体的制备和鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 633-635页

作者：于盼盼朱慧琴陆佩华黄立东上海交通大学医学院神经生物学实验室上海200025

目的:制备兔抗Nogo66受体(ngr)片段LRR的抗体,并进行特性鉴定。方法:采用原核系统表达大鼠ngr的LRR片段,经纯化后免疫新西兰兔制备抗LRR的抗体,分别用Westernblot、免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性。结果:获得高效价的兔抗大鼠LR... 详细信息

目的:制备兔抗Nogo66受体(ngr)片段LRR的抗体,并进行特性鉴定。方法:采用原核系统表达大鼠ngr的LRR片段,经纯化后免疫新西兰兔制备抗LRR的抗体,分别用Westernblot、免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性。结果:获得高效价的兔抗大鼠LRR的抗体,该抗体能够识别大鼠脑和脊髓组织中的ngr分子。脊髓切片的免疫组化染色结果显示,ngr分子在神经元中广泛表达。结论:制备出能特异性识别天然ngr分子的抗体,为检测ngr分子并进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：神经再生 ngr 抗体兔

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新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织ngr mRNA和ngr蛋白表达及意义

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四川大学学报（医学版） 2007年第1期38卷 68-72页

作者：王华姚裕家陈大鹏四川大学华西第二医院新生儿科成都610041

目的观察N gR mRNA及N gR蛋白在缺氧缺血新生鼠脑组织中表达量的变化,并探讨其意义。方法采用经右侧颈总动脉结扎加缺氧处理7日龄SD大鼠制作缺氧缺血脑损伤(H IBD)模型,应用RT-PCR方法检测H IBD新生鼠脑组织N gR mRNA表达的变化;免疫组... 详细信息

目的观察N gR mRNA及N gR蛋白在缺氧缺血新生鼠脑组织中表达量的变化,并探讨其意义。方法采用经右侧颈总动脉结扎加缺氧处理7日龄SD大鼠制作缺氧缺血脑损伤(H IBD)模型,应用RT-PCR方法检测H IBD新生鼠脑组织N gR mRNA表达的变化;免疫组织化学方法检测N gR蛋白的分布及含量变化;W estern B lot检测N gR蛋白含量变化。结果H IBD新生SD大鼠脑中N gR mRNA与对照组相比,6 h开始升高,12 h达到峰值,24 h有所下降但仍持续在较高水平(P均<0.05);免疫组织化学方法观察到N gR蛋白在正常新生SD大鼠脑中分布广泛,大脑皮层及海马均有较多N gR分布;免疫组织化学方法和W estern B lot方法均发现H IBD新生SD大鼠脑中N gR蛋白6 h开始升高,24 h达到高峰,72 h仍持续在较高水平(P均<0.05),随即开始下降,与对照组的差异无统计学意义。结论缺氧缺血性损伤时,N gR mRNA和N gR蛋白含量升高与抑制神经元再生有一定关系,随即出现的含量下降可能与神经元细胞随缺氧缺血时间延长而出现坏死,数量进一步减少,进而使在神经元上表达的N gR随之减少有一定关系。

关键词： ngr RT-PCR 免疫组化 Western Blot

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